腎透明細(xì)胞癌中KIF4A的表達(dá)及其對(duì)患者術(shù)后生存的預(yù)測(cè)價(jià)值

鄭鵬毅 高中偉 李文勝 李會(huì)兵 肖 飛 王曉輝 王凱旋 李志軍

腎臟腫瘤是臨床較常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)生率在人類泌尿系統(tǒng)腫瘤中排名第3位，占惡性腫瘤的3%[1]。腎透明細(xì)胞癌是腎臟腫瘤中較常見(jiàn)的一種，其發(fā)生率主要集中在年齡50～70歲[2]。據(jù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)[3]，腎透明細(xì)胞癌發(fā)病率中男性高于女性，且最近幾年呈遞升趨勢(shì)。目前關(guān)于腎透明細(xì)胞癌發(fā)生機(jī)制尚未完全明確，與遺傳、吸煙、肥胖和污染等因素有關(guān)。大部分腎透明細(xì)胞癌患者早期無(wú)明顯癥狀，30%的患者確診時(shí)已發(fā)生轉(zhuǎn)移或發(fā)展[4]。近期關(guān)于分子在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生和發(fā)展的研究逐漸增加，有利于揭示其發(fā)生機(jī)制[5]。驅(qū)動(dòng)蛋白超家族成員 4A(KIF4A)是染色體驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員之一，在前列腺癌、肝癌中均表達(dá)異常，且表達(dá)程度與其病情呈負(fù)相關(guān)，但是否在腎透明細(xì)胞癌中表達(dá)尚未完全明確。本文選擇醫(yī)院2012年1月至2016年12月收治的腎透明細(xì)胞癌患者70例,分析KIF4A的表達(dá)情況對(duì)根治性腎切除術(shù)后患者生存的預(yù)測(cè)價(jià)值，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇醫(yī)院2012年1月至2016年12月收治的腎透明細(xì)胞癌患者70例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合歐洲泌尿外科學(xué)會(huì)(EAU)腎癌指南(2020)關(guān)于腎透明細(xì)胞癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；②病理診斷確診患者；③依從性較好的患者；④患者知情同意；⑤未接受手術(shù)、放化療的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝腹水患者；②抑郁癥患者；③合并嚴(yán)重性基礎(chǔ)疾病患者；④妊娠期、哺乳期患者；⑤合并其他惡性腫瘤的患者；⑥80歲以上患者。男性45例，女性25例，年齡最小23歲，最大79歲，平均(43.64±7.43)歲，病程最短6個(gè)月，最長(zhǎng)7年，平均(4.69±1.01)年。所有患者接受根治性腎切除術(shù)治療，由同一手術(shù)團(tuán)隊(duì)完成手術(shù)。隨訪5年，統(tǒng)計(jì)患者生存時(shí)間。

1.2 方法

1.2.1 KIF4A表達(dá)檢測(cè) 術(shù)中獲取癌組織和癌旁組織(距離腫瘤3 cm)，石蠟包埋，連續(xù)切片后制成石蠟切片，置入烤箱中烘烤2 h，溫度為65攝氏度。經(jīng)常規(guī)脫蠟和脫水，使用檸檬酸鹽緩沖液洗滌，進(jìn)行抗原修復(fù)。接著滴入兔抗人KIF4A 多克隆抗體后將放入免疫組化濕化盒中，4℃孵育12 h 后所有切片室溫放置30 min，PBS 沖洗3 次，每次5 min。繼續(xù)于切片組織上滴加二抗孵育30 min，PBS漂洗3次，每次5 min。進(jìn)行蘇木精再次復(fù)染。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕色顆粒。使用PBS代替一抗，作為陰性對(duì)照組。每張片切在400倍光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野，計(jì)算200個(gè)細(xì)胞染色情況。采用評(píng)分方式進(jìn)行評(píng)定，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：9～12分。

1.2.2 臨床病理特征收集 查看患者病案信息，統(tǒng)計(jì)患者的性別、年齡、臨床分期、Fuhrman核分級(jí)、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況。

1.2.3 評(píng)價(jià)分析方法 分析癌組織和癌旁組織中KIF4A陽(yáng)性表達(dá)情況及KIF4A表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系，探討KIF4A表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 腎透明細(xì)胞癌組織和癌旁組織中KIF4A陽(yáng)性表達(dá)情況

腎透明細(xì)胞癌組織中KIF4A陽(yáng)性率為54.28%(38/70)，高于癌旁組織14.29%(10/70)(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.632,P<0.001)。

2.2 腎透明細(xì)胞癌KIF4A表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

KIF4A表達(dá)與年齡、臨床分期、Fuhrman核分級(jí)、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與性別無(wú)關(guān)，見(jiàn)表1。

表1 腎透明細(xì)胞癌KIF4A表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系分析/例

2.3 腎透明細(xì)胞癌 KIF4A表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響

隨訪5年，KIF4A陰性表達(dá)患者平均生存時(shí)間為(47.69±6.02)個(gè)月，陽(yáng)性表達(dá)患者平均生存時(shí)間為(30.59±4.05)個(gè)月。KIF4A陰性表達(dá)患者平均生存時(shí)間長(zhǎng)于陽(yáng)性表達(dá)患者(P<0.05)。KIF4A表達(dá)對(duì)預(yù)后有直接影響，其陽(yáng)性表達(dá)與生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 腎透明細(xì)胞癌 KIF4A表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系分析

3 討論

腎癌臨床較常見(jiàn)，占成人惡性腫瘤2%，其中腎透明細(xì)胞癌是其主要病理類型[6-9]。以往研究結(jié)果顯示[10-11]，轉(zhuǎn)移的腎透明細(xì)胞癌患者5年生存率不足10%。20%～30%患者術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。腎透明細(xì)胞癌早期無(wú)明顯特異性癥狀，就診時(shí)大部分患者已是中晚期，錯(cuò)失最佳手術(shù)時(shí)機(jī)。由于腎透明細(xì)胞癌對(duì)化療不敏感，因此療效不佳[12-14]。臨床需要尋找其他有效治療手段，其中對(duì)現(xiàn)代分子學(xué)的發(fā)展研究發(fā)現(xiàn)，多種生物學(xué)分子參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[15-17]。KIF4A位于人染色體Xq13.1，是一種由1232個(gè)氨基酸構(gòu)成相對(duì)分子量為140000的蛋白。既往研究結(jié)果顯示[18]，KIF4A是基于微管的運(yùn)動(dòng)蛋白，其N末端為高度保守的ATP酶結(jié)合區(qū)域，中間區(qū)域是較長(zhǎng)的α螺旋結(jié)構(gòu)，C 末端為富含半胱氨酸的球狀結(jié)構(gòu)。Mani N 等[19]發(fā)現(xiàn)，KIF4A蛋白分子參與了細(xì)胞分裂和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)等活動(dòng)，并參與DNA修復(fù)的同時(shí)在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)展和維持遺傳穩(wěn)定性方面上發(fā)揮重要作用。有研究[20-23]顯示，KIF4A陽(yáng)性表達(dá)能保持細(xì)胞正?；顒?dòng)，有利于預(yù)后。

本文研究結(jié)果顯示，腎透明細(xì)胞癌組織KIF4A陽(yáng)性率高于癌旁組，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該研究結(jié)果認(rèn)為KIF4A在腎透明細(xì)胞癌中表達(dá)較高。同時(shí)，KIF4A表達(dá)在年齡、臨床分期、Fuhrman核分級(jí)、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移上不同，其中≥60歲、臨床分期(TNM)Ⅲ～Ⅳ期、Fuhrman核分級(jí)G3～G4、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、≥7cm腫瘤患者的KIF4A陽(yáng)性表達(dá)率較高，而陰性表達(dá)率較低。KIF4A陽(yáng)性表達(dá)患者平均生存時(shí)間少于陰性表達(dá)患者。KIF4A表達(dá)對(duì)預(yù)后有直接影響，其陽(yáng)性表達(dá)與生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，其具體原因尚未完全明確，但認(rèn)為該蛋白在判斷腎透明細(xì)胞癌術(shù)后預(yù)后有一定的潛在價(jià)值。

綜上所述，腎透明細(xì)胞癌中KIF4A表達(dá)在預(yù)測(cè)術(shù)后生存情況上有一定的潛在價(jià)值，但因研究結(jié)果尚存爭(zhēng)議，需要進(jìn)一步探討。