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    狹葉小金梅草組織培養(yǎng)與快速繁殖

    2020-06-02 07:50:44李洪林鐘志祥胡光萬
    亞熱帶植物科學(xué) 2020年2期
    關(guān)鍵詞:仙茅球莖小金

    李洪林,鐘志祥,謝 娟,胡光萬

    (中國科學(xué)院武漢植物園,湖北 武漢 430074)

    近幾十年來,人們對仙茅科(Hypoxidaceae,APG分類系統(tǒng))植物識別、栽培和藥用價值方面的研究較多,也取得較大進(jìn)展,但僅局限在仙茅屬(Curculigo)植物的研究[1—4]。對該科小金梅草屬(Hypoxis)的研究國內(nèi)并不多見,但其價值不容忽視[5]。究其原因,是國內(nèi)這個屬的植物并不多,沒有引起足夠的重視。但是,小金梅草屬植物的藥用價值和用途卻受到世界上其他國家的廣泛關(guān)注[6—11]。

    小金梅草屬植物約100種,廣泛分布于熱帶地區(qū),我國僅 1種[6]。該屬植物具球莖,可在地下躲過生長環(huán)境惡劣的冬季或旱季,直至下一個生長季節(jié)繼續(xù)生長。其球莖切面呈現(xiàn)白色或黃色(有的為橙色),具粘液,切口(或切片)暴露在空氣中會很快被氧化變黑。本屬的大多數(shù)種類葉基生,呈線形,分兩列;花呈亮黃色。

    小金梅草屬植物具有廣泛的藥用與觀賞價值。在非洲大陸具有悠久的藥用歷史,如Hypoxis hemerocallidea和H. colchicifolia是南非傳統(tǒng)藥物,可制作藥酒,H. hemerocallidea亦被用作艾滋病的免疫助推器等;此外,小金梅草屬植物由于多年生且觀賞性較強(qiáng),花期較長,無花時可觀葉,也是園林地被植物的選擇之一[7—11]。狹葉小金梅草(H.angustifolia)為小金梅草屬植物,原產(chǎn)于非洲且分布十分廣泛。非洲當(dāng)?shù)厝撕茉缇屠迷撝参镏委熞恍┨厥獾募膊?,如剛果傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中,狹葉小金梅草通常被用作類血球和鐮狀細(xì)胞病的治療藥物[12]。此外,在非洲其他地方,它還被用作治療疝氣和溫腎[10]。據(jù)研究,從狹葉小金梅草根狀莖中分離的(Z)-1-(4-羥基苯基)-3-(4-羥基苯基)-l,4-戊二烯和亞氧苷等可能是主要的藥用成分[13]。

    為了研究和利用小金梅草屬植物,本文以狹葉小金梅草為材料,展開組織培養(yǎng)研究,以期獲得大規(guī)模幼苗組培技術(shù),為后期研究和開發(fā)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    狹葉小金梅草為多年生草本,高可達(dá) 45 cm,球莖近球形,直徑1.5~3 cm。球莖切面為白色,球莖頂部為濃密剛毛。葉片線形或披針形,4~14枚,長可達(dá) 40 cm,葉邊緣和中脈具濃密的毛??偁罨ㄐ?,1~6枝,15~20 cm長,多毛,每枝總狀花序具花1~4朵,花黃色,直徑10~18 mm,花柄柔軟多毛。狹葉小金梅草主要分布在熱帶非洲,肯尼亞、坦桑尼亞、烏干達(dá)、南非等地都有分布[14—16]。本研究供試的狹葉小金梅草為 2015年采自非洲東部國家肯尼亞,當(dāng)?shù)睾0?000 m,屬于赤道高原地區(qū)。采取當(dāng)年7月初始花蕾作為外植體。

    1.2 培養(yǎng)條件

    (1)花蕾愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS + 6-BA 0.8 mg·L-1+ NAA 0.05 mg·L-1+ TDZ 0.1 mg·L-1;(2)愈傷誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基:MS + 6-BA 0.5 mg·L-1+ NAA 0.02 mg·L-1+AC(活性碳) 0.2 g·L-1;(3)芽增殖與生根繼代培養(yǎng)基:MS + 6-BA 1.0 mg·L-1+ NAA 0.1 mg·L-1+ 花寶 1 號1 g·L-1+ AC(活性碳) 0.2 g·L-1;(4)壯苗生根培養(yǎng)基:1/2MS + IBA 0.5 mg·L-1+ NAA 0.02 mg·L-1+ AC 0.5 g·L-1。以上培養(yǎng)基蔗糖濃度(1)、(2)、(3)為 3.0%,(4)為 2.0%;瓊脂 5.5 g·L-1,pH 5.8,培養(yǎng)溫度(25±2) ℃,連續(xù)光照 12 h·d-1,光照強(qiáng)度 2000 lx。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 愈傷誘導(dǎo)

    取母株當(dāng)年長出的健壯初始花蕾(圖1: a),自來水沖洗1 h,先用75%乙醇消毒30 s,再用10%次氯酸鈉溶液消毒25 min,無菌水沖洗8~10次,用消毒濾紙吸干表面水分,將花蕾接種至培養(yǎng)基(1)中。20~30 d左右花蕾中心開始膨脹(圖1: b),一周后逐漸有綠色嫩芽萌發(fā)(圖1: c),萌發(fā)誘導(dǎo)率30~50倍。

    圖1 狹葉小金梅草組織培養(yǎng)Fig. 1 Tissue culture of Hypoxis angustifolia

    2.2 芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)

    將獲得的側(cè)芽切分成小段,轉(zhuǎn)接入新鮮培養(yǎng)基(2)中芽誘導(dǎo)培養(yǎng),30 d為1個繼代增殖周期。一般1個芽可增殖形成3~5個側(cè)芽;隨著繼代次數(shù)的增加,增殖速度逐漸加快,增殖系數(shù)可達(dá)10~20倍(圖1: d)。30 d后,花蕾誘導(dǎo)出球形愈傷后,出現(xiàn)綠色叢生芽(圖 1: e)。將叢生芽轉(zhuǎn)接至新鮮的培養(yǎng)基(3)中進(jìn)行芽增殖培養(yǎng),誘導(dǎo)率10~15倍。

    2.3 生根培養(yǎng)

    叢生芽培養(yǎng)25 d逐漸成苗后(圖1: f),將其切開成單個植株,接至培養(yǎng)基(4)進(jìn)行生根培養(yǎng)。30 d后長出4~6條根,生根率達(dá)95%。

    2.4 煉苗與移栽

    先將組培苗移至自然光照下,不打開瓶蓋,使其逐漸適應(yīng)外界環(huán)境。適應(yīng)3 d后,將小苗取出,洗凈根部瓊脂,在陰處晾干,將生根苗移栽至泥土:蛭石按3:1配制的基質(zhì)中,表面噴水,再用塑料薄膜覆蓋,保持空氣相對濕度60%以上,環(huán)境溫度18~20 ℃,25~35 d可觀察煉苗成活情況(圖1: g),6個月后成活穩(wěn)定(圖1: h),成活率達(dá)80%。

    3 討論

    狹葉小金梅草的組培繁殖此前未見報道,其組培技術(shù)仍處于摸索階段。但仙茅科仙茅屬植物在國內(nèi)有一些研究[17]。與仙茅(Curculigo orchioides)的組培不同,本研究狹葉小金梅草組培的外植體為花芽,并取得成功,而根、莖、葉并沒有產(chǎn)生誘導(dǎo)愈傷組織,推測狹葉小金梅草在細(xì)胞分化過程中,并非所有細(xì)胞都分化形成成熟組織,而是只有少數(shù)的孢原細(xì)胞遺留下來,當(dāng)具備再生條件時,這類孢原細(xì)胞便可增殖。另一方面,狹葉小金梅草分化后的細(xì)胞,也較難脫分化再進(jìn)行增殖,這在作者的多次試驗(yàn)中得到驗(yàn)證。狹葉小金梅草的組培取得成功,對于該種來自遙遠(yuǎn)國度的植物的研究已邁出第一步,為其繁育提供了方法,也為今后的擴(kuò)大栽培以及應(yīng)用奠定良好的基礎(chǔ)。

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