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    響應(yīng)面法優(yōu)化西藏金耳多糖提取工藝研究

    2020-06-02 05:35:24張家晨秦良云劉怡賈福晨劉振東薛蓓
    食品研究與開發(fā) 2020年11期
    關(guān)鍵詞:影響

    張家晨,秦良云,劉怡,賈福晨,劉振東,薛蓓

    (西藏農(nóng)牧學(xué)院,西藏林芝860000)

    金耳(Tremella aurantialba),俗稱腦耳,隸屬于擔(dān)子菌亞門,銀耳目、銀耳科、銀耳屬,主要分布于中國云貴高原、四川、湖北、山西、江西、福建、西藏等地,西藏雖然含有豐富的野生金耳,但由于地理原因,很少被開發(fā)利用[1]。金耳作為一種營養(yǎng)食品,不僅含有豐富的氨基酸、礦物質(zhì)、活性多糖、維生素和蛋白質(zhì),而且還含有特殊的抗癌活性物質(zhì)[2]。據(jù)研究,金耳干品含蛋白質(zhì)7.5%~9.5%,脂肪1.7~2.9%,碳水化合物66.9%,含糖量 14.38%,纖維 2.6%,灰分 3.44~3.5%[3-5],并含有對人體重要的微量元素,如硒和鍺等。因此被人們當(dāng)作一種重要的天然保健品和稀有的珍貴藥食用真菌[6-7]。傳統(tǒng)中藥和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明:金耳具有化痰止咳、定喘調(diào)氣、滋陰潤肺、治虛勞、肺結(jié)核等的作用[8],提高造血機能,治療心腦血管疾病和保護肝臟,能提高機體免疫力[9]。

    金耳中重要的功能成分——金耳多糖的開發(fā)具有極高的開發(fā)利用價值。目前,金耳多糖[10-11]控制血糖,預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥、高血脂、高血壓以及抗腫瘤等功能已經(jīng)開始被部分學(xué)者所研究,隨著對金耳多糖功能的進一步了解,金耳的食用、藥用價值將會被更好的發(fā)現(xiàn)和利用[12]。在《本草綱目》中,李時珍曾對金耳有過這樣的評價:“其金黃色者可致癖飲積聚,腹痛金瘡”,歷來被認(rèn)為具有重要的醫(yī)療、保健價值,被視為“補益身心”、“轉(zhuǎn)弱為強”、“延年益壽”的補品[13]。隨著國內(nèi)學(xué)者對金耳的關(guān)注度越來越高,在生產(chǎn)技術(shù)和基礎(chǔ)研究方面取得的一定進展[14],金耳的食藥用價值將會在食品工業(yè)中具有重要價值。

    水提醇沉法是目前比較受歡迎的一種方法[15],其方法相對簡易、成本較低、操作過程成熟可靠,且一般不會導(dǎo)致提取過程中多糖的降解等變化,故本次試驗采取水提醇沉法對林芝金耳多糖進行浸提。預(yù)試驗采取料液比、浸提溫度、浸提時間、浸提次數(shù)和醇沉?xí)r間5個因素來探究這些因素對金耳多糖提取率的影響,發(fā)現(xiàn)浸提次數(shù)與醇沉?xí)r間對金耳提取的影響并不是很大,所以本試驗采用料液比、浸提溫度和浸提時間3個單因素,以此對林芝金耳多糖進行浸提[16-18],探究林芝金耳多糖的提取工藝的條件,并運用響應(yīng)面法進行優(yōu)化,旨在為林芝金耳多糖的生產(chǎn)技術(shù)和基礎(chǔ)研究提供一定的理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與設(shè)備

    金耳:于西藏林芝地區(qū),經(jīng)西藏農(nóng)牧學(xué)院食品科學(xué)工程實驗室粉碎,過100目篩后備用。葡萄糖:西隴化工股份有限公司;丙酮、無水乙醇、濃硫酸、苯酚(均為分析純):天津市大茂化學(xué)試劑廠。

    BSA124S型電子天平:北京楚齊儀表有限公司;HH-1數(shù)顯恒溫水浴鍋:北京海天友誠科技有限公司;RE52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:河南兄弟儀器設(shè)備有限公司;UV-2102PCS紫外分光光度計:上海恒磁電子科技有限公司;TD5A臺式低速離心機:上海重逢科學(xué)儀器有限公司;DHG-9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱:廣州滬瑞明儀器有限公司;KC-100A數(shù)碼超聲波清洗機:深圳市潔匯超聲洗凈設(shè)備有限公司;UPH-II-10L超純水機:濟南顧馳生物科技有限公司。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 金耳多糖的提取工藝路線

    金耳→烘干→磨粉→稱取粉末→單因素試驗→響應(yīng)面法優(yōu)化工藝→多糖浸提液→乙醇沉淀→檢測多糖含量。

    1.2.2 多糖得率的計算

    1.2.3 金耳多糖含量的測定

    對金耳多糖的含量測定采用苯酚-硫酸法。具體操作方法詳見參考文獻[19-20]。

    1.2.4 熱水浸提林芝金耳多糖的單因素試驗

    1.2.4.1 料液比對多糖提取率的影響

    精確稱取2.000 g干燥的林芝金耳粉末,設(shè)定浸提時間為 3 h,浸提溫度為 60℃,選取 1∶20、1 ∶30、1∶40、1 ∶50、1 ∶60(g/mL)的料液比對林芝金耳進行浸提,考察不同料液比對林芝金耳多糖提取率的影響。

    1.2.4.2 浸提溫度對多糖提取率的影響

    精確稱取2.000 g干燥的林芝金耳粉末,設(shè)定料液比為 1 ∶40(g/mL),浸提時間為 3 h,選取 40、50、60、70、80℃為提取溫度,對林芝金耳進行浸提,考察不同浸提溫度對林芝金耳多糖提取率的影響。

    1.2.4.3 浸提時間對多糖提取率的影響

    精確稱取2.000 g干燥的林芝金耳粉末,設(shè)定料液比為 1∶40(g/mL),浸提溫度為 60 ℃,選取 1、2、3、4、5 h為浸提時間,對林芝金耳進行浸提,考察不同浸提時間對林芝金耳多糖提取率的影響。

    1.2.5 Box-Behnken響應(yīng)面試驗設(shè)計

    根據(jù)Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計原理,結(jié)合單因素試驗,選取料液比(X1)、浸提溫度(X2)、浸提時間(X3)這3個因素,采用三因素三水平的Box-Behnken法進行試驗設(shè)計,試驗自變量因素及水平編碼如表1。

    表1 Box-Behnken方案設(shè)計的因素及水平Table 1 Factors and levels of box-behnken scheme design

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    本試驗采用Design Expert 8.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進行分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單因素試驗

    2.1.1 料液比對提取率的影響

    料液比對提取率的變化關(guān)系見圖1。

    圖1 料液比對提取率的變化關(guān)系Fig.1 Relationship between the ratio of solid to liquid and the extraction rate

    從圖1可以看出,隨著料液比的增加,在1∶20(g/mL)~1∶40(g/mL)的范圍內(nèi),曲線呈現(xiàn)上升狀態(tài),表明多糖的提取率在此范圍內(nèi)隨著料液比的增加而增加,在1 ∶40(g/mL)~1∶60(g/mL)范圍內(nèi),曲線呈現(xiàn)下降狀態(tài),表明多糖的提取率在此范圍內(nèi)隨著料液比的增加而降低。其他條件一定,料液比為1∶40(g/mL)的時候,曲線出現(xiàn)峰值,多糖的提取率達到最大。

    2.1.2 浸提溫度對提取率的影響

    浸提溫度對提取率的變化關(guān)系見圖2。

    圖2 浸提溫度對提取率的變化關(guān)系Fig.2 Relationship between extraction temperature and extraction rate

    從圖2中的曲線表明,隨著浸提溫度的增加,在40℃~60℃范圍內(nèi),曲線呈現(xiàn)上升狀態(tài),表明多糖的提取率在此范圍內(nèi)隨著浸提溫度的增加而增加,在60℃~80℃范圍內(nèi),曲線呈現(xiàn)下降狀態(tài),表明多糖的提取率在此范圍內(nèi)隨著浸提溫度的增加而降低。其他條件一定,浸提溫度為60℃的時候,多糖的提取率達到最大。

    2.1.3 浸提時間對提取率的影響

    浸提時間對提取率的變化關(guān)系見圖3。

    圖3 浸提時間對提取率的變化關(guān)系Fig.3 Relationship between extraction time and extraction rate

    從圖3可以看出,隨著浸提時間的增加,在1 h~3 h范圍內(nèi),曲線呈現(xiàn)上升狀態(tài),表明多糖的提取率在此范圍內(nèi)隨著浸提時間的增加而增加,在3 h~5 h范圍內(nèi),曲線呈現(xiàn)下降狀態(tài),表明多糖的提取率在此范圍內(nèi)隨著浸提時間的增加而降低。其他條件一定,浸提時間為3 h的時候,多糖的提取率達到最大。

    2.2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗

    2.2.1 響應(yīng)面試驗分析

    在單因素結(jié)果的基礎(chǔ)上,設(shè)計綜合優(yōu)化試驗表1,分別設(shè)置自變量為料液比X1、浸提溫度X2、浸提時間X3,響應(yīng)值Y為所得提取率,響應(yīng)面設(shè)計為三因素三水平,結(jié)果如表2。

    表2 試驗設(shè)計及結(jié)果Table 2 Test design and results

    2.2.2 建模與顯著性考察

    基于本次試驗所得數(shù)據(jù),以金耳多糖的提取率為Y值,對自變量編碼的X1(料液比)、X2(浸提溫度)、X3(浸提時間)進行回歸分析并建立模型,得到以下回歸方程:

    為了驗證回歸模型與因素的顯著性,將試驗數(shù)據(jù)運用軟件Design-Expert 8.0進行方差分析,P<0.05表示差異顯著,P<0.01表示差異極顯著,方差分析結(jié)果如表3。

    表3 方差分析表Table 3 Anova table

    由表3可知,該試驗的模型P<0.01,表明本試驗?zāi)P偷幕貧w方程的顯著性檢驗結(jié)果是可靠的。其次,失擬項P>0.05,表明失擬項并未顯著影響試驗結(jié)果。極差R2的值為87.09%>85%,說明該模型有著良好的擬合程度且試驗較為準(zhǔn)確,數(shù)據(jù)無嚴(yán)重誤差。并且從下表中還可以看出X1(料液比)、X2(浸提溫度)、X3(浸提時間)對多糖提取率的影響程度依次為X1>X3>X2,除此之外,從 X1X2、X12、X22、X32的 P 值可以認(rèn)為,它們極顯著地影響多糖提取率;而X1、X3的P值介于0.01與0.05之間,可以認(rèn)為它們顯著地影響多糖提取率。綜合以上的分析,結(jié)果說明各個試驗因素與響應(yīng)值之間有著較為復(fù)雜的關(guān)系。

    2.2.3 響應(yīng)面法分析各因素間交互作用

    圖4~圖6中反映的是料液比、浸提溫度、浸提時間的交互效應(yīng)之間的關(guān)系。

    圖4 料液比(X1)和浸提溫度(X2)交互作用的影響Fig.4 Effects of feed-liquid ratio(X1)and extraction temperature(X2)interaction

    圖5 料液比(X1)浸提時間(X3)交互作用對的影響Fig.5 Effects of feed-liquid ratio(X1)and extraction time(X3)interaction

    圖6 浸提溫度(X2)浸提時間(X3)交互作用的影響Fig.6 Effects of extraction temperature(X2)and extraction time(X3)interaction

    圖4反映出料液比(X1)和浸提溫度(X2)的交互效應(yīng)對林芝金耳多糖的提取率具有較為明顯的影響,在后續(xù)試驗中,可以同時適當(dāng)?shù)恼{(diào)整料液比和浸提溫度,以期提高金耳多糖的提取率。并且從圖4的平面等高線可以看出,X1方向上曲線的坡度變化較X2方向上曲線的坡度大,說明在料液比(X1)和浸提溫度(X2)的交互效應(yīng)中,料液比(X1)對金耳多糖的提取率影響更大。

    由圖5可知,X1方向上曲線的坡度變化較X3方向上曲線的坡度大,說明在料液比(X1)和浸提時間(X3)的交互效應(yīng)中,料液比(X1)對金耳多糖的提取率影響更大。

    由圖6可知,X2和X3方向上的曲線近似一個圓形,說明浸提溫度(X2)和浸提時間(X3)的交互效應(yīng)對對金耳多糖提取率的影響并不明顯。

    2.2.4 優(yōu)化工藝驗證試驗結(jié)果

    為獲得最佳的提取工藝,繼續(xù)采用Design-Expert 8.0對上述模型進行進一步分析,所得結(jié)果如下:料液比1∶40.6(g/mL),浸提溫度 59.78℃,浸提時間 3.09 h。預(yù)測金耳多糖的最大提取率是8.020 08%。考慮到試驗的可操作性和可行性,選取料液比1∶41(g/mL),浸提溫度60℃,浸提時間3 h,測得金耳多糖的提取率為7.9%(進行了3次重復(fù)試驗),此提取率與模型預(yù)測的金耳多糖最大的提取率8.020%,相比較結(jié)果相符合。說明用響應(yīng)面來優(yōu)化林芝金耳多糖的工藝條件是具有實際操作性的。

    3 結(jié)論與討論

    本次試驗為探究浸提溫度、浸提時間、料液比3個因素以及兩兩因素間交互效應(yīng)對林芝金耳多糖提取率的影響,采用響應(yīng)面法優(yōu)化研究得出了最優(yōu)的提取條件:料液比1∶41(g/mL),浸提溫度60℃,浸提時間3 h,并且在此工藝條件下進行3次驗證試驗,得出的金耳多糖的提取率為7.9%,該結(jié)果與模型預(yù)測的結(jié)果8.020%大致符合,表明利用響應(yīng)面法優(yōu)化金耳多糖熱水浸提的工藝條件是具有實際操作性的。在上述試驗結(jié)果的基礎(chǔ)上,響應(yīng)面分析的試驗結(jié)果還表明:試驗選取的各因素(料液比、浸提時間、浸提溫度)對多糖提取率的影響大小從大到小依次為料液比>浸提時間>浸提溫度。且在交互效應(yīng)對金耳多糖提取率的影響中,料液比與浸提溫度的交互效應(yīng)對金耳多糖提取率的影響最大。此外,本次試驗只探究了上述3個因素與林芝金耳多糖提取率變化關(guān)系,部分相關(guān)工藝如醇沉、浸提,或所用溶劑濃度也會影響試驗結(jié)果,所以未來研究者為得出最佳的熱水浸提工藝,可以進一步探究上述因素對林芝金耳多糖提取的影響,為林芝金耳多糖的生產(chǎn)技術(shù)和基礎(chǔ)性研究提供了一定的理論依據(jù)。

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