黃芪免煎顆粒與其傳統(tǒng)飲片主要成分含量對(duì)比分析

倪晶瑩 張慧霖 陳璟巧

福建省廈門市中醫(yī)院 361000

中藥黃芪[Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge]是豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的根。其味甘，性微溫；歸脾、肺經(jīng)。健脾補(bǔ)中、升陽(yáng)舉陷、益衛(wèi)固表、利尿、托毒生肌，可謂補(bǔ)氣要藥?，F(xiàn)代研究顯示，黃芪化學(xué)成分主要含苷類、多糖、黃酮、氨基酸、微量元素等。而2015版《中國(guó)藥典》規(guī)定，對(duì)黃芪的含量進(jìn)行測(cè)定，以黃芪甲苷作為主要指標(biāo)成分?？梢哉f(shuō)，無(wú)論是醫(yī)生臨證遣方抑或日常養(yǎng)生保健，黃芪都非常常用。但傳統(tǒng)中藥黃芪飲片煎煮時(shí)相較耗時(shí)費(fèi)力，遠(yuǎn)行攜帶及服用亦有諸多不便。而作為新興劑型的免煎顆粒，具有用量準(zhǔn)確、攜帶方便、患者用藥依從性高等優(yōu)勢(shì)，受到醫(yī)生及患者的青睞。免煎顆粒黃芪能否代替?zhèn)鹘y(tǒng)飲片發(fā)揮療效呢？本文對(duì)比分析黃芪免煎顆粒與其傳統(tǒng)飲片，探究其主要成分含量與穩(wěn)定性，具體如下。

1 材料與方法

1.1 儀器 高效液相色譜儀(型號(hào)：LC-2010AHT，廠家：日本島津公司)，色譜柱(型號(hào)：C18，廠家：菲羅門科學(xué)儀器有限公司，4.6mm×250mm)。

1.2 藥材 黃芪傳統(tǒng)飲片(安國(guó)宏仁藥業(yè)有限公司,批號(hào)：201905001-3)，黃芪免煎顆粒(江陰天江藥業(yè)有限公司，批號(hào)：19071991)。

1.3 試劑 黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110781-201616，純度>97.4%)，色譜純：乙腈、甲醇，其他試劑均為分析純。

2 黃芪免煎顆粒與其傳統(tǒng)飲片中黃芪甲苷檢測(cè)方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液制備 稱取適量黃芪甲苷對(duì)照品，利用甲醇進(jìn)行溶解，定容0.27mg/ml。

2.2 色譜條件 C18色譜柱、甲醇水(30∶70)、流動(dòng)相、流速1.0ml/min、柱溫為室溫、檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置203nm。

2.3 線性關(guān)系分析 分別吸取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml對(duì)照品溶液，并置入100ml容量瓶?jī)?nèi)，采用甲醇進(jìn)行稀釋后定容，通過(guò)微孔濾膜(0.45μm)過(guò)濾后，進(jìn)樣測(cè)定；將黃芪甲苷進(jìn)樣量作為橫坐標(biāo)，其峰面積作為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，并計(jì)算相關(guān)系數(shù)與回歸方程，r=0.999 8，Y=1 787 338.4X-301.01，顯示黃芪甲苷含量在0.028～0.136μg范圍內(nèi)，并與其峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 室溫環(huán)境下，黃芪免煎顆粒樣品溶液分別在配制后即刻、2h、6h、8h、12h內(nèi)進(jìn)行含量檢測(cè)，在色譜條件下進(jìn)行6次，計(jì)算黃芪甲苷含量RSD=1.89%，結(jié)果顯示黃芪甲苷含量在12h內(nèi)處于穩(wěn)定狀態(tài)。

2.5 精密度試驗(yàn) 吸取10μl黃芪甲苷對(duì)照品溶液，在色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣共6次，詳細(xì)記錄峰面積，準(zhǔn)確計(jì)算黃芪甲苷含量RSD=1.32%，結(jié)果說(shuō)明方法符合精密度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

2.6 供試品溶液制備 稱取10g黃芪免煎顆粒、100g黃芪飲片，蒸餾水溶解黃芪免煎顆粒，并進(jìn)行定容100ml；將傳統(tǒng)黃芪飲片粉碎成微小粗粒，過(guò)14目篩后，將8倍量蒸餾水加入黃芪飲片粗粒中，煎煮3次，40min/次，煎煮后過(guò)濾，將3次煎煮溶液混合均勻過(guò)濾，水浴濃縮，溶液恢復(fù)至室溫后利用蒸餾水進(jìn)行定容100ml，吸取傳統(tǒng)黃芪飲片溶液進(jìn)行制備，最終定容為100ml供試品溶液；依次吸取20ml供試品溶液，水飽和正丁醇進(jìn)行4次萃取，分別為20ml、20ml、10ml、10ml，將其混合，并加入氫氧化鈉溶液(0.5%)內(nèi)充分洗滌3次，分別為20ml、20ml、40ml，去除堿液層，促使正丁醇揮干，甲醇溶解剩余殘?jiān)?，并定?0ml。

2.7 回收率試驗(yàn) 精密稱取適量已知黃芪甲苷含量的黃芪免煎顆粒共5份，加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液，根據(jù)試劑制備方法進(jìn)行制備，并吸取10μl進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果顯示加樣回收率=95.96%，RSD=5.4%。

2.8 供試品溶液檢測(cè) 上述已制備供試品溶液通過(guò)微孔濾膜(直徑0.45μm)過(guò)濾后，10μl進(jìn)樣進(jìn)行含量測(cè)定，記錄色譜峰面積，每個(gè)供試品溶液進(jìn)行3次測(cè)定，求取黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量的平均值，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量試驗(yàn)結(jié)果

2.9 影響因素試驗(yàn) 將黃芪免煎顆粒、傳統(tǒng)飲片置于高濕、高溫、強(qiáng)光條件下進(jìn)行儲(chǔ)存，分別于0d及存儲(chǔ)7d、14d進(jìn)行黃芪甲苷含量測(cè)定，黃芪免煎顆粒與傳統(tǒng)飲片黃芪甲苷含量相比無(wú)顯著差異(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 黃芪甲苷影響因素試驗(yàn)結(jié)果

2.10 加速試驗(yàn) 分別將黃芪免煎顆粒、傳統(tǒng)飲片置于加速條件中，即濕度(75±5)%RH、溫度(40±5)℃下進(jìn)行儲(chǔ)存，并在儲(chǔ)存即刻、第1個(gè)月、第3個(gè)月、第6個(gè)月時(shí)分別對(duì)黃芪甲苷含量進(jìn)行考察，黃芪免煎顆粒與傳統(tǒng)飲片黃芪甲苷含量相比無(wú)顯著差異(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

近年來(lái)，隨著我國(guó)中藥制劑管理不斷科學(xué)化、規(guī)范化，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局公布了《中藥配方顆粒管理暫行規(guī)定》，明確規(guī)定中藥免煎顆粒歸類為傳統(tǒng)中藥飲片管理范圍[1]。與傳統(tǒng)中藥飲片抓藥調(diào)劑相比，中藥免煎顆粒具有取藥時(shí)間短、干凈衛(wèi)生、配藥精準(zhǔn)、可隨身攜帶、便于儲(chǔ)存、患者用藥依從性高等特點(diǎn)，在中醫(yī)臨床應(yīng)用中具有良好價(jià)值[2]。

表3 加速試驗(yàn)黃芪甲苷含量

多方研究發(fā)現(xiàn)，中藥免煎顆粒受不同原輔料供應(yīng)商、不同制備工藝、多樣化質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等因素影響，造成其與傳統(tǒng)中藥飲片在主要含量、臨床療效、穩(wěn)定性方面存在一定差異[3-4]。因此，中藥免煎顆粒能否完全代替?zhèn)鹘y(tǒng)飲片仍需進(jìn)一步印證。經(jīng)Meta分析可知，在中藥免煎顆粒與中藥飲片臨床療效對(duì)比研究中發(fā)現(xiàn)，中藥免煎顆粒在疾病治療中有效率更高，中藥免煎顆粒應(yīng)用于中醫(yī)臨床治療中，具有一定價(jià)值[5]。

中藥免煎顆粒是在傳統(tǒng)飲片基礎(chǔ)上演變而來(lái)的新型中藥制劑，為中藥湯劑劑型改革的創(chuàng)新性嘗試。本試驗(yàn)將黃芪免煎顆粒作為研究對(duì)象，黃芪免煎顆粒是中草藥黃芪研制而成的純中藥顆粒藥劑，具有補(bǔ)氣固表、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用，主要應(yīng)用于自汗、氣短心悸、體虛浮腫、久瀉、癰疽難潰，創(chuàng)口久不愈合等疾病治療中；同時(shí)相比傳統(tǒng)中藥飲片，具有攜帶方便、無(wú)須長(zhǎng)時(shí)間煎煮等優(yōu)勢(shì)。此外，黃芪主要成分有皂苷、黃酮、多糖等，除皂苷類物質(zhì)黃芪甲苷外，黃酮類物質(zhì)毛蕊異黃酮葡萄糖苷也是其活性及含量較高成分，具有降血脂、抗病毒等作用[6-7]。因此，在探究黃芪主要成分黃芪皂苷時(shí)，增加對(duì)毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量檢測(cè)，有助于提升黃芪免煎顆粒與其傳統(tǒng)飲片主要成分含量對(duì)比的準(zhǔn)確性。本研究通過(guò)紫外光區(qū)波長(zhǎng)掃描得知，黃芪甲苷在203nm波長(zhǎng)時(shí)存在較強(qiáng)吸收性，且噪音影響較??；同時(shí)利用不同堿性溶液萃取、水飽、大孔樹(shù)脂柱分離純化等技術(shù)對(duì)黃芪免煎顆粒、傳統(tǒng)飲片進(jìn)行處理分析，并采用正丁醇、水飽進(jìn)行萃取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黃芪免煎顆粒中黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量略低于傳統(tǒng)飲片，其原因可能在于中藥飲片煎煮過(guò)程中各成分含量間存在增溶效應(yīng)。但總言之，二者相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。且中藥免煎顆粒在制備過(guò)程中經(jīng)過(guò)噴霧干燥、優(yōu)化低溫濃縮等系列中醫(yī)制藥工藝流程，保證了中藥成分含量溶出率，減少有效成分流失，確保中藥飲片主要成分含量。此外，本研究經(jīng)穩(wěn)定性試驗(yàn)、加速試驗(yàn)可知黃芪免煎顆粒樣品黃芪甲苷含量在12h內(nèi)處于穩(wěn)定狀態(tài)，并在高溫、高濕、強(qiáng)光狀態(tài)、40℃、75%RH加速條件下較為穩(wěn)定，可見(jiàn)黃芪免煎顆粒中黃芪甲苷的含量受環(huán)境因素影響較小，穩(wěn)定性良好，臨床應(yīng)用中具有一定價(jià)值。

綜上所述，黃芪免煎顆粒與其傳統(tǒng)飲片主要成分黃芪甲苷含量差異不大，筆者認(rèn)為黃芪免煎顆粒代替?zhèn)鹘y(tǒng)飲片具有一定科學(xué)依據(jù)，并在確保治療效果的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)良好藥學(xué)價(jià)值。