復(fù)方苦參洗劑的安全性研究

黃鳳嬌，吳森，王平慧，周素文

(湖北省藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、湖北省藥品質(zhì)量檢測(cè)與控制工程技術(shù)研究中心，武漢 430054)

復(fù)方苦參洗劑由苦參、蛇床子、地膚子、白蘚皮等組成，具有燥濕、防腐、殺蟲、止癢功效，用于肛門騷癢癥。苦參具有清熱燥濕、殺蟲、利尿功效，臨床常用于濕疹、皮膚瘙癢、滴蟲性陰道炎等皮膚瘙癢性疾病。苦參制劑在瘙癢癥、接觸性皮炎、濕疹、特應(yīng)性皮炎、銀屑病等皮膚疾病中應(yīng)用廣泛[1-3]。蛇床子具有抗敏止癢的功效[4]。復(fù)方苦參洗劑為外用制劑，筆者研究其對(duì)皮膚的毒理反應(yīng)，以評(píng)價(jià)該制劑的安全性。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 日本大耳白兔20只，雌雄兼用，體質(zhì)量2.0～3.0 kg，普通級(jí)；豚鼠40只，雌雄各半，體質(zhì)量300～400 g，普通級(jí)。以上動(dòng)物均購(gòu)于武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(鄂)2008-0003，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證：SYXK(鄂)2014-0009。動(dòng)物給予顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲用凈化水，環(huán)境溫度20～25 ℃，濕度40%～70%，光照為12 h明暗交替。

1.2藥品與試劑 擬臨床使用復(fù)方苦參洗劑(含生藥材量為0.37 g·mL-1，批號(hào)：150101)及濃縮10倍的復(fù)方苦參洗劑(含生藥材量為3.7 g·mL-1)，由湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院提供。2，4-二硝基氯苯(2，4-dinitrochlorobenzene，DNCB，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào)：20100617)。

1.3方法

1.3.1家兔皮膚給藥急性毒性實(shí)驗(yàn) 12只家兔，按隨機(jī)區(qū)組法分為兩組，給藥組(為濃縮10倍的樣品，含生藥材量為3.7 g·mL-1)和陰性對(duì)照組(純化水)，每組6只，雌雄各半。于給藥前24 h將動(dòng)物背部去毛，去毛范圍180 cm2，將供試品或純化水4 mL涂于去毛區(qū)域，然后用一層稱樣紙覆蓋，用無(wú)刺激性膠布或繃帶固定，涂藥4 h后用溫水清洗給藥部位，同法再涂藥1次，末次涂藥24 h后用溫水清洗給藥部位。每天觀察1次，觀察給藥后動(dòng)物的全身反應(yīng)情況，包括動(dòng)物的外觀、行為、分泌物、排泄物、震顫、腹瀉、嗜睡和昏迷等癥狀以及涂敷部位有無(wú)紅斑和水腫等局部毒性反應(yīng)，觀察至給藥后7 d[5-8]。

1.3.2家兔直腸刺激實(shí)驗(yàn) 選擇兔肛門區(qū)域無(wú)異常、排便正常的8只家兔，按完全隨機(jī)化法分為兩組，給藥組和陰性對(duì)照組(純化水)，每組4只，雌雄各半。將受試物或純化水2 mL在距肛門4 cm處注入家兔直腸，連續(xù)給藥8 d，每日飼喂之前給藥。每次給藥前檢查家兔肛門區(qū)域和肛門括約肌，給藥后臨床表現(xiàn)(如疼痛癥狀)和糞便(如血、黏液)，給藥后動(dòng)物的死亡和尸檢情況，局部組織有無(wú)充血、水腫等現(xiàn)象。家兔處死后，分離直腸，縱向剖開觀察黏膜變化，并進(jìn)行直腸黏膜的病理組織學(xué)檢查[9]。

1.3.3豚鼠皮膚過(guò)敏實(shí)驗(yàn) 豚鼠按隨機(jī)區(qū)組法隨機(jī)分為3組，即復(fù)方苦參洗劑組，陰性對(duì)照組(純化水)和DNCB組(陽(yáng)性對(duì)照組)，供試品組20只，其余各組10只，雌雄各半。致敏：實(shí)驗(yàn)前24 h將動(dòng)物背部左側(cè)去毛，去毛范圍為3 cm×3 cm。 將濃縮10倍的供試品0.5 mL涂布在豚鼠背部左側(cè)3 cm×3 cm的區(qū)域，然后用一層稱樣紙覆蓋，再用無(wú)刺激性膠布固定，持續(xù)6 h后用溫水洗去殘留物，第7天和第14天各重復(fù)1次，共3次。陰性對(duì)照組動(dòng)物背部左側(cè)脫毛處涂純化水，DNCB組動(dòng)物背部左側(cè)脫毛處涂敷1%DNCB溶液。激發(fā)：在末次涂藥誘導(dǎo)2周時(shí)，用臨床濃度的供試品0.5 mL涂布在豚鼠背部右側(cè)3 cm×3cm的區(qū)域，然后用一層稱樣紙覆蓋，再用無(wú)刺激性膠布固定，6 h后用水洗去受試物，DNCB組(涂抹0.1%DNCB)與陰性對(duì)照組用同法激發(fā)接觸并觀察。在致敏后1和24 h及激發(fā)后24和48 h觀察皮膚紅斑、水腫和其他異常反應(yīng)，按標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分評(píng)價(jià)致敏程度，同時(shí)應(yīng)密切觀察動(dòng)物是否有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重的全身性變態(tài)反應(yīng)，測(cè)定開始及結(jié)束時(shí)動(dòng)物體質(zhì)量[10-13]。

2 結(jié)果

2.1家兔皮膚給藥急性毒性實(shí)驗(yàn) 給藥當(dāng)天及給藥后不同的時(shí)間與陰性對(duì)照組比較，動(dòng)物無(wú)全身反應(yīng)情況，動(dòng)物的外觀、行為正常，分泌物、排泄物無(wú)異常，未出現(xiàn)震顫、腹瀉、嗜睡和昏迷等癥狀，涂敷部位無(wú)紅斑和水腫等局部毒性反應(yīng)，結(jié)果見圖1；實(shí)驗(yàn)開始及實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，稱取動(dòng)物體質(zhì)量，結(jié)果給藥組與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，體質(zhì)量結(jié)果見表1。

圖1 家兔皮膚急性毒性實(shí)驗(yàn)局部反應(yīng)結(jié)果

表1 兩組家兔給藥前后體質(zhì)量比較

組別給藥前給藥后陰性對(duì)照組2.4±0.12.4±0.1給藥組2.4±0.22.4±0.2

2.2家兔直腸刺激實(shí)驗(yàn) 各組動(dòng)物給藥后未見疼痛表現(xiàn)，排便正常，未見糞便帶血等癥狀。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死家兔，觀察肛門局部組織及直腸黏膜，未見有充血、水腫及糜爛等現(xiàn)象。組織病理學(xué)檢查結(jié)果表明，給藥組和陰性對(duì)照組未見明顯異常情況。病理圖片見圖2。

圖2 2組家兔病理組織學(xué)檢查

Fig.2Histopathologicexaminationintwogroupsofrabbits

2.3豚鼠皮膚過(guò)敏實(shí)驗(yàn) 在各次致敏后1和24 h，給藥組、陰性對(duì)照組及DNCB組未見任何異常情況。復(fù)方苦參洗劑組豚鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)正常，與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見表2，激發(fā)后24和48 h觀察，復(fù)方苦參洗劑組及陰性對(duì)照組未見皮膚紅斑、水腫等異常反應(yīng)，皮膚變態(tài)反應(yīng)分值為0，變態(tài)反應(yīng)發(fā)生率為0%。而DNCB組激發(fā)給藥后24和48 h觀察，有明顯的皮膚紅斑和水腫現(xiàn)象，豚鼠皮膚過(guò)敏圖片見圖3，給藥后24和48 h皮膚變態(tài)反應(yīng)分值分別為4.6，2.6，變態(tài)反應(yīng)發(fā)生率為100.0%。

表2 3組豚鼠給藥前后體質(zhì)量比較

組 別豚鼠/只給藥前給藥后陰性對(duì)照組10348±16475±17DNCB組10355±13468±14復(fù)方苦參洗劑組20342±13479±15

圖3 豚鼠皮膚變態(tài)反應(yīng)

Fig.3Allergyreactionoftheskinofguineapigs

3 討論

肛門瘙癢癥在古代已有記載，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，本病多因外感風(fēng)、濕、熱、蟲等外邪，內(nèi)因稟性不耐，情緒憂郁，以至濕熱內(nèi)生下注，阻于肛門周圍皮膚所致[14]。 清代高錦庭《瘍科心得集》載有苦參湯，由苦參、蛇床子、白芷、金銀花、菊花、黃柏、地膚子、大菖蒲組成，具有祛風(fēng)除濕，殺蟲止癢之效果[15]。復(fù)方苦參洗劑以此方為基礎(chǔ)，方中重用苦參清熱燥濕、祛風(fēng)殺蟲；蛇床子溫腎助陽(yáng)、祛風(fēng)殺蟲；地膚子清熱利濕、祛風(fēng)止癢；白蘚皮燥濕止癢、解毒殺蟲。諸藥合用，共奏清熱燥濕、殺蟲止癢之功效。

本研究對(duì)復(fù)方苦參洗劑局部用藥可能引起的毒性、刺激性及變態(tài)反應(yīng)進(jìn)行了研究，結(jié)果表明復(fù)方苦參洗劑是一種安全性較高的外用制劑。