樁核冠修復(fù)老年人群齦溝內(nèi)致齲菌的改變分析

楊榮紅

(重慶市雙橋經(jīng)開區(qū)人民醫(yī)院，重慶 400900)

樁核冠修復(fù)術(shù)是修復(fù)大面積牙體缺損的一種常用的修復(fù)方法。牙根面齲是該修復(fù)術(shù)后的主要并發(fā)癥之一，發(fā)生率為3%～16%[1]。研究報(bào)道，引起公認(rèn)齲病的細(xì)菌種類很多，變異鏈球菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌3種細(xì)菌為老年人牙根面主要的致齲菌[2]。本研究觀察了老年患者下頜第二磨牙樁核冠修復(fù)術(shù)前后的變異鏈球菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌的形態(tài)變化和數(shù)量變化，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院2018年3月至2018年12月收治的上頜第二磨牙無咬合功能的患者40例，患者均了解并簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡≥65歲；(2)全口牙齒數(shù)量≥23顆，且無明顯炎癥；(3)除下頜第二磨牙其他牙齒功能均無異常；(4)根管治療可保存牙齒；(5)患者依從性良好，能夠堅(jiān)持維護(hù)口腔衛(wèi)生；(6)受試前兩周以及之后未用抗菌類藥物，采樣前1 h內(nèi)未進(jìn)食的患者可作為受試者。患者男22例， 女18例，年齡65～78歲，平均(73.2±4.1)歲。將需要樁核冠修復(fù)的40名患者的第二磨牙一側(cè)作為受試組A組，其對(duì)側(cè)健康第二磨牙作為對(duì)照組B組。

1.2材料 黏性放線菌5519(1+2-)和內(nèi)氏放線菌ATCC19246。Tap DNA聚合酶、25mmol/L MgCl2溶液，特異性引物，10%十二烷基硫酸鈉溶液、1 mol/L Tris溶液、0.5 mol/L乙二胺四乙酸(pH 8.0)溶液、STE緩沖液(pH 8.0)、聚合酶鏈反應(yīng)緩沖液、3 mol/L NaAc(pH 5.2)，電泳級(jí)瓊脂糖[3]。

1.3方法 患者進(jìn)行牙周基礎(chǔ)治療，鈦樁+3M樹脂修復(fù)之前要進(jìn)行牙根管治療，使其咬合功能恢復(fù)。清水漱口，收集所有受試者下頜第二磨牙齦溝內(nèi)的菌斑。分別在預(yù)備后3、7 d、樁核冠修復(fù)后1個(gè)月進(jìn)行取樣，并在1 h內(nèi)將樣本送至實(shí)驗(yàn)室。使用漩渦振蕩器1 min，使標(biāo)本采集管于其中并分散，用PBS緩沖液講樣本菌斑稀釋至10-2、10-3。在放線菌選擇性培養(yǎng)基和輕唾-桿菌肽瓊脂上接種10-2、10-3稀釋液50 μL，對(duì)其進(jìn)行編號(hào)、均勻的劃線。37 ℃ 厭氧環(huán)境下培養(yǎng)2 d。對(duì)變異鏈球菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌進(jìn)行生化鑒定，對(duì)菌落進(jìn)行革蘭染色鑒定以及形態(tài)學(xué)檢查[4]。選用菌落形成單位(CFU/mL)的形式，對(duì)變異的鏈球菌、黏性放線菌和內(nèi)氏放線菌進(jìn)行分離鑒定，菌落數(shù)30～300個(gè)平板為準(zhǔn)，進(jìn)行數(shù)量分析。黏性放線菌上游引物序列是5’-CCTTCTTCTGGATAACCGCA-3’，下游引物序列是5’-CTACCCGTCACCGCCTT-3’，擴(kuò)增長(zhǎng)度為157 bp；內(nèi)氏放線菌上游引物序列是5’-CCTTCTTCTGGATAACCGCA-3’，下游引物序列是5’-CTACCCGTCACCGCCTT-3’，擴(kuò)增長(zhǎng)度為172 bp；PCR技術(shù)可鑒定黏性放線菌和內(nèi)氏放線菌[5]。

2 結(jié) 果

2.1形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果 黏性放線菌：CFAT平板上呈現(xiàn)直徑為0.5 mm的黏性菌落，表面光滑，邊緣整齊，乳白色，質(zhì)硬；革蘭染色陽(yáng)性，光鏡下為桿狀菌，形態(tài)不規(guī)則，常見短分支體。內(nèi)氏放線菌：CFAT平板上呈現(xiàn)為淡黃色或白色菌落，邊緣整齊，表面光滑，中心不平略隆起；光鏡下為分支桿菌，形態(tài)不規(guī)則。變異鏈球菌：變異鏈球菌在MSBA平板上呈現(xiàn)輕微透明菌落，中心不平略隆起，表面光滑；革蘭染色陽(yáng)性，光鏡下為球菌，鏈狀排列。

2.2黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌、變異鏈球菌檢出率和菌落計(jì)數(shù) 兩組黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌、變異鏈球菌檢出率在不同時(shí)間點(diǎn)均無顯著差異(P>0.05)；與預(yù)備前相比，A組預(yù)備后3 d黏性放線菌、變異鏈球菌菌落數(shù)顯著增加(P<0.05)。與預(yù)備后3 d相比，A組預(yù)備后7 d內(nèi)氏放線菌菌落數(shù)顯著增加(P<0.05)；與預(yù)備后7 d相比，A組修復(fù)后1個(gè)月黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌、變異鏈球菌菌落數(shù)顯著降低(P<0.05)。與預(yù)備前3 d相比，B組預(yù)備后7 d黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌菌落數(shù)顯著增加(P<0.05)。見表1。

表1 黏性放線菌在不同時(shí)期的檢出率和菌落計(jì)數(shù) (n=40)

注：與組內(nèi)前一個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比，*P<0.05。

3 討 論

老年人口腔內(nèi)常駐致齲菌主要包括變異鏈球菌、乳桿菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌，而隨著年齡的增長(zhǎng)，老年人根面齲的發(fā)生率也逐漸升高。研究發(fā)現(xiàn)，根齲的發(fā)生主要與菌斑微生物產(chǎn)生的短鏈羧酸相關(guān)，上述物質(zhì)可導(dǎo)致牙齒根面礦物質(zhì)溶解，而根面牙骨質(zhì)和牙本質(zhì)的特殊結(jié)構(gòu)則進(jìn)一步加快這一過程[6]。謝思靜[7]等發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者牙菌斑中變異鏈球菌以及放線菌的比例與正常對(duì)照組相比明顯升高。本研究中，無論是受試組還是對(duì)照組，預(yù)備前、預(yù)備后3 d、預(yù)備后7 d及樁核冠修復(fù)后1個(gè)月牙齦溝菌斑中變異鏈球菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌的檢出率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明上述菌群為口腔內(nèi)的常駐菌群，與謝思靜報(bào)道一致。樁核冠修復(fù)失敗的重要原因之一即為修復(fù)后繼發(fā)齲病。劉新慶[8]觀察了樁核冠修復(fù)的常見并發(fā)癥，其中固定修復(fù)后繼發(fā)齲病的患病率可達(dá)2%～18%。樁核冠修復(fù)繼發(fā)齲病的主要危險(xiǎn)因素包括不易清潔、邊緣形態(tài)特殊、食物殘?jiān)鼫舻纫蛩?，而修?fù)材料、冠邊緣適應(yīng)性、咬合功能也為菌斑影響因素[9]。

本研究發(fā)現(xiàn)，受試組變異鏈球菌菌落數(shù)在預(yù)備后3 d顯著在增加?？赡苁腔李A(yù)備導(dǎo)致牙跟面菌斑重新形成，基牙預(yù)備時(shí)需要使用水汽沖洗，而水汽沖洗則會(huì)引起牙面原有生物膜的破壞，重新暴露出牙本質(zhì)，并吸附唾液蛋白和糖蛋白重新形成生物膜[10]；新的生物膜形成后4～72 h大量球菌即可聚集于新形成的生物膜表面形成新的牙菌斑，因此，變異鏈球菌的菌量顯著升高。牙齒預(yù)備過程中會(huì)發(fā)生牙周組織損傷從而導(dǎo)致齦溝液的增加，引起致齲菌的進(jìn)一步增加。而老年人免疫能力較低更有利于致齲菌的生長(zhǎng)[11]。修復(fù)后1個(gè)月，變異鏈球菌數(shù)目顯著減少，與預(yù)備前數(shù)量一致。主要是由于修復(fù)過程恢復(fù)了牙冠鄰接關(guān)系和外展隙，從而減少了食物對(duì)牙齦刺激。另外，牙冠鄰接關(guān)系和外展隙恢復(fù)后，變異鏈球菌的生長(zhǎng)受限，從而菌量減少。黏性放線菌和內(nèi)氏放線菌均屬于放線菌屬[12]。本研究中，黏性放線菌菌量在預(yù)備后3 d顯著增加，在修復(fù)后1個(gè)月顯著降低，但仍高于預(yù)備前水平；內(nèi)氏放線菌菌量在預(yù)備后7 d顯著增加，修復(fù)后1個(gè)月顯著降低；與呂巖[13]研究結(jié)果一致。王岷峰[14]報(bào)道，戴冠后微生態(tài)環(huán)境的改變可以抑制放線菌的生長(zhǎng)。

綜上，變異鏈球菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌的數(shù)量在預(yù)備后7 d有所增加，修復(fù)后1個(gè)月有所降低。在牙體預(yù)備后初期進(jìn)行積極的菌斑控制，值得臨床推廣。