三種封片膠封片的效果比較

代 鵬，肖 磊，周 晟

在病理醫(yī)師閱片過程中，經(jīng)常會聞到濃重刺鼻的二甲苯氣味，這些刺鼻的氣味不僅影響病理醫(yī)師的日常閱片，也給制片的技術人員身體帶來不同程度的傷害，因此，在常規(guī)病理切片制作中，如何在保證切片質(zhì)量的前提下盡可能的減少接觸二甲苯成了病理科工作人員共同關注的問題。近期華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院病理科在封片膠的選用方面進行了甄別，取得良好的效果，在保證不影響顯微鏡閱片質(zhì)量的基礎上，通過干燥封片，最大程度的減少接觸二甲苯，采用新型環(huán)保封片膠封片效果最好。

1 材料與方法

1.1 材料 隨機選擇2018年5～6月華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院病理科存檔的不同部位不同性質(zhì)的組織標本蠟塊200例；傳統(tǒng)中性樹膠(60%二甲苯溶液)；新型環(huán)保封片膠；環(huán)?？旄赡z。

1.2 方法 將隨機選擇的標本蠟塊連續(xù)切片3張，制作石蠟切片，將其分為A、B、C組，再放入72 ℃烤箱內(nèi)烤30 min，然后放入全自動染色機中行常規(guī)HE染色，染色結束后置于通風處至切片表面乙醇完全揮發(fā)，最后由同一名技術員手工封片，其中A組切片采用傳統(tǒng)中性樹膠(以二甲苯作為溶劑，折光率為1.43)封固，B組切片采用新型環(huán)保封片膠封固(以烷烴類化合物作為溶劑，折光率為1.52)，C組切片采用中性快干膠(以硬脂酸和汽油作為溶劑，折光率為1.49)封固。封片時滴加少許封片膠在組織上方，將玻片稍傾斜，用手將蓋玻片順著載玻片斜面輕輕放。由兩位技術人員和兩位病理醫(yī)師從肉眼及顯微鏡下對3組切片進行盲觀察，即不告知觀察者3組切片封片膠的區(qū)別，由觀察者評價3組切片的優(yōu)劣，并做好記錄。

1.3 切片評價標準 (1)肉眼觀察切片封片膠均勻、無明顯氣泡；(2)保持組織染色后原有的透明狀態(tài)，有利于鏡下觀察；(3)鏡下觀察有保存組織細胞核及胞質(zhì)的染色形態(tài)；(4)封片膠完全滲入到染色的組織，隔絕其與外界空氣的接觸。

表1 3組封片膠的成片比較[n(%)]

2 結果

通過3組之間平行對比觀察和盲觀察發(fā)現(xiàn)，A、B兩組切片差異無顯著性，樹膠分布均勻，透明度好，鏡下觀察細胞均可呈現(xiàn)清晰的結構，紅、藍分明，對比清晰(圖1，2)，C組切片透明度良好，但樹膠過于濃稠，不易散開，不能充分滲入到細胞核，導致鏡下見細胞核呈黑色，影響診斷(圖3)。同時在A組、C組切片中均能聞到刺鼻的二甲苯氣味，B組切片無刺鼻氣味，僅聞及輕微的檸檬香味，3組切片均有不同程度的溢膠和氣泡問題(表1)。

①②③圖1 A組HE染色切片:中性樹膠封固,細胞結構清晰,染色分明,但樹膠分布不均勻,可出現(xiàn)巨大氣泡,透明度不佳圖2 B組HE染色切片:新型環(huán)保封片膠封固,細胞結構清晰,染色紅、藍分明,封片膠分布均勻,無氣泡,透明度好圖3 C組HE染色切片:中性快干膠封固,細胞結構清晰,透明度尚可,但易出現(xiàn)大量小氣泡

3 討論

目前市場上出售的各種中性樹脂膠均含有二甲苯，為有害物質(zhì)，對環(huán)境有污染，對人的呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)以及生殖系統(tǒng)均有很強的毒性作用，是一種致癌物質(zhì)[1]，長期接觸不僅對接觸者的記憶能力、反應速度均有不同程度的影響，同時也會引起頭痛、脫發(fā)、失眠等癥狀，甚至造成機體免疫力下降。已有研究[2]發(fā)現(xiàn)將中性樹膠與二甲苯比例控制在5 ∶1時可在最低限度使用二甲苯達到最佳封片濃度，然而在對市面上的三種類型的封片膠進行對比試驗時發(fā)現(xiàn)以二甲苯和汽油作為溶劑的封片膠在使用過程中，二甲苯和汽油均會有一定的揮發(fā)，其濃度難以保持在最佳狀態(tài)，導致封片膠濃稠，不易散開，分布不均勻，樹膠難以滲入到細胞核，致使細胞核呈黑色，再者也易產(chǎn)生大量的空泡腔隙，難以驅(qū)除，造成類似色素樣顆粒的細小黑點，影響鏡下觀察，用力擠壓則會產(chǎn)生膠外溢現(xiàn)象。同時，國家規(guī)定醫(yī)院病理科的切片需要長期保存達15年，有的還需要反復觀察甚至會診，故要求所用封片膠是近于中性、無色或微有顏色的，其折光率與所用載玻片、蓋玻片、透明劑等的折光率幾乎相等。由于折光率與透明度呈正比，與未著色的組織識別力呈反比，若封片膠的折光率高于組織，則透明度較佳，但識別力較差；反之，若折光率低于組織，則透明不良，但未染色部位的識別較為清楚，那么染色的切片則需以折光率在1.51～1.54之間的封片膠封固，透明度最佳，否則鏡下圖像會失真。

當然，隨著病理技術的發(fā)展，人們對于環(huán)保、健康的意識也逐漸提高，目前出現(xiàn)了“全自動染色膠片封片機”的新型技術，它將染色與封片一體化，節(jié)省了人工，減輕了工作強度，且封片快，制作的切片整潔美觀，更重要的是它在封閉環(huán)境下進行，大大減弱了對病理技術人員健康的損害[3]，但其成本高，消耗快，基層醫(yī)院難以推廣。因此采用不含二甲苯物質(zhì)，對封片診斷無影響，對病理技術人員及病理醫(yī)師的健康無傷害，且折光率為1.52的新型環(huán)保封片膠，無疑是目前最好的選擇。同時，我們也期待未來會有更好的健康封片膠以及封片技術應用到病理科日常工作中。