病理切片在闌尾寄生蟲感染診斷中的應用

曾賽凡，楊代興，陳余朋，張 聲

闌尾寄生蟲病感染的術(shù)前診斷比較困難，有時在組織病理檢查中可在腸腔內(nèi)觀察到蟲體，但檢出率較低[1]。本實驗通過術(shù)后大體標本病理切片后行常規(guī)HE染色、特殊染色及免疫組化染色對闌尾腫瘤和寄生蟲感染進行鑒別，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2018年6月福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院病理科診斷的1例闌尾黏液囊腺瘤，送檢手術(shù)切除的腸管一段，切開可見腸腔及闌尾內(nèi)有大量黏液。

1.2 方法 病理大組織取材后經(jīng)10%中性福爾馬林固定24 h。大組織塊脫水透明浸蠟包埋后4～6 μm厚切片，行HE染色，選取鏡下黏液成分多的切片行AB-PAS、Gimesa特殊染色，免疫組化標記CAM5、CDX-2、CK14、EMA，以鑒別腫瘤成分，免疫組化染色采用EnVision兩步法，DAB顯色，鏡下觀察，具體操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行，抗體及工作液均購自福州邁新公司。

2 結(jié)果

HE染色：鏡下見炎癥細胞及黏液樣物，多量黏液及紅染片狀角質(zhì)蛋白樣物形成類似花朵樣結(jié)構(gòu)(圖1)；Gimesa染色：花朵樣結(jié)構(gòu)明顯，致密且有規(guī)律性的排列，絮狀物呈放射狀(圖2)；AB-PAS染色：花朵中央呈現(xiàn)紅藍相間的顯色，外圍似花瓣呈現(xiàn)略嗜堿性淡紫色(圖3)；CAM5、CDX-2、CK14、EMA的免疫組化染色：黏液部分均未見陽性，呈現(xiàn)一致性的類似非特異性的背景著色(圖4)。綜合多種染色結(jié)果結(jié)合臨床病史及肉眼取材所見行病理診斷：闌尾組織呈慢性炎癥改變，闌尾腔擴大，腔內(nèi)見多量黏液，Gimesa染色、AB-PAS染色及CAM5、CDX-2、CK、EMA免疫組化染色顯示類似花朵樣結(jié)構(gòu)均與闌尾腺體上皮細胞的結(jié)構(gòu)完全不同，結(jié)合臨床手術(shù)所見闌尾腫脹黏連，切面富含黏液?？紤]闌尾寄生蟲病伴慢性闌尾炎及闌尾黏液囊腫形成。

①②③④

圖1 多量黏液及紅染片狀角質(zhì)蛋白樣物形成大量類似花朵樣結(jié)構(gòu)，HE 圖2 花朵樣結(jié)構(gòu)明顯且有規(guī)律性的排列，絮狀物呈放射狀，Gimesa染色 圖3 花朵中央呈現(xiàn)紅藍相間，外圍似花瓣呈現(xiàn)略嗜堿性淡紫色，AB-PAS染色 圖4 免疫組化黏液樣物非特異性著色：黏液部分均未見陽性，呈現(xiàn)一致性的類似非特異性的背景著色，EnVision兩步法

3 討論

考慮有寄生蟲感染的標本切片時厚薄相結(jié)合，建議行大組織切片包含腸腔和黏液樣物一整塊取材，可以觀察黏液對腸腔的侵犯以及腸腔結(jié)構(gòu)的改變。黏液放置水中展片容易產(chǎn)生皺褶，所以溫度控制在40 ℃可以讓切片溫和平整的展開。烤片之前放置空氣中讓玻片上的水分揮發(fā)以使切片牢固黏附，染色時單獨染色以免黏液脫落污染其他切片。初步考慮寄生蟲感染的病例需第一時間復查標本肉眼所見，借助解剖顯微鏡等剝離送檢標本，檢查有無細小的蟲體或蟲卵，必要時還可取出該蠟塊，對比切片，切下蟲體所在的部位，溶蠟后取出殘留的蟲體[2]。本例中的闌尾寄生蟲未見到明顯的蟲體和蟲卵結(jié)構(gòu)，無法確認寄生蟲的類別。闌尾寄生蟲一般停留在盲腸內(nèi)，從腸壁內(nèi)的血液、上皮及有機物中吸取營養(yǎng)[3]，所以本例的首發(fā)癥狀是回盲部形成腫物。但免疫組化標記上皮細胞和腫瘤細胞在黏液樣物部位均無表達，HE染色鏡下見有核細胞少，大部分是均質(zhì)黏液樣，闌尾黏膜上皮完整，形態(tài)正常。所以可以明確回盲部腫物并非腫瘤。從HE、Gimesa到AB-PAS染色，黏液樣部位呈現(xiàn)規(guī)則性的放射狀排列，而且花朵樣結(jié)構(gòu)越發(fā)明顯，所以高度懷疑闌尾寄生蟲感染，腺腔細胞形態(tài)和黏液物部位形成了鮮明對比，疑似寄生蟲部分非人體正常結(jié)構(gòu)，外圍有一圈細胞，中間類似分泌物呈黏液樣，該結(jié)構(gòu)在免疫組化中未見任何表達，形成非特異性著色排列。有可能是寄生蟲產(chǎn)生大量的黏液樣分泌物引起了囊腫，此類的闌尾黏液囊腫為單純的黏液分泌潴留，不存在產(chǎn)生黏液腺上皮細胞向囊內(nèi)乳頭樣或腺樣增生。腸道寄生蟲引起慢性闌尾炎，在慢性闌尾炎的基礎(chǔ)上黏液分泌亢進，導致闌尾黏液囊腫。隨著寄生蟲的持續(xù)存在刺激，腸道黏液分泌不斷增加，囊腫擴大，甚至囊壁破裂引起腹膜腔臟器黏連，形成巨大炎性包塊，即腫瘤樣變性，行腸管切除術(shù)解除占位，患者術(shù)后1年隨訪狀態(tài)良好，無復發(fā)跡象。

通過病理切片和多種染色的聯(lián)合運用，對罕見的闌尾寄生蟲病可起到鑒別作用。但對于組織結(jié)構(gòu)中寄生蟲的類別區(qū)分還需積累要多病例，尤其對于蟲體或蟲卵形態(tài)學結(jié)構(gòu)不明顯的病例可行分子標記技術(shù)精確區(qū)分寄生蟲的種類[4]。