諾麗花葉病及其病原鑒定①

余乃通 楊 焱 蔡志英 劉志昕

(1 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所 海南?？?71101;2 云南省熱帶作物科學(xué)研究所 云南景洪666100)

諾麗（Morinda citrifoliaLinn.）為茜草科（Rubiales） 巴戟天屬（Morinda） 的熱帶植物。諾麗具有耐旱和耐鹽特征，適應(yīng)性較強，目前主要在中國海南、臺灣和云南西雙版納等地種植［1-2］。諾麗富含多種營養(yǎng)成分和礦物質(zhì)，有較高的經(jīng)濟和藥用價值［3］。2010 年諾麗被中國衛(wèi)生部批準為新資源食品。

1 諾麗花葉病發(fā)病特征

2015 年，云南省西雙版納市諾麗種植區(qū)爆發(fā)疑似病毒感染病害，染病諾麗葉片呈現(xiàn)不規(guī)則的淡綠色和深綠色相間的斑塊（圖1-A），花無明顯癥狀，但果實逐漸變?。▓D1-B）；諾麗植株表現(xiàn)為典型的花葉癥狀，后期生長受阻、變矮（圖1-C）。近年來，該病害給西雙版納諾麗種植戶造成巨大的經(jīng)濟損失。為了明確該諾麗病害具體的病原及其特征，云南省熱帶作物科學(xué)研究所諾麗研究組與中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所分子病毒學(xué)研究組科研人員開展合作，揭示引起該諾麗病害的病原是一種新的植物病毒。

2 諾麗花葉病病原鑒定

研究組首先對植物樣品進行研磨、離心，然后對病毒粒子進行負染，通過透射電鏡觀察到線性的病毒粒子，病毒粒子長（800±20）nm，寬（20±1）nm，與馬鈴薯Y病毒屬病毒的粒子形態(tài)相似。通過轉(zhuǎn)錄組高通量測序、反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）和5’Race相結(jié)合的方法獲得了該病毒的全基因組，結(jié)果表明該病毒全基因組大小為9 659 nt（GenBank 登錄號MN158696），是一種RNA病毒，具有典型的馬鈴薯Y病毒屬病毒的結(jié)構(gòu)特征。利用病毒多聚蛋白進行系統(tǒng)進化樹分析，結(jié)果顯示該病毒與煙草脈帶花葉病毒（To‐bacco vein banding mosaic virus，TVBMV）同源性最高，但是二者的氨基酸序列相似性僅為50.7%。以上結(jié)果表明，感染西雙版納諾麗植株的疑似病毒為一種新的馬鈴薯Y病毒屬病毒，建議命名為諾麗花葉病毒（Noni mosaic virus，NoMV）［4-5］。

為了調(diào)查由NoMV 引起的諾麗花葉?。∟oni mosaic disease，NoMD）在西雙版納諾麗種植區(qū)的流行學(xué)情況，作者于2016 年的不同月份共收集67 份諾麗花葉病樣品和21 份無明顯癥狀諾麗樣品，提取RNA，設(shè)計NoMV 外殼蛋白（MP）基因引物 （NoMVcp-F： 5’-GGATCGTGCTGACTTACCTGAGC-3’；NoMVcp-R：5’-GGATATGGGCCTCTCGGGCTC-3’）對部分樣品進行RT-PCR 檢測。結(jié)果顯示，諾麗花葉病樣品均感染NoMV 病毒，而部分無明顯癥狀諾麗植株（28.57%）也感染了該病毒，表明該病毒在西雙版納引起較嚴重的諾麗花葉病病害。

在采樣過程中發(fā)現(xiàn)，諾麗植株葉片背面含有大量的蚜蟲和白粉虱（圖1-D）。收集染病葉片的蚜蟲和白粉虱各50 只，提取總RNA，RT-PCR 結(jié)果顯示，在蚜蟲體內(nèi)檢測到了NoMV，而白粉虱體內(nèi)未檢測到該病毒。另外，將攜帶有NoMV 的蚜蟲在健康諾麗植株上取食，在第4 天采用RT-PCR 技術(shù)即可檢測到NoMV，第9天諾麗植株表現(xiàn)為典型的花葉癥狀。

3 諾麗花葉病防控建議與措施

諾麗尚沒有抗NoMV 的相關(guān)品種和有效的抗病毒藥劑。目前，防治該病毒的方法主要以預(yù)防為主，綜合防控措施如下：（1）明確蚜蟲的季節(jié)性規(guī)律，播種時使用長效內(nèi)吸性殺蟲藥，早治蚜蟲；（2）對諾麗種苗進行檢測，不定期隨機抽取諾麗樣品進行RT-PCR檢測，推薦使用上述的NoMVcp-F/R 引物；（3）移除染病植株，因為該病毒也可通過摩擦感染健康植株，所以一旦發(fā)現(xiàn)有明顯花葉病癥狀的植株，應(yīng)該立即移除。

據(jù)悉，該諾麗花葉病已經(jīng)蔓延到云南省的其它諾麗種植區(qū)以及云南鄰近的泰國等地區(qū)，有關(guān)部門和種植戶應(yīng)引起重視并加強防范。