芩草止痢顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

劉素梅，方忠意

（河南省獸藥飼料監(jiān)察所，河南 鄭州 450008）

芩草止痢顆粒主要含有黃芩、白頭翁等藥材，具有清熱止痢的效果。黃芩苷為方中主藥黃芩的特征性有效成分，我們通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷的含量，以及薄層色譜法鑒別方中黃芩和白頭翁，可以很好地控制藥品質(zhì)量。

1 試驗(yàn)儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Waters e2695，2489 檢測(cè)器）、電子天平（METTLER XP250）、超純水處理器（MILLIPORE MILLI-Q）等。

1.2 試藥

黃芩苷對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；黃芩對(duì)照藥材購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；白頭翁皂苷B4 對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 黃芩的鑒別

取該品1 g，加甲醇20 ml，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml 使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩對(duì)照藥材0.3 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3 種溶液各2 μl，分別點(diǎn)于同一以含4%醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）為展開(kāi)劑［1］，展開(kāi)、取出、晾干、噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同的暗綠色斑點(diǎn)。

按處方配比稱取除黃芩外其他藥材并按制備工藝制備樣品作為黃芩陰性對(duì)照樣品，陰性對(duì)照樣品同法操作，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上不顯斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。

2.1.2 白頭翁的鑒別

取該品1.5 g，加甲醇10 ml，超聲處理10 min，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液，另取白頭翁皂苷B4，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法［1］試驗(yàn)，吸取上述3 種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（6.5∶3.5∶1）的下層溶液為展開(kāi)劑［2-3］，展開(kāi)、取出、晾干、噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

按處方配比稱取除白頭翁外其他藥材并按制備工藝制備樣品作為白頭翁陰性對(duì)照樣品，陰性對(duì)照樣品同法操作，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上不顯斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。

2.2 含量測(cè)定

黃芩為該方的主藥之一，黃芩苷為黃芩的特征性有效成分，故選擇黃芩苷作為控制該品質(zhì)量的指標(biāo)成分。

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.2%磷酸溶液（47∶53）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 500。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品10 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲振蕩使溶解，放至室溫，加甲醇至刻度，制成每1 ml含100 μg的溶液；精密量取10 ml，置50 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，制成每1 ml 含20 μg 的溶液，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備

取該品0.5 g，精密稱定，置100 ml量瓶中，加50%甲醇至近刻度，超聲處理30 min，放至室溫，用50%甲醇定容至刻度，搖勻，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液5ml，置50 ml 量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻。用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 線性范圍

取黃芩苷對(duì)照品溶液（100 g/ml），用50%甲醇分別稀釋成1、2、5、10、20、50、100 g/ml 的系列對(duì)照品溶液，按照濃度由低到高，精密吸取上述溶液各10 μl，進(jìn)高效液相色譜儀進(jìn)行分析，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積，并以峰面積值與相對(duì)應(yīng)的對(duì)照品溶液濃度進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=33 146x+4 089，相關(guān)系數(shù)r=0.99 997，即在1～100 g/ml 范圍內(nèi)，黃芩苷峰面積與濃度有良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn)

取同一批樣品按照供試品溶液的制備方法同時(shí)制備6 份，精密吸取上述溶液各10 μl，進(jìn)高效液相色譜儀進(jìn)行分析，計(jì)算黃芩苷含量及其RSD。結(jié)果見(jiàn)表1。該方法具有很好的精密度。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.2.6 回收率試驗(yàn)（準(zhǔn)確度）

取精密度項(xiàng)下已知含量的樣品0.5 g，分別加入與0.5 g樣品所含黃芩苷量相當(dāng)?shù)膶?duì)照品，按照供試品溶液的制備方法處理，共制備6 份，精密吸取上述溶液各10 μl，進(jìn)高效液相色譜儀進(jìn)行分析，計(jì)算黃芩苷含量，以下列公式計(jì)算回收率。

回收率＝（實(shí)測(cè)值-供試品所含被測(cè)成分量）/對(duì)照品加入量×100%

結(jié)果見(jiàn)表2，加樣回收率符合要求。

表2 黃芩苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.7 專屬性試驗(yàn)

按處方配比稱取缺黃芩外其他藥材并按制備工藝制備樣品作為陰性樣品，取陰性樣品按照供試品溶液的制備方法處理，精密吸取10 μl進(jìn)高效液相色譜儀進(jìn)行分析，結(jié)果陰性無(wú)干擾，見(jiàn)圖1～3。

2.2.8 耐用性試驗(yàn)

取兩支不同的色譜柱，按照色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性項(xiàng)下的色譜條件分別進(jìn)同一個(gè)對(duì)照品溶液，計(jì)算理論塔板數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果顯示，兩種柱子在該色譜條件下柱效都達(dá)到4 400以上，方法耐用性良好。

圖1 黃芩苷對(duì)照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 黃芩陰性對(duì)照樣品色譜圖

表3 不同色譜柱試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

白頭翁薄層鑒別時(shí)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，先后采用正丁醇-乙酸-水系統(tǒng)和三氯甲烷-甲醇-水系統(tǒng)為展開(kāi)劑，最終采用三氯甲烷-甲醇-水（6.5∶3.5∶1）的下層溶液為展開(kāi)劑。

流動(dòng)相選擇時(shí)分別考察了甲醇-水-冰乙酸和甲醇-水-磷酸系統(tǒng)，結(jié)果甲醇-水-冰乙酸色譜峰柱效低，基線噪音大，甲醇-水-磷酸系統(tǒng)優(yōu)于前者，所以最終選用甲醇-0.2%磷酸溶液（47∶53）為流動(dòng)相。

用同一批樣品考察了70%乙醇回流提取、70%乙醇超聲提取、50%甲醇超聲提取效果，結(jié)果以上提取方法提取效果沒(méi)有明顯差別，但回流提取操作煩瑣、耗時(shí)費(fèi)力，所以選擇50%甲醇超聲提取。

分別考察了超聲20、30、40、和50 min的提取效果，結(jié)果超聲30 min時(shí)黃芩苷已經(jīng)基本提取完全，再延長(zhǎng)超聲時(shí)間沒(méi)有意義，所以選擇30 min作為超聲提取時(shí)間。