枯草芽孢桿菌513N 對雛雞生長性能及免疫力的影響

申 瑞，屈亞峰，許 靜，王景雪

（1.山西大學生命科學學院，山西太原030006；2.萬榮縣鴻農(nóng)養(yǎng)殖有限公司，山西運城044204）

近年來，在畜禽養(yǎng)殖業(yè)抗生素的使用量越來越多，使用抗生素已經(jīng)成為規(guī)?；B(yǎng)殖場中疾病預(yù)防的主要手段之一，由此導(dǎo)致抗生素的不合理使用甚至濫用，這正威脅著人類的健康[1]?？股氐臑E用在全世界的養(yǎng)殖業(yè)都很普遍，在我國尤為嚴重[2-4]。目前，細菌對抗生素的耐藥性問題日益嚴重，許多國家也對抗生素的使用進行了嚴格的限制[5]。無抗養(yǎng)殖將會成為未來養(yǎng)殖業(yè)的趨向。因此，開發(fā)抗生素的替代產(chǎn)品以及采取相應(yīng)的措施來解決停止使用抗生素后可能產(chǎn)生的問題，是目前急需解決的問題。提高飼料利用率、增強動物免疫力對于畜禽業(yè)發(fā)展具有重要作用。

近年來，一些微生物添加劑在提高飼料利用率、增強動物免疫力方面表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢[6]?？莶菅挎邨U菌作為益生菌的一種，是一種可在飼料中直接添加的微生物菌種，其能夠維持和調(diào)整腸道菌群的平衡，增強免疫能力，分泌各種消化酶，提高飼料消化利用，從而提高動物的生長性能[7-9]。有試驗表明，枯草芽孢桿菌是具有耐酸、耐熱特性的有益菌，適合在腸道內(nèi)生存[10]。作為一種好氧益生菌，枯草芽孢桿菌的芽孢在腸道可以萌發(fā)，并可消耗腸道中游離氧，抑制好氧有害菌的生長，從而使得厭氧的有益菌成為優(yōu)勢菌群[11]。

家禽的育雛期是一個非常重要的生長時期，其生長性能及免疫力對于家禽的產(chǎn)蛋性能具有較大的影響，可為產(chǎn)蛋期奠定物質(zhì)基礎(chǔ)[12]。大午金鳳雞是近些年選育出的蛋雞新品種，該品種的育成彌補了紅羽產(chǎn)粉殼蛋雞在市場中的空白[13]，其具有產(chǎn)蛋時間長和蛋殼顏色鮮艷等優(yōu)點。

513N 菌株是山西大學生命科學學院動物培養(yǎng)實驗室從發(fā)酵植物的混合菌液中分離出的一株枯草芽孢桿菌，具有較強的耐酸性和耐膽鹽性以及產(chǎn)纖維素酶和蛋白酶的能力；同時對常見致病菌如大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、福氏志賀菌、豬霍亂沙門氏菌、黑腐皮菌及山茶炭疽菌均具有抑制作用[14-15]。因此，將Bacillus subtilis 513N 作為飼料添加劑，對禽畜的生長性能和免疫能力會有一定的影響。目前，枯草芽孢桿菌在雛雞飼料中的應(yīng)用研究少有報道。

本試驗旨在探討飼糧中添加適量Bacillus subtilis 513N 制劑對大午金鳳雛雞生產(chǎn)性能、免疫性能及抗氧化功能的影響，并探尋雛雞飼料中Bacillus subtilis 513N 制劑適宜的添加量。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

供試飼料添加劑Bacillus subtilis 513N 制劑（活菌數(shù)為1.0×109cfu/g）由山西大學生命科學學院動物培養(yǎng)實驗室制備。供試母雞品種為大午金鳳。

1.2 試驗方法

選用1 日齡健康、體質(zhì)量相近的大午金鳳母雞400 只，進行7 d 的適應(yīng)性喂養(yǎng)。從第7 天開始將400 只雞，隨機分為4 個組，每組4 個重復(fù)，每個重復(fù)25 只雞。其中，Ⅰ組為對照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組為試驗組，分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0.05%、0.10%和0.15%的枯草芽孢桿菌制劑；各組分別在同棟雞舍中隔離飼養(yǎng)，自由飲水和采食。每天觀察雞群的飲水、采食與健康情況，記錄采食量及發(fā)病情況，試驗周期為35 d。試驗飼糧的每日營養(yǎng)標準參照《蛋雞、肉雞配合飼料》（T/CFIAS 002—2018），并以玉米為主材料進行配制。基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平列于表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3 測定指標及方法

1.3.1 生產(chǎn)性能指標測定 測定各組雛雞的初始體質(zhì)量，每天記錄各組雛雞的采食量。分別于第7、14、21、28、35 天早上測定各組雛雞空腹體質(zhì)量，直到試驗結(jié)束，計算出各組雛雞的日增質(zhì)量、日采食量和料質(zhì)量比。

1.3.2 免疫器官指數(shù)測定 試驗結(jié)束后，各重復(fù)隨機取2 只雛雞，心臟取血，并摘取脾臟、法氏囊。稱量免疫器官并計算免疫器官指數(shù)（g/kg）。

1.3.3 血清生化指標測定 通過心臟采血，采集第35 天的雛雞血液5 mL，以3 000 r/min 的速度離心10 min，取血清，-20 ℃保存；并送至山西高科技醫(yī)學檢測中心測定總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的含量。

1.3.4 脾臟及肝臟的抗氧化能力檢測 分別稱取各重復(fù)中脾臟組織與肝臟組織0.1 g，進行冰浴勻漿后，按照北京索萊寶科技有限公司的試劑盒指導(dǎo)說明分別對抗氧化指標脾臟和肝臟的總抗氧化能力（T-AOC）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性和過氧化氫酶（CAT）活性進行測定。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0 進行處理；采用單因素方差分析程序進行方差分析，差異顯著性采用Duncan 氏法進行多重比較，差異顯著水平為P＜0.05；試驗數(shù)據(jù)均以“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 Bacillus subtilis 513N 制劑對雛雞生長性能的影響

試驗飼養(yǎng)期間無雞死亡情況。由表2 可知，與第Ⅰ組相比，第Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組雛雞末體質(zhì)量均有所提高，其中，第Ⅳ組末質(zhì)量增加最為顯著，增加了6.16%（P＜0.05）；日增質(zhì)量第Ⅳ組較第Ⅰ組顯著增加7.29%（P＜0.05）；第Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組的料質(zhì)量比顯著低于第Ⅰ組，且第Ⅳ組減少最為顯著，較第Ⅰ組減少9.75%（P＜0.05）。由此可以看出，在一定范圍內(nèi)，隨著飼料中添加Bacillus subtilis 513N的增多，雞的末體質(zhì)量會提高，且隨著劑量的增多，其料質(zhì)量比會減少。說明飼喂Bacillus subtilis 513N制劑對雛雞的生長性能具有一定的促進作用。

表2 各組雛雞的生長性能分析

2.2 Bacillus subtilis 513N 制劑對雛雞免疫指數(shù)的影響

各組雛雞飼喂至35 d 時，每組中隨機取5 只雞，迫殺后分別取各組雞脾臟和法氏囊稱量并計算免疫器官指數(shù)（g/kg），結(jié)果列于表3。由表3 可知，第Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組的脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均比第Ⅰ組高，但各組之間差異均不顯著（P＞0.05）。

表3 各組雛雞的免疫器官指數(shù)分析 g/kg

2.3 Bacillus subtilis 513N 制劑對雛雞血清生化水平的影響

從表4 可以看出，與第Ⅰ組相比，第Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組的血清TP 均有提高趨勢，第Ⅲ組和Ⅳ組又顯著高于第Ⅰ組，分別較第Ⅰ組提高23.27%和55.33%（P＜0.05）；第Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組的ALB 均高于第Ⅰ組，且第Ⅳ組達顯著水平；第Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組的GLB 也高于第Ⅰ組，且第Ⅳ組達顯著水平；相比第Ⅰ組，其他各組的HDL-C 有增高的趨勢，第Ⅳ組較第Ⅰ組顯著提高了16.7%（P＜0.05）；相比第Ⅰ組，第Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組的LDL-C 均有降低趨勢，但差異不顯著。TP 升高的趨勢說明飼喂Bacillus subtilis 513N 制劑能提高雛雞對蛋白質(zhì)的利用，降低對飼料的消耗；HDL-C 的增高趨勢說明飼喂Bacillus subtilis 513N 制劑能促進大午金鳳雛雞膽固醇的代謝。

表4 各組雛雞的雛雞血清生化指標分析

2.4 Bacillus subtilis 513N 制劑對雛雞脾臟及肝 臟抗氧化性能的影響

表5 各組雛雞的抗氧化指標分析 U/mg

由表5 可知，在脾臟中，與第Ⅰ組相比，第Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組的脾臟T-AOC 活性均有升高趨勢，且第Ⅲ組和Ⅳ組顯著高于第Ⅰ組，分別較第Ⅰ組提高了31.39%和46.94%（P＜0.05）；第Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組的脾臟SOD 活性均高于第Ⅰ組，分別較第Ⅰ組提高了4.96%、9.53%和19.15%，且第Ⅳ組差異達顯著水平（P＜0.05）；第Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組的脾臟CAT 活性均高于第Ⅰ組，但差異不顯著。在肝臟中，與第Ⅰ組相比，第Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組的肝臟T-AOC活性均有提高，其中，第Ⅲ組和Ⅳ組分別較第Ⅰ組顯著提高了15.69%和20.31%（P＜0.05）；第Ⅲ組和Ⅳ組的肝臟SOD 活性較第Ⅰ組分別顯著提高了22.89%和33.24%（P＜0.05）；第Ⅳ組的肝臟CAT 活性較第Ⅰ組顯著提高了17.08%（P＜0.05）。說明飼喂Bacillus subtilis 513N 制劑能提高大午金鳳雛雞的抗氧化能力。

3 討論

3.1 Bacillus subtilis 513N 制劑對雛雞生長性能的影響

Bacillus subtilis 513N 作為一種好氧菌，可以消耗腸道內(nèi)的氧、促進腸道內(nèi)其他有益厭氧菌的繁殖。另外，其芽孢可在腸道內(nèi)生長，分泌一系列的酶，有助于對飼料的消化，提高利用率[16]，進而促進雛雞的生長性能。

關(guān)于枯草芽孢桿菌在雞飼料中的應(yīng)用已有不少研究，但結(jié)果各有差別。有研究表明，枯草芽孢桿菌作為飼料添加劑可以顯著增加雞的日增質(zhì)量和料質(zhì)量比[17-20]。PARK 等[21]研究結(jié)果顯示，添加不同水平的枯草芽孢桿菌對雞的體質(zhì)量沒有顯著影響，但能顯著提高料質(zhì)量比。本研究中，在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0.05%、0.10%和0.15%的Bacillus subtilis 513N 對雛雞的平均日采食量的影響差異不顯著（P＞0.05），但能顯著提高平均日增質(zhì)量和末體質(zhì)量（P＜0.05），顯著降低料質(zhì)量比（P＜0.05），且添加0.15%的Bacillus subtilis 513N 效果最好。

3.2 Bacillus subtilis 513N 制劑對雛雞免疫指數(shù)的影響

免疫器官的發(fā)育水平是雛雞機體健康狀態(tài)的直接反映。免疫器官包括中樞和外周免疫器官。法氏囊作為中樞免疫器官，是最早產(chǎn)生并提供B 淋巴細胞的器官。脾臟作為禽類最大的周圍免疫器官，參與激發(fā)免疫反應(yīng)[22]。

張春楊等[23]研究發(fā)現(xiàn)，益生菌制劑能顯著促進免疫器官的發(fā)育。本研究中，飼喂Bacillus subtilis 513N 制劑后，雛雞的脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均高于只飼喂基礎(chǔ)飼糧的雛雞，但差異均不顯著，這與唐慧琴等[24]的研究結(jié)果相同。

3.3 Bacillus subtilis 513N 制劑對雞血清生化水平的影響

血清生化指標是系統(tǒng)診斷生物健康狀況的重要指標[25]。其中，TP 具有維持血液正常滲透壓和pH、運輸多種代謝物、調(diào)節(jié)被運輸物質(zhì)生理的作用，其不僅可用于機體營養(yǎng)狀態(tài)的監(jiān)測，還可用于疾病的診斷。HDL-C 作為血清蛋白之一，能增強血脂代謝能力，保持血管暢通。

滑靜等[26]研究表明，添加枯草芽孢桿菌制劑雛雞TP 含量均高于對照組。本研究中，飼喂Bacillus subtilis 513N 制劑雛雞組的TP 和HDL-C 均高于只飼喂基礎(chǔ)飼糧的雛雞組，表明飼喂Bacillus subtilis 513N 制劑有助于維持機體的健康水平。

3.4 Bacillus subtilis 513N 制劑對雛雞抗氧化性能的影響

T-AOC、SOD、CAT 均是反映禽類抗氧化性能的指標，其中，SOD 作為一種生物體內(nèi)的金屬酶，是重要的氧自由基清除劑；CAT 是最主要的過氧化氫清除酶之一[27]；T-AOC 可以反映生物中的總抗氧化水平[28]。若機體造成氧損傷，則會有許多自由基產(chǎn)生，而自由基可以攻擊人體細胞組織且造成連鎖反應(yīng)，從而可能引發(fā)多種慢性疾病，進而影響免疫力，使畜禽更易患病。

本研究中，各組雛雞的脾臟和肝臟的T-AOC、SOD 活性均隨著Bacillus subtilis 513N 制劑的增加有增加的趨勢，這與余東游等[29]、翟玲等[30]的研究結(jié)果一致。表明飼料中添加一定水平的Bacillus subtilis 513N 制劑可以提高雛雞的抗氧化性能。由于飼喂Bacillus subtilis 513N 制劑后，雛雞的抗氧化水平提高，有利于清除機體的氧自由基，提高機體的健康水平和增加飼料的利用率，從而提高了生長性能。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，在飼料中添加一定量的Bacillus subtilis 513N 制劑，可以提高雛雞的生長性能和抗氧化能力，從而提高機體的免疫力。其中，Bacillus subtilis 513N 制劑添加量為0.15%時效果最佳。