響應(yīng)面法優(yōu)化Chlorella vulgaris 224胞外多糖積累及其抑菌和抗氧化活性

孫建瑞，趙君峰，符丹丹，原江鋒，王大紅

河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院 洛陽(yáng)市微生物發(fā)酵工程技術(shù)研究中心，洛陽(yáng) 471023

微藻因具有光合效率高、生產(chǎn)周期短、油脂含量高、不受季節(jié)和氣候限制等優(yōu)點(diǎn)[1]，已成為生產(chǎn)生物柴油最有潛力的原料之一，以微藻制備生物柴油已經(jīng)成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)[2]。但是微藻生產(chǎn)油脂存在規(guī)模化培養(yǎng)、采收及油脂提取方面成本較高的問(wèn)題，這限制了微藻生產(chǎn)生物柴油的商業(yè)化應(yīng)用。微藻除了可以用來(lái)生產(chǎn)生物柴油，還可以生產(chǎn)許多高附加值代謝產(chǎn)物，如活性多糖[3]、葉黃素[4]、多不飽和脂肪酸[5]、蝦青素[6]、胡蘿卜素[7]、凝集素[8]、藻膽蛋白[9]等各種活性物質(zhì)，這些活性物質(zhì)被廣泛應(yīng)用于食品添加劑、營(yíng)養(yǎng)保健品及醫(yī)藥品等領(lǐng)域，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[10]。因此，從降低微藻生產(chǎn)生物柴油成本方面考慮，可以將這些高附加值代謝產(chǎn)物和油脂一起開(kāi)發(fā)利用。

微藻可以產(chǎn)生多種胞內(nèi)或胞外多糖物質(zhì)，這些多糖具有調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫力和抗腫瘤、抗炎癥、抗病毒、抗菌活性、抗氧化活性等[11]。Guzman等[12]發(fā)現(xiàn)綠藻多糖具有一定的免疫抑制劑活性和抗炎活性。Chen等[13]研究發(fā)現(xiàn)從海水小球藻和紫球藻中提取的多糖具有一定的抑制細(xì)菌和真菌的活性，尤其對(duì)中華根霉與稻瘟病菌的抗菌活性極強(qiáng)。Tannin-Spitz等[14]研究發(fā)現(xiàn)提取的紫球藻多糖，及其降解后的不同多糖組分具有清除自由基的能力。Sun等[15]發(fā)現(xiàn)球等鞭金藻的胞外多糖具有抑制大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的活性。Chen等[16]研究發(fā)現(xiàn)薔薇藻的胞外粗多糖具有清除超氧陰離子以及抑制亞油酸自動(dòng)氧化的能力。同時(shí)，國(guó)外學(xué)者對(duì)藻類(lèi)多糖在醫(yī)藥保健和食品領(lǐng)域的應(yīng)用也有深入研究[17]。

然而，微藻多糖的研究大多集中在胞內(nèi)多糖，對(duì)胞外多糖的研究較少。實(shí)驗(yàn)室前期篩選到淡水微藻(編號(hào)為224號(hào))，其油脂含量可以達(dá)到23.8%，初步鑒定為小球藻(C.vulgaris)，有一定的潛在應(yīng)用前景。本課題組初步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其能夠積累胞外多糖，且有一定的抑菌和抗氧化活性，因此在培養(yǎng)末期收集藻體提取油脂的同時(shí)回收培養(yǎng)液，分離其中的胞外多糖，可以增加C.vulgaris的綜合利用價(jià)值。本研究以C.vulgaris作為研究對(duì)象，采用響應(yīng)面法優(yōu)化其胞外多糖的積累，并對(duì)其抑菌活性和抗氧化活性進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

224號(hào)藻株小球藻(C.vulgaris)由實(shí)驗(yàn)室前期篩選得到，受試菌種大腸桿菌(Escherichiacoli)、綠膿桿菌(Pseudomonasaeruginosa)、沙門(mén)氏菌(Salmonellatyphimurium)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、白色葡萄球菌(Staphylococcusalbus)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、中華根霉(Rhizopuschinensis)和黑曲霉(Aspergillusniger)來(lái)自河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院。

實(shí)驗(yàn)用三氯乙酸、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、二丁基羥基甲苯(BHT)、濃硫酸、碳酸氫鈉、苯酚、乙醇等無(wú)機(jī)試劑、有機(jī)溶劑均為國(guó)產(chǎn)分析純；透析袋(截留分子量為7.0 kDa)。

1.2 儀器與設(shè)備

萬(wàn)分之一天平(梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易(上海)有限公司)；TU-1800型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(尤尼柯上海儀器有限公司)；Eppendorf 5417R型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)艾本德股份公司)。

1.3 方法

1.3.1 微藻的培養(yǎng)

以對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的藻液作為種子液，接種于2 L三角瓶中(內(nèi)裝1 L SE培養(yǎng)基，初始pH 7.0)，接種量為10%(V/V)，然后在溫度25 ℃的恒溫光照培養(yǎng)室中培養(yǎng)，光暗比16 h∶8 h，光強(qiáng)度約為100 μmol/m2/s，培養(yǎng)14天。

1.3.2 胞外多糖的制備

微藻培養(yǎng)液6 000 rpm，離心20 min，分別收集藻體和上清液；上清液60 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后透析96 h；收集透析液，加入3倍體積的無(wú)水乙醇，然后靜置過(guò)夜；8 000 rpm離心15 min取沉淀；用5 mL蒸餾水將沉淀溶解，加入適量TCA，攪拌均勻至沉淀不再溶解；8 000 rpm離心10 min，收集上清液；再次添加3倍體積的無(wú)水乙醇于上清液中，沉淀3 h；8 000 rpm離心10 min取沉淀，所得沉淀即為胞外多糖；冷凍干燥后放4 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 胞外多糖含量和產(chǎn)量的測(cè)定

采用苯酚-硫酸法[18]檢測(cè)胞外多糖的濃度，胞外多糖濃度的計(jì)算采用線性方程：Y= 11.895X-0.044 1，R2= 0.996 8(以葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)品配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到糖濃度與吸光值的關(guān)系)，然后分別根據(jù)公式(1)和(2)計(jì)算胞外多糖含量和產(chǎn)量。

胞外多糖含量(%)=

(1)

胞外多糖產(chǎn)量(mg/L)=

(2)

1.3.4 單因素試驗(yàn)

分別考察微藻培養(yǎng)基中NaCl(30、60、90、120、150 mg/L)、NaNO3(100、200、300、400、500 mg/L)、MgSO4(30、60、90、120、150 mg/L)、K2HPO4(50、100、150、200、250 mg/L)和NaHCO3(0、1.0、2.0、3.0、4.0 g)對(duì)C.vulgaris224胞外多糖積累量的影響。

1.3.5 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)

單因素試驗(yàn)之后，進(jìn)一步進(jìn)行Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)以篩選出多個(gè)考察因素中的重要因素，最終選擇NaNO3、NaCl和NaHCO3三個(gè)因素進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)，各個(gè)因素的水平設(shè)計(jì)如表1所示。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)各個(gè)因素及水平

1.3.6 抑菌實(shí)驗(yàn)

將受試菌分別接種在對(duì)應(yīng)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基上，置于恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)(真菌28 ℃ 2天，細(xì)菌37 ℃ 1天)，然后用接種環(huán)挑取活化后的菌種一環(huán)于滅菌的蒸餾水中，混合均勻后制成菌懸液。

抑菌試驗(yàn)采用濾紙片法[19]：將滅菌過(guò)的直徑6 mm的圓形濾紙片烘干后，浸泡于制備好的多糖溶液中12 h；然后將制備好的各種菌懸液(200 μL)置于相應(yīng)的固體培養(yǎng)基表面，涂布均勻；用滅過(guò)菌的鑷子將浸泡好的濾紙片貼在培養(yǎng)基表面，之后將培養(yǎng)皿放在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)(細(xì)菌37 ℃ 18～24 h，真菌28 ℃ 48～72 h)，觀察和測(cè)量抑菌圈直徑；無(wú)菌水作為空白對(duì)照。

1.3.7 DPPH自由基清除能力測(cè)定

參照Feng等[20]的方法測(cè)定，取1.0 mL質(zhì)量濃度不同的多糖溶液，加入0.004% DPPH溶液4 mL，充分混勻，黑暗下靜置30 min，以無(wú)水乙醇作空白對(duì)照，相應(yīng)濃度的BHT作陽(yáng)性對(duì)照，于517 nm處測(cè)定其吸光值。每一樣品平行測(cè)3 次，取其平均值。清除率公式可表示為：

式中：A1為樣品或者陽(yáng)性對(duì)照的吸光值；A2為空白對(duì)照的吸光值。

1.3.8 羥基自由基清除能力測(cè)定

參照Feng等[20]的方法測(cè)定，在試管中分別加入0.4 mL pH 7.4的PBS、0.25 mL重蒸水、0.15 mL 5 mmol/L的鄰二氮菲溶液和0.5 mL 7.5 mmol/L的FeSO4后混合均勻。然后加入1.0 mL不同質(zhì)量濃度的多糖樣品溶液，最后加入1%的過(guò)氧化氫溶液0.1 mL，37 ℃水浴保溫60 min，536 nm處測(cè)定吸光值。陽(yáng)性對(duì)照采用對(duì)應(yīng)濃度的BHT，損傷管中不加樣品，對(duì)照管中樣品和過(guò)氧化氫都不加，空白管中不加過(guò)氧化氫。每一樣品平行測(cè)3 次，取其平均值。清除率公式可表示為：

式中A樣品、A損傷、A對(duì)照、A空白分別為536 nm處樣品管、損傷管、對(duì)照管和空白管的吸光值。

1.3.9 總還原力測(cè)定

參照Chen[21]的方法測(cè)定，在試管中加入1.0 mL質(zhì)量濃度不同的多糖溶液，然后加入0.2 mol/L、pH 6.6的PBS 2.5 mL，1%鐵氰化鉀2.5 mL，置于50 ℃水浴中20 min；加入2.5 mL 10%的TCA，混合均勻后3 000 rpm離心10 min；吸取2.5 mL上清液，加2.5 mL重蒸水和 0.5 mL 0.1%的三氯化鐵溶液，以相應(yīng)濃度的BHT作陽(yáng)性對(duì)照，在700 nm處測(cè)定吸光值。每一樣品平行測(cè)3 次，取其平均值。

2 結(jié)果與討論

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 NaCl對(duì)胞外多糖積累的影響

如圖1所示，當(dāng)NaCl濃度為90 mg/L時(shí)，C.vulgaris224胞外多糖產(chǎn)量達(dá)到最高的21.59 mg/L；之后隨著NaCl濃度的增加，胞外多糖產(chǎn)量呈下降趨勢(shì)，而胞外多糖的含量卻繼續(xù)升高，各濃度之間的差異達(dá)到顯著水平(P<0.05)。這可能是因?yàn)镃.vulgaris在鹽脅迫下會(huì)分泌較多的胞外多糖來(lái)抵御外界環(huán)境的變化；但是較高的鹽濃度會(huì)抑制C.vulgaris的生長(zhǎng)，導(dǎo)致其生物量銳減，從而造成胞外多糖產(chǎn)量的下降。因此，NaCl濃度選擇90 mg/L進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖1 NaCl對(duì)胞外多糖積累的影響Fig.1 Effect of NaCl on extracellular polysaccharide accumulation

2.1.2 NaNO3對(duì)胞外多糖積累的影響

圖2 NaNO3對(duì)胞外多糖積累的影響Fig.2 Effect of NaNO3 on extracellular polysaccharide accumulation

2.1.3 MgSO4對(duì)胞外多糖積累的影響

當(dāng)MgSO4濃度從30 mg/L升高到90 mg/L時(shí)，C.vulgaris胞外多糖的含量和產(chǎn)量呈上升趨勢(shì)；在90 mg/L時(shí)分別達(dá)到最大的11.98%和25.75mg/L；之后隨著MgSO4濃度的增加，胞外多糖的含量和產(chǎn)量則逐漸降低(圖3)，各濃度之間的差異達(dá)到顯著水平(P<0.05)。研究表明，Mg2+有利于藻類(lèi)的生長(zhǎng)發(fā)育，它能夠參與藻細(xì)胞內(nèi)糖、脂肪和蛋白質(zhì)等物質(zhì)的代謝；還可以作為酶的活化劑促進(jìn)藻細(xì)胞的新陳代謝。因此，選擇MgSO4濃度為90 mg/L進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖3 MgSO4對(duì)胞外多糖積累的影響Fig.3 Effect of MgSO4 on extracellular polysaccharide accumulation

2.1.4 K2HPO4對(duì)胞外多糖積累的影響

當(dāng)K2HPO4濃度為100 mg/L時(shí)，C.vulgaris胞外多糖的產(chǎn)量和含量都達(dá)到最高，分別為12.03%和25.59 mg/L；之后隨著K2HPO4濃度的升高，它們都呈下降趨勢(shì)(圖4)，各濃度之間的差異達(dá)到顯著水平(P<0.05)。因此，K2HPO4濃度選擇100 mg/L進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖4 K2HPO4對(duì)胞外多糖積累的影響Fig.4 Effect of K2HPO4 on extracellular polysaccharide accumulation

圖5 NaHCO3對(duì)胞外多糖積累的影響Fig.5 Effect of NaHCO3 on extracellular polysaccharide accumulation

2.1.5 NaHCO3對(duì)胞外多糖積累的影響

添加NaHCO3后，C.vulgaris胞外多糖的含量和產(chǎn)量有明顯的增加，當(dāng)NaHCO3濃度為2.0 g/L時(shí)胞外多糖的含量和產(chǎn)量達(dá)到最大，分別為15.77%和43.45 mg/L；之后進(jìn)一步增加NaHCO3的濃度，胞外多糖的含量和產(chǎn)量則呈大幅下降(圖5)，各濃度之間的差異達(dá)到顯著水平(P<0.05)。

NaHCO3能夠?yàn)槲⒃宓纳L(zhǎng)發(fā)育提供了光合作用所需的碳源，適量添加NaHCO3能夠促進(jìn)微藻的生長(zhǎng)繁殖。NaHCO3的添加雖然可以促進(jìn)C.vulgaris224的生長(zhǎng)發(fā)育，但微藻培養(yǎng)基的pH會(huì)因NaHCO3的加入而改變，從而使微藻培養(yǎng)基呈堿性，不利于C.vulgaris胞外多糖的積累。

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合PB實(shí)驗(yàn)，最終選擇NaNO3、NaCl和NaHCO3作為自變量，響應(yīng)值選擇微藻的胞外多糖產(chǎn)量，進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，設(shè)計(jì)方案及結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 響應(yīng)面設(shè)計(jì)方案及結(jié)果

2.2.2 模型及顯著性分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用Design-Expert軟件進(jìn)行分析，得到的擬合方程如下：

Y=69.92-0.50X1-2.18X2+3.07X3+0.38X1X2+2.44X1X3-4.11X2X3-5.21X12-6.94X22-4.28X32

同時(shí)，利用分析軟件對(duì)回歸方程的方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3可以看出，該模型是高度顯著的(P<0.01)。同時(shí)，模型中X2、X3、X1X3、X2X3、X12、X22、X32的P值均小于0.05，說(shuō)明它們都是顯著的，即它們對(duì)微藻胞外多糖的積累均有顯著影響。該模型的失擬項(xiàng)不顯著(P﹥0.05)，說(shuō)明模型選擇合適。

另外，該模型相關(guān)系數(shù)R2為0.958 4，能夠解釋95.84%的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說(shuō)明該模型相關(guān)度很好；模型的變異系數(shù)為4.55%，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作可靠，該模型能夠很好的反映實(shí)驗(yàn)結(jié)果。總之，該模型擬合度好，實(shí)驗(yàn)誤差小，能夠用來(lái)分析和預(yù)測(cè)C.vulgaris胞外多糖的產(chǎn)量。

表3 方差分析表

注：*差異顯著，P<0.05；**差異極顯著，P<0.01。

Note：*Significant,P<0.05；**Very significant,P<0.01.

各個(gè)因素對(duì)C.vulgaris胞外多糖產(chǎn)量影響程度的大小順序依次為:NaHCO3>NaCl>NaNO3，其中NaHCO3對(duì)胞外多糖產(chǎn)量的影響極顯著，NaCl對(duì)胞外多糖產(chǎn)量的影響顯著。

2.2.3 響應(yīng)曲面分析

響應(yīng)曲面圖可以形象地看出各因素之間的相互作用及最佳參數(shù)，等高線的形狀可以看出兩個(gè)因素之間交互作用的強(qiáng)弱[22]。圖6顯示的是各個(gè)因素交互作用的響應(yīng)曲面圖和等高線形狀圖。

當(dāng)NaHCO3濃度為2.0 g/L時(shí)，微藻胞外多糖產(chǎn)量隨著NaCl和NaNO3濃度的升高先增加后降低；等高線偏圓形，表明NaCl和NaNO3兩個(gè)因素之間的交互作用相對(duì)較弱(圖6a)。

當(dāng)NaCl濃度為90 mg/L時(shí)，微藻胞外多糖產(chǎn)量隨著NaHCO3和NaNO3濃度的升高先增加后降低；等高線偏橢圓形，說(shuō)明NaHCO3和NaNO3兩個(gè)因素之間的交互作用顯著(圖6b)。

當(dāng)NaNO3濃度為200 mg/L時(shí)，微藻胞外多糖產(chǎn)量隨著NaHCO3和NaCl濃度的升高先增加后降低。等高線呈橢圓形，表明NaHCO3和NaCl兩個(gè)因素之間的交互作用顯著(圖6c)。

通過(guò)軟件的進(jìn)一步分析可以得到最大響應(yīng)值(Y)時(shí)各因素(X1、X2、X3)對(duì)應(yīng)的值分別為：X1=203.13 mg/L，X2=85.34 mg/L，X3=2.13 g/L。在此條件下，理論上C.vulgaris224胞外多糖的產(chǎn)量為71.051 3 mg/L。

2.2.4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

根據(jù)響應(yīng)面確定的各因素的最優(yōu)濃度配制微藻培養(yǎng)基，來(lái)驗(yàn)證所得結(jié)果的可靠性。在實(shí)驗(yàn)條件下，C.vulgaris224胞外多糖產(chǎn)量為70.365 7 mg/L，與理論值很接近，相對(duì)誤差僅為0.96%，說(shuō)明該回歸模型準(zhǔn)確度高。經(jīng)優(yōu)化后，C.vulgaris224胞外多糖比優(yōu)化前提高了1.62倍。

2.3 胞外多糖的抑菌活性

C.vulgaris224胞外多糖抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4所示，胞外多糖對(duì)金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抑菌作用，抑菌圈直徑可以達(dá)到14.72 mm；同時(shí)對(duì)白色葡萄球菌、綠膿桿菌和大腸桿菌有較弱的抑菌作用，抑菌圈較小；對(duì)枯草芽孢桿菌、沙門(mén)氏菌、黑曲霉和中華根霉沒(méi)有抑菌作用。

綜上所述，C.vulgaris224的胞外多糖對(duì)細(xì)菌具有抑菌作用，對(duì)真菌沒(méi)有抑菌作用；胞外多糖對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的抑制作用要強(qiáng)于革蘭氏陰性菌。

圖6 各因素交互作用對(duì)胞外多糖產(chǎn)量影響的響應(yīng)面圖和等高線圖Fig.6 Response surface and contour plots of effects of interaction between various factors on the production of extracellular polysaccharide

表4 C.vulgaris 224胞外多糖抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 胞外多糖的抗氧化活性

2.4.1 DPPH自由基清除能力

圖7 胞外多糖對(duì)DPPH自由基的清除能力Fig.7 DPPH radical scavenging activities of extracellular polysaccharide from C.vulgaris 224

C.vulgaris224的胞外多糖對(duì)DPPH自由基的清除能力隨著樣品濃度的升高而增強(qiáng)(圖7)。在檢測(cè)的濃度范圍內(nèi)，胞外多糖的抗氧化活性略低于陽(yáng)性對(duì)照BHT。結(jié)果說(shuō)明，C.vulgaris224的胞外多糖具有較強(qiáng)的清除DPPH自由基的能力。

2.4.2 羥基自由基清除能力

C.vulgaris224的胞外多糖對(duì)羥基自由基的清除能力隨著樣品溶液質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)；在30 mg/mL時(shí)，胞外多糖對(duì)羥基自由基的清除率已超過(guò)50%(圖8)。在檢測(cè)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，胞外多糖的抗氧化活性略低于陽(yáng)性對(duì)照BHT。結(jié)果說(shuō)明，C.vulgaris224的胞外多糖具有較強(qiáng)的清除羥基自由基的能力。

圖8 胞外多糖對(duì)羥基自由基的清除能力Fig.8 Hydroxyl radical scavenging activities of extracellular polysaccharide from C.vulgaris 224

2.4.3 總還原能力

C.vulgaris224胞外多糖的總還原能力隨著樣品濃度的升高而逐漸增強(qiáng)(圖9)。在檢測(cè)的濃度范圍內(nèi)，胞外多糖的總還原力始終略低于陽(yáng)性對(duì)照BHT的總還原力。結(jié)果說(shuō)明，胞外多糖的總還原力較強(qiáng)。

圖9 胞外多糖的總還原能力Fig.9 Reducing power of extracellular polysaccharide from C.vulgaris 224

3 結(jié)論

本研究以油脂含量較高的淡水微藻C.vulgaris224作為研究對(duì)象，采用響應(yīng)面法優(yōu)化其胞外多糖的積累，并對(duì)其抑菌活性和抗氧化活性進(jìn)行研究。通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化得到的C.vulgaris224積累胞外多糖的最佳參數(shù)為NaNO3203.13 mg/L、NaCl 85.34 mg/L、NaHCO32.13 g/L，在此條件下，C.vulgaris224胞外多糖產(chǎn)量為70.365 7 mg/L，比優(yōu)化前提高了1.62倍。抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明C.vulgaris224的胞外多糖對(duì)細(xì)菌有一定程度的抑菌作用，對(duì)金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抑菌作用，對(duì)白色葡萄球菌、綠膿桿菌和大腸桿菌的抑菌作用較弱；對(duì)真菌沒(méi)有抑菌作用。同時(shí)，抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明C.vulgaris224的胞外多糖具有較強(qiáng)的抗氧化活性。本研究為篩選天然抗菌、抗氧化活性物質(zhì)提供了一定的參考價(jià)值，同時(shí)為產(chǎn)油微藻的綜合開(kāi)發(fā)、擴(kuò)大其應(yīng)用領(lǐng)域提供了一定的理論依據(jù)。