絕經(jīng)前后乳腺癌患者臨床病理特征及腫瘤分子分型的相關(guān)性分析

徐玲玉 楊榮華 陳玉芳 李子燕

江蘇省常州市腫瘤醫(yī)院 1 乳腺外科 2 病理科 213000

目前，乳腺癌在全球女性惡性腫瘤中發(fā)病率和死亡率居第一位，并且有一個重要特征是年齡發(fā)病率呈現(xiàn)雙峰分布，我國女性發(fā)病率和死亡率在全球處于比較高的水平，并且有逐年增長的趨勢，隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，女性生活方式發(fā)生顯著改變，乳腺癌年輕化趨勢日益顯著，流行病學(xué)相關(guān)研究顯示，在傳統(tǒng)確認(rèn)的乳腺癌危險因素下，基于分子分型的乳腺癌病理因素研究對于正確判斷乳腺癌預(yù)后因素起著越來越重要的作用。本研究對2014年2月—2018年8月期間我院收治的49例絕經(jīng)前女性與53例絕經(jīng)后女性乳腺癌的臨床病理特征和腫瘤分子分型進行分析，指導(dǎo)臨床治療及預(yù)后判斷。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2014年2月—2018年8月期間我院收治的49例絕經(jīng)前與53例絕經(jīng)后女性乳腺癌患者。

1.2 ER、PR、HER-2、Ki-67檢測方法 (1)抗體：ER、PR為兔抗人單克隆抗體，購自西雅金橋生物有限公司，HER-2為兔抗人單克隆抗體，購自瑞士羅氏公司。(2)免疫組織化學(xué)染色。實驗方法：應(yīng)用瑞士羅氏公司全自動免疫分析儀(VENTANA XT)進行檢測，以已知陽性片作陽性對照，以空白片作陰性對照，一抗選用西雅金橋生物有限公司，二抗及顯色系統(tǒng)均為全自動免疫染色儀自帶封閉套盒，襯染液為Gill蘇木精染色液。具體步驟如下：(1)每張石蠟切片的玻片上標(biāo)記一抗名稱；(2)根據(jù)所需檢測免疫組化項目，電腦輸入免疫組化號與各一抗的名稱，Ebar條碼打印機打印出來標(biāo)簽后對應(yīng)貼到每張防脫片玻片上，全自動儀器不需要額外烤片；(3)仔細檢查機器自帶試劑與各散裝試劑是否足夠完整實驗；(4)將標(biāo)簽表面水分與切片背面擦干，平穩(wěn)放置于切片盤上；(5)將DAB試劑盒、蘇木素、返藍液等試劑置于檢測試劑架上(注意擦干條形碼上水珠)；(6)準(zhǔn)備完畢后，電腦啟動運行程序；(7)染色完成后，打開切片盤，取出切片后先入洗潔精去玻片表面油質(zhì)，然后常規(guī)脫水、透明、封片；(8)使用儀器自帶清潔功能清洗儀器。

1.3 結(jié)果判定 所有乳腺組織標(biāo)本均用4%甲醛固定24h，常規(guī)石蠟包埋后連續(xù)切片，HE染色，光鏡觀察。采用免疫組化SP法染色。試劑盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果由兩名有經(jīng)驗的病理科醫(yī)生閱片。(1)ER、PR的陽性標(biāo)準(zhǔn)：ER、PR均定位于細胞核，腫瘤細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒著色即為陽性細胞。陽性細胞≥1%定義ER或PR為陽性。PgR 20%陽性作為Luminal A型和Luminal B型的臨界值。(2)HER-2的陽性標(biāo)準(zhǔn)：HER-2陽性細胞染色的信號位于胞膜，陽性標(biāo)準(zhǔn)為胞膜染色或胞膜胞漿同時染色，單獨胞漿染色不計為陽性。其中>10%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)不完整的、細胞膜染色判定為(1+)，>10%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)不完整和/或弱～中等強度的細胞膜染色或者≤10%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)強而完整的細胞膜染色判定為(2+)，>10%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)強、完整且均勻的細胞膜染色判定為(3+)，本研究將HER-2(2+)及以下者定義為陰性，HER-2(3+)定義為陽性。(3)Ki-67數(shù)值判定：對于陽性細胞分布較均勻的腫瘤細胞，隨機選取3個或以上浸潤性癌高倍鏡視野計數(shù)，得出平均Ki-67指數(shù)，<15%為低表達，>30%為高表達。以腫瘤細胞核呈棕色為陽性細胞，Ki-67指數(shù)指100個細胞中Ki-67陽性細胞數(shù)。每張切片于400倍鏡下選定10個視野，每個視野計數(shù)100個細胞，計算每張切片上陽性表達的細胞個數(shù)即Ki-67增殖指數(shù)。

1.4 分子分型方法 見表1。

表1 分子分型方法

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 絕經(jīng)前、后腫瘤的病理類型、組織學(xué)分級、腫塊大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況 絕經(jīng)前后患者在病理類型方面無明顯差異(P>0.05)，絕經(jīng)前組在腫瘤組織學(xué)分級Ⅲ級、原發(fā)腫瘤直徑≥2cm、腋窩淋巴結(jié)陽性比例均較絕經(jīng)后組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 絕經(jīng)前、后腫瘤的病理類型、組織學(xué)分級、腫塊大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(n)

2.2 絕經(jīng)前、后腫瘤的分子分型情況 絕經(jīng)后組Lumina型比例較三陰性或HER-2陽性型高于絕經(jīng)前組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 絕經(jīng)前、后腫瘤的分子分型情況(n)

2.3 絕經(jīng)前、后腫瘤組織ER、HER-2表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況 絕經(jīng)前組HER-2陽性且淋巴結(jié)陽性者比例較ER陽性且淋巴陰性高于絕經(jīng)后組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 絕經(jīng)前、后腫瘤組織ER、HER-2表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(n)

3 討論

流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，乳腺癌在45歲左右發(fā)病率隨年齡增長迅速增高，全球約70%的乳腺癌發(fā)生在45歲以上，我國45歲以上女性乳腺癌占所有病例的69.75%[1]，我國乳腺癌地區(qū)分布差異明顯，主要由社會經(jīng)濟發(fā)展和生活方式差異解釋，大城市20余年的上升幅度達到100%～150%[2]。乳腺癌流行病學(xué)的一個重要特征就是年齡發(fā)病率呈現(xiàn)明顯的雙峰，絕經(jīng)期前峰值明顯高于絕經(jīng)期后，這種分布反映了乳腺癌具有較高的異質(zhì)性。乳腺癌的分子分型改變了乳腺癌流行病學(xué)的研究和認(rèn)識模式，基于分子分型的乳腺癌流行病學(xué)中，對傳統(tǒng)確認(rèn)的乳腺癌危險因素，在乳腺癌不同的亞型中的作用具有顯著差異。2000年P(guān)erou等[3]的研究成果對于乳腺癌分子分型具有劃時代意義，通過對基因表達譜的聚類分析將乳腺癌分成Lumina A、Lumina B、HER-2陽性和三陰性。流行病學(xué)對乳腺癌的發(fā)病危險因素的認(rèn)識基本清楚，而預(yù)后因素卻較為模糊，比較公認(rèn)的預(yù)后因素主要受患者的臨床病理特征影響，如腫瘤的組織學(xué)分級、腫塊大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，而不同分子分型的乳腺癌預(yù)后也有顯著差異，相關(guān)研究表明，Lumina型[4-5]預(yù)后最好，其構(gòu)成占全部乳腺癌的50%左右，但三陰性乳腺癌預(yù)后最差，占全部乳腺癌的10%左右，在臨床工作中，我們發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)前后乳腺癌的病理特征及分子分型方面也有顯著的差異，本研究針對此點進行分析，希望為臨床個體化治療和預(yù)后判斷提供理論依據(jù)。

目前研究[6-7]普遍認(rèn)為絕經(jīng)前乳腺癌特別是35歲以下乳腺癌分化低，腫瘤直徑大，易出現(xiàn)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后差，ER陰性率高及HER-2陽性率高。本研究發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)前患者在腫瘤組織學(xué)分級Ⅲ級、原發(fā)腫瘤直徑≥2cm、腋窩淋巴結(jié)陽性比例均高于絕經(jīng)后患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與國內(nèi)外多數(shù)文獻報道一致。

如今通過免疫組化分析得出的分子分型已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床，指導(dǎo)乳腺癌患者的綜合治療，包括手術(shù)方式的制定、化療方案的選擇、是否需要行內(nèi)分泌治療及靶向治療，并對乳腺癌患者的預(yù)后進行評估。相關(guān)研究[8]報道，不同的分子分型顯著影響乳腺癌的預(yù)后，其中Lumina亞型與HER-2陽性和三陰性的DFS和OS曲線截然分開，提示前者預(yù)后較好。

Lumina型乳腺癌發(fā)展相對較慢，內(nèi)分泌治療效果好，術(shù)后5年內(nèi)復(fù)發(fā)率相對較低。本研究中發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)后組Lumina 型比例高于絕經(jīng)前組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示絕經(jīng)后患者較絕經(jīng)前預(yù)后相對較好。三陰性乳腺癌因其特殊的病理特征和較差的預(yù)后，成為研究的熱點，研究表明[9]，三陰性乳腺癌中位腫瘤大小為2cm，約50%伴隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且組織學(xué)分級多為3級，不適合接受針對受體陽性患者的內(nèi)分泌治療及針對HER-2陽性患者的靶向治療，放化療成為其術(shù)后的主要治療方式，且術(shù)后5年內(nèi)復(fù)發(fā)率高。近年來隨著驅(qū)動基因重要性的不斷加強，Her-2狀態(tài)成為分子分型的重要原則，Her-2是乳腺癌明確的預(yù)后指標(biāo)，與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，相關(guān)研究[10-11]表明：HER-2陽性與乳腺的預(yù)后和患者生存率呈負(fù)相關(guān)。本研究中發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)前乳腺癌患者腫瘤組織HER-2陽性同時伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比例高于絕經(jīng)后患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示絕經(jīng)前患者較絕經(jīng)后預(yù)后相對較差。不同亞型乳腺癌惡性程度差異較大，有針對性的加強絕經(jīng)前后乳腺癌亞型的研究，可以提高乳腺癌防治的效率，減少過度診斷和治療的發(fā)生，加強個體化的治療。