牛羊品種改良胚胎繁殖技術(shù)

齊勒盼·朱力地別克　阿布力孜

一、影響牛羊品種改良胚胎繁殖技術(shù)應(yīng)用效果的因素

在牛羊品種改良胚胎繁殖技術(shù)的實際應(yīng)用中，胚胎質(zhì)量、操作手段，以及供體、受體同期發(fā)情性等因素，均會對牛羊品種改良效果產(chǎn)生影響。在冷凍存儲、收集處理胚胎樣品時，因為胚胎本身的生產(chǎn)方式存在差異性，使得不同胚胎發(fā)育潛能、胚胎質(zhì)量難以保障。繼而使得牛羊胚胎在移植后，不同母體其受胎率區(qū)別較大。所以為確保母牛、母羊可以正常受胎，相關(guān)人員應(yīng)重視提供借助高質(zhì)量牛羊胚胎，提高移植成功率。另外，胚胎在母體子宮內(nèi)成長、發(fā)育的時候，母體子宮分泌、環(huán)境變化，以及供體、受體發(fā)情期是否同步，均會影響牛羊品種改良期間的胚胎繁殖情況。再者，牛羊品種改良胚胎繁殖技術(shù)在具體操作時，對人員技術(shù)要求較高。相關(guān)人員胚胎解凍、移植等操作的規(guī)范性與標(biāo)準(zhǔn)性，會直接影響胚胎移植的妊娠率，以及母體受胎率。

二、牛羊品種改良胚胎繁殖技術(shù)

在國家政策、資金的支持與引導(dǎo)中，新疆牛羊品種改良工作取得顯著成效。而牛羊品種改良胚胎繁殖技術(shù)，在實踐中，主要包括供體母牛、母羊，以及受體母牛、母羊的選擇、同期發(fā)情的有效控制、供體母牛母羊排卵處理等工作，以及受胎成功的胚胎存儲、回收、冷凍保存與胚胎質(zhì)量檢測、移植等內(nèi)容。

1、有效處理同期發(fā)情

牛羊品種改良胚胎繁殖技術(shù)中，有效處理同期發(fā)情屬于繁殖技術(shù)運(yùn)用的基礎(chǔ)性工作。具體措施如下。首先，供體、受體選擇。在選擇供體母牛、牛羊時，為確保其妊娠率、胚胎移植的成功率，應(yīng)挑選年齡在2到6歲的經(jīng)驗性母羊及母牛。同時確保其品種的優(yōu)良，從而肯定其育種價值，并且沒有遺傳、感染性疾病，遺傳特征明顯、性能穩(wěn)定，身體較為壯碩，以及采食欲望強(qiáng)烈。而受體母牛與母羊的年齡應(yīng)在2到5歲之間，保持著良好、穩(wěn)定的發(fā)情周期，采食欲望同樣強(qiáng)烈。沒有生殖系統(tǒng)類的疾病，可以順利完成生產(chǎn)任務(wù)，且生產(chǎn)經(jīng)驗豐富。

其次，健康檢查。供受體選擇完畢后，相關(guān)人員在實踐牛羊品種改良胚胎繁殖技術(shù)前，應(yīng)對其進(jìn)行全面的身體檢查，檢測其健康指標(biāo)。然后定期記錄母羊、母牛發(fā)情時間，總結(jié)其發(fā)情規(guī)律。在正式移植胚胎前，為預(yù)防受體出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，應(yīng)避免隨意更改其飼養(yǎng)位置。

發(fā)情期信息記錄完成后，可選擇供體母牛母羊、受體母牛母羊完成同期發(fā)情處理工作。

最后，同期發(fā)情處理。在此期間，相關(guān)人員在臨近排卵期、發(fā)情期后，借助P4、PGC、PMSG、LH等常用的外源性性激素，進(jìn)行同期發(fā)情處理。上述外源性性激素中，由于PGC本身的溶解黃體能力較強(qiáng)，能夠提高供體母牛母羊、受體母牛母羊同期發(fā)情率，且使用效果明顯、性價比高，所以在牛羊胚胎繁殖技術(shù)運(yùn)用中有著較強(qiáng)的實踐優(yōu)勢。

2、供體的超排卵處理

供體的排卵處理時間，一般在母牛、母羊第一個發(fā)情周期內(nèi)。相關(guān)人員在供體發(fā)情期內(nèi)，選擇合適時間，通過注射促性腺激素，促進(jìn)供體卵巢的成長發(fā)育，提高其排卵數(shù)量。而供體的超排卵處理環(huán)節(jié)，在牛羊品種改良胚胎繁殖期間，有助于提高供體母牛或母羊的胚胎數(shù)量。據(jù)了解，規(guī)范且標(biāo)準(zhǔn)的供體的超排卵處理后，供體排卵時，可回收10～15枚胚胎。若是胚胎數(shù)量少，不僅會導(dǎo)致胚胎回收難度大，還會影響受體受精率。

3、胚胎樣品采集

胚胎樣品采集，主要集中在供體母牛、母羊在成功受精后的一周內(nèi)進(jìn)行。在此期間，相關(guān)人員會在母?；蚰秆蛟诒６苷＝壎ê螅蒙僭S的普魯卡，對供體母牛、母羊的尾椎硬膜外腔區(qū)域進(jìn)行麻醉處理，以便于減少供體不適感，確保胚胎收集的順利。需要注意的是，保定架應(yīng)按照前高后低的方式擺放，前后距離應(yīng)保持在18厘米。正式收集胚胎前，相關(guān)人員需在供體后期肢體、外陰衛(wèi)生消毒后，借助開張器慢慢將供體子宮擴(kuò)張開，并同步清理供體子宮內(nèi)部粘液。然后借助兒通管，沖洗供體子宮，同時使用消毒、清潔完畢的錐形瓶，將沖洗液收集。

4、胚胎質(zhì)量檢測

檢測胚胎質(zhì)量前，相關(guān)人員應(yīng)在提前將錐形瓶內(nèi)的沖洗液靜置處理，在30分鐘后，使用高精度的實體顯微鏡，查找沖洗溶液內(nèi)存有的胚胎，并記錄胚胎數(shù)量。然后將消過毒的習(xí)慣，將沖洗液吸取并移放至PBS保存滴液內(nèi)。在沖洗溶液與滴液逐漸融合后，將其放置在200倍顯微鏡下分析滴液中的胚胎質(zhì)量。之后結(jié)合現(xiàn)有的胚胎質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分級，將其劃分為A、B、C、D 等四個等級，并將其分開存放，再選出優(yōu)質(zhì)胚胎，用于牛羊品種改良中的胚胎繁殖。

5、胚胎的冷凍保存

牛羊品種改良胚胎繁殖技術(shù)中，胚胎的保存方式主要為冷凍保存。直接冷凍、常規(guī)冷凍、玻璃化冷凍等都屬于當(dāng)前時期，牛羊胚胎的冷凍保存方式。在哺乳類動物胚胎保存中，常規(guī)冷凍應(yīng)用較為廣泛。相關(guān)人員可將選出的優(yōu)質(zhì)胚胎，及時放置在冷凍液中，在平衡放置一段時間后，根據(jù)每分鐘0.5攝氏度速度，將試管溫度調(diào)至零下35攝氏度，并迅速投入液氮罐保存。但選擇此種冷凍方式時，還應(yīng)將糖類、丙乙醇、乙二醇等常用防凍劑添加到胚胎中。

而直接冷凍法與常規(guī)冷凍法較為相同，其區(qū)別在于冷凍劑的選用，該冷凍方式，多選擇乙二醇。除此之外，玻璃化冷凍法在實際運(yùn)用中，是將提前收集的優(yōu)質(zhì)胚胎，靜置在玻璃冷凍液之后，直接放置在液氮罐內(nèi)保存。這一冷凍過程，可直接繞過胚胎的冰晶化時期，直接將液態(tài)胚胎調(diào)整至玻璃化狀態(tài)。無需對胚胎進(jìn)行緩慢降溫處理，有助于簡化胚胎冷凍環(huán)節(jié)，高效預(yù)防胚胎冷凍存儲期間，出現(xiàn)損傷現(xiàn)象，影響牛羊胚胎的成功率。

6、胚胎的移植處理

移植胚胎時，應(yīng)全面檢查受體母牛身體狀態(tài)，確保受體母牛、母羊卵泡直徑在20 毫米左右。一般情況下，受體母牛、母羊在發(fā)情處理后的36 小時后，會逐漸產(chǎn)生排卵現(xiàn)象。另外，正式移植胚胎移植時，還應(yīng)檢查受體母牛黃體直徑是否大于15 毫米，且凹凸感明顯。然后使用已消毒習(xí)慣，分三次吸取PBS保存液中的胚胎，并將其輸送至受體牛母?；蚰秆虻淖訉m內(nèi)部，取出移植腔。

（作者單位：1.834600 新疆塔城地區(qū)額敏縣喀拉也木勒鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站;2.830001 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院）