藏藥舟葉橐吾根部的化學成分研究

陳 佳，鄭國偉，郝小江

(1.云南中醫(yī)藥大學 云南省傣醫(yī)藥與彝醫(yī)藥重點實驗室，云南 昆明 650500；2.云南中醫(yī)藥大學 中藥學院，云南 昆明 650500；3.中國科學院 昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室，云南 昆明 650201)

舟葉橐吾(Ligulariacymbulifera)為菊科橐吾屬植物，別名舷葉橐吾、船苞橐吾或船蒼橐吾，廣泛分布于云南西北部、四川西南部至西北部的橫斷山脈.藏醫(yī)用其幼苗和嫩葉治療膽熱證、瘡瘍等癥，具有解痰化咳、清熱解毒、舒緩疼痛的功效[1-2].舟葉橐吾的主要化學成分是艾里莫芬倍半萜，降碳倍半萜[3-5]，Bisabolane倍半萜[6-7]和Pyrrolizidinge生物堿[8].本課題組前期以植物毒活性篩選結果為導向，從舟葉橐吾根部分離得到多個具有潛在化感作用的艾里莫芬倍半萜類化合物[9].為繼續(xù)深入研究舟葉橐吾的潛在化感作用，本文利用多種色譜分離手段對其根部95%甲醇提取物的化學成分進行了研究，分離得到9個已知化合物，包括1個香豆素，2個黃酮，2個木脂素和4個桂皮酸衍生物(圖1).

1 實驗部分

1.1 儀器試劑與植物材料

Bruker AVANCE Ⅲ 500/800MHz型核磁共振儀(TMS為內標，德國Bruker公司)；Agilent 1200高效液相色譜儀(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)；MCI GEL樹脂(CHP-20P，70～150 μm，日本三菱化工)；Sephadex LH-20羥丙基葡聚糖凝膠(40～70 μm，瑞典Amersham Pharmacia Bioteh AB公司)；薄層色譜硅膠板GF254、柱層析硅膠(100～200目，200～300目，青島海洋化工廠)；色譜柱(XSELECT CSH Prep C18，5 μm, 19 mm×150 mm, 愛爾蘭Waters公司)；顯色劑為10 % H2SO4的乙醇溶液；所用化學試劑為分析純(天津化學試劑公司).

實驗用植物于2015年8月采集自云南香格里拉地區(qū)，由中國科學院昆明植物研究所牛洋副研究員鑒定鑒定為舟葉橐吾(Ligulariacymbulifera)，憑證標本(KIB H20150913) 存放在中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室.

1.2 提取與分離

舟葉橐吾的干燥根15.0 kg粉碎，經體積分數為95% 甲醇(MeOH)回流提取3次(3 × 15 L，每次6 h)，減壓濃縮得浸膏1.3 kg.浸膏用水懸浮后用乙酸乙酯(EtOAc)萃取得EtOAc部分800 g.用100～200目硅膠拌樣進行常壓硅膠柱層析，分別用石油醚(PE)、二氯甲烷∶丙酮(CH2Cl2∶Me2CO)(1∶0；9∶1；1∶1；0∶1，V/V) 和MeOH進行洗脫，采用薄層層析硅膠(TLC)對各餾分進行檢測，合并相同部分得到5個餾分(Fr. A～E).Fr. C (CH2Cl2∶Me2CO=9∶1，160 g) 經MPLC-MCI柱層析(MeOH∶H2O，20∶80～100∶0，V/V) 梯度洗脫，采用TLC檢測合并得到6個餾分(Fr. C-1-C-6).Fr. C-2 (25 g) 分別經常壓硅膠柱層析(PE∶Me2CO，80∶1～40∶1，V/V)和凝膠(MeOH)柱層析，HPLC純化(EtOAc∶H2O，35∶65～20∶80,V/V)后得化合物1(3.2 mg),2(3.9 mg)，3(6.3 mg)，4(13 mg)，5(4.9 mg)和6(5.0 mg).Fr. C-3(18 g)依次經常壓硅膠柱層析(CH2Cl2∶Me2CO，200∶1～20∶1，V/V)和凝膠(MeOH)柱層析，再經HPLC純化(EtOAc∶H2O，50∶50～20∶80，V/V)得到化合物7(5.2 mg)，8(2.2 mg)和9(3.7 mg).

圖1 化合物1～9的結構

2 結構鑒定

umbelliferone (1) 淡黃色粉末，ESI-MS (m/z):163 [M+H]+, 分子式C9H6O3;1H NMR (500 MHz, CD3OD)δH: 7.67 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-4), 7.40 (1H, d,J= 10.0 Hz, H-5), 6.93 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.82 (1H, d,J= 10.0 Hz, H-6), 6.20 (1H, d,J= 10.0 Hz, H-3);13C NMR (500 MHz, CD3OD)δC: 165.5 (s, C-7), 164.2 (s, C-2), 156.0 (s, C-9), 145.2 (d, C-4), 131.1 (d, C-5), 115.3 (d, C-6), 113.8 (d, C-3), 111.6 (s, C-10), 102.8 (d, C-8).以上數據與文獻[10]對照基本一致，故鑒定化合物為umbelliferone.

caffeic acid (2) 淡黃色晶體，ESI-MS (m/z):203 [M+Na]+, 分子式C9H8O4;1H NMR (500 MHz, CD3OD)δH:7.45 (1H, d,J= 1.5 Hz, H-7), 7.06 (1H, s, H-2), 6.82 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-5), 6.67 (1H, dd,J= 8.5, 3.0 Hz, H-6), 6.27 (1H, d,J= 1.5 Hz, H-8);13C NMR (500 MHz,CD3OD)δC: 176.0 (s, C-9), 145.9 (s, C-4), 144.1 (s, C-3), 141.0 (d, C-7), 127.8 (s, C-1), 121.4 (d, C-6), 121.2 (d, C-8), 116.6 (d, C-5), 114.5 (d, C-2).以上數據與文獻[11]對照基本一致，故鑒定化合物為caffeic acid.

4-acetophenol (3) 白色結晶，ESI-MS (m/z):159 [M+Na]+, 分子式C8H8O2;1H NMR (500 MHz, CD3OD)δH: 7.85 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-2, 6), 6.82 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-3, 5), 2.50 (3H, s, 8-Me);13C NMR (500 MHz, CD3OD)δC: 199.5 (s, C-7), 164.1 (s, C-1), 132.2 (d, C-2, 6), 130.1 (s, C-4), 116.3 (d, C-3, 5), 26.3 (q, C-8).以上數據與文獻[12]對照基本一致，故鑒定化合物為4-acetophenol.

4-(3′,4′-dihydroxycinnamoyl)-oxy-methyl cinnamate (4) 淡黃色固體，ESI-MS (m/z): 341 [M+H]+, 分子式C19H16O6;1H NMR (500 MHz, CD3OD)δH: 8.85 (1H, s, OH), 8.43 (1H, s, OH), 7.60 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-7), 7.54 (2H, d,J= 8.0 Hz, H-2, 6), 7.53 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-7′), 7.16 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2′), 7.02 (1H, dd,J= 16.0, 2.0 Hz, H-6′), 6.92 (2H, d,J= 8.0 Hz, H-3, 5), 6.85 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5′), 6.33 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-8), 6.26 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-8′), 3.69 (3H, s, 9-OMe);13C NMR (500 MHz, CD3OD)δC: 167.2 (s, C-9), 166.8 (s, C-9′), 159.4 (s, C-4), 147.6 (s, C-4′), 145.2 (s, C-3′), 144.6 (d, C-7′), 144.5 (d, C-7), 129.8 (d, C-2, 6), 126.5 (s, C-1′), 125.9 (s, C-1), 121.4 (d, C-6′), 115.6 (d, C-3, 5), 115.2 (d, C-5′), 114.6 (d, C-8), 114.2 (d, C-8′), 114.1 (d, C-2′), 50.4 (q, 9-OMe).以上數據與文獻[13]對照基本一致，故鑒定化合物為4-(3′,4′-dihydroxycinnamoyl)-oxy-methyl cinnamate.

5′,3-dihydroxy-4′-methoxyflavanone (5) 淡黃色固體，ESI-MS (m/z): 285 [M+H]+, 分子式C16H12O5;1H NMR (500 MHz, CD3OD)δH: 7.92 (1H, d,J= 9.0 Hz, H-8), 7.49 (1H, t,J= 9.0, 6.8 Hz, H-7), 7.40 (1H, d,J= 2.2 Hz, H-2′), 7.08 (1H, d,J= 9.0 Hz, H-6), 6.90 (1H, s, H-6′), 6.87 (1H, d,J= 2.2 Hz, H-3′), 6.64 (1H, s, H-3), 3.92 (3H, s, 4′-OMe);13C NMR (500 MHz, CD3OD)δC: 180.2 (s, C-4), 165.4 (s, C-2), 164.3 (s, C-9), 160.0 (s, C-5), 152.4 (s, C-5′), 149.4 (s, C-4′), 127.5 (d, C-7), 125.5 (s, C-1′), 119.8 (d, C-2′), 117.4 (d, C-6′)，116.3 (s, C-10), 113.9 (d, C-6), 112.7 (d, C-3′), 105.5 (d, C-8), 103.7 (d, C-3), 56.5 (q, 4′-OMe).以上數據與文獻[14]對照基本一致，故鑒定化合物為5′,3-dihydroxy-4′-methoxyflavanone.

3′,5-dihydroxy-4′-methoxyflacanone (6) 淡黃色固體，ESI-MS (m/z): 287 [M+H]+, 分子式C16H14O5;1H NMR (500 MHz, CD3OD)δH: 7.67 (1H, d,J= 5.5 Hz, H-7), 6.95 (3H, overlap, H-8, 2′, 3′), 6.43 (1H, dd,J= 4.5, 1.0 Hz, H-6), 6.28 (1H, d,J= 1.0 Hz, H-6′), 5.53 (1H, d,J= 1.5 Hz, H-2),3.86 (3H, s, 4′-OMe), 2.97 (1H, dd,J= 1.5, 8.5 Hz, H-3a), 2.67 (1H, dd,J= 1.5, 8.5 Hz, H-3b);13C NMR (500 MHz, CD3OD)δC: 193.1 (s, C-4), 165.7 (s, C-5), 162.4 (s, C-9), 149.3 (s, C-4′), 147.8 (s, C-5′), 133.6 (s, C-1′), 129.7 (d, C-7), 118.9 (d, C-2′), 114.5 (d, C-3′), 113.5 (d, C-6′), 113.1 (s, C-10), 112.5 (d, C-6), 104.2 (d, C-8), 80.7 (d, C-2),56.4 (q, 4′-OMe), 45.0 (t, C-3).以上數據與文獻[15]對照基本一致，故鑒定化合物為3′,5-dihydroxy-4′-methoxyflacanone.

picropodophyllin (7) 無定型白色粉末，ESI-MS (m/z): 415 [M+H]+, 分子式C22H22O8;1H NMR (500 MHz, CDCl3)δH: 7.04 (1H, br s, H-8), 6.45 (2H, br s, H-2′, 6′), 6.37 (1H, br s, H-5), 5.93 (2H, d,J= 20.0 Hz, O-CH2-O), 4.51 (2H, m, H-11), 4.43 (1H, dd,J= 6.3, 9.4 Hz, H-1), 4.10 (1H, d,J= 5.0 Hz, H-4), 3.85 (3H, s, 4′-OMe), 3.82 (6H, s, 3′, 5′-OMe), 3.23 (1H, dd,J= 9.3, 5.0 Hz, H-3), 2.73 (1H, d,J= 5.0 Hz, H-2);13C NMR (500 MHz, CDCl3)δC: 177.9 (s, C-12), 153.6 (s, C-5′), 153.6 (s, C-3′), 147.3 (s, C-7), 147.0 (s, C-6), 139.3 (s, C-1′), 137.0 (s, C-4′), 132.1 (s, C-9), 130.6 (s, C-10), 109.2 (d, C-5), 105.5 (d, C-2′), 105.5 (d, C-6′), 105.3 (d, C-8), 101.2 (t, O-CH2-O), 69.8 (t, C-11), 69.4 (d, C-1), 60.9 (q, 4′-OMe), 56.2 (q, 3′-OMe), 56.2 (q, 5′-OMe), 45.4(d, C-3), 44.0 (d, C-4), 42.6 (d, C-2).以上數據與文獻[16]對照基本一致，故鑒定化合物為picropodophyllin.

isopicropodophyllone (8) 無定型白色粉末，ESI-MS (m/z): 413 [M+H]+, 分子式C22H20O8;1H NMR (800 MHz, C6D5N)δH: 7.72 (1H, br s, H-8), 6.93 (2H, br s, H-2′, 6′), 6.58 (1H, br s, H-5), 5.98 (2H, d,J= 9.0 Hz, O-CH2-O), 4.96 (2H, m, H-11), 4.92 (1H, m, H-1),4.52 (1H, dd,J=4.0, 7.2 Hz, H-4), 4.31 (1H, d,J= 4.0 Hz, H-3), 3.92 (3H, s, 4′-OMe), 3.72 (6H, s, 3′, 5′-OMe), 2.91 (1H, m, H-2);13C NMR (800 MHz, C6D5N)δC: 195.9 (s, C-1), 178.7 (s, C-12), 154.3 (s, C-3′), 154.3 (s, C-5′), 147.1 (s, C-6), 147.1 (s, C-7), 139.8 (s, C-1′), 137.8 (s, C-4′), 137.8 (s, C-9), 132.2 (s, C-10), 108.6 (d, C-5), 107.1 (d, C-2′), 107.1 (d, C-6′), 105.5 (d, C-8), 101.5 (t, O-CH2-O), 68.4 (t, C-11), 60.6 (q, 4′-OMe), 56.1 (q, 3′-OMe), 56.1 (q, 5′-OMe), 45.6 (d, C-3), 44.9 (d, C-4), 44.1 (d,C-2).以上數據與文獻[16]對照基本一致，故鑒定化合物為isopicropodophyllone.

hydrocinnamic acid (9) 淡黃色固體，ESI-MS (m/z): 209 [M+H]+, 分子式C11H12O4;1H NMR (500 MHz, CDCl3)δH:7.89 (2H, d,J= 13.5 Hz, H-2, 6), 7.83 (2H, d,J= 13.5 Hz, H-3, 5), 4.72 (2H, s, H-1′), 4.51 (2H, d,J= 4.2 Hz, H-1″), 3.80 (2H, d,J= 4.2 Hz, H-2″);13C NMR (500 MHz, CDCl3)δC: 165.5 (s, C-2′), 165.4 (s, C-3″), 134.1 (s, C-4), 133.4 (s, C-1), 129.9 (d, C-2, 6), 129.4 (d, C-3, 5), 68.9 (t, C-1′), 63.8 (t, C-2″), 61.4 (t, C-1″).以上數據與文獻[17]對照基本一致，故鑒定化合物為hydrocinnamic acid.

3 結語

對舟葉橐吾(Ligulariacymbulifera)根部95% 甲醇提取物的化學成分進行研究，分離得到9個化合物.根據其理化性質及波譜數據，對照文獻分別鑒定為umbelliferone (1)，caffeic acid (2)，4-acetophenol (3)，4-(3′, 4′-dihydroxycinnamoyl)-oxy-methyl cinnamate (4)，5′, 3-dihydroxy-4′-methoxyflavanone (5)，3′, 5-dihydroxy-4′-methoxyflacanone (6)，picropodophyllin (7)，isopicropodophyllone (8)，hydrocinnamic acid (9)，均為非萜類已知化合物，其中化合物4～8為首次從該種植物中分離得到.這些化合物將為后續(xù)研究舟葉橐吾的潛在化感作用提供物質基礎.