單倍型供者性別與年齡對外周血造血干細(xì)胞采集質(zhì)量的影響

張?jiān)旅?，張建平，李學(xué)英，陳 娟△，馬菲菲，喬佳麗，彭露霞，尹晴雪

河北燕達(dá)陸道培醫(yī)院：1.血細(xì)胞分離室；2.移植科；3.護(hù)理部，河北廊坊 065200；4.山東德州聯(lián)合醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，山東德州 253000

造血干細(xì)胞移植(HSCT)是血液系統(tǒng)惡性疾病的有效治療手段，單倍體相合造血干細(xì)胞移植在臨床應(yīng)用已近20年，并且取得了巨大發(fā)展。對于惡性血液病患者，無人類白細(xì)胞抗原(HLA)全相合供者時(shí)，單倍體相合親緣供者已成為國內(nèi)最為廣泛的供者來源[1]。大部分患者均有至少1位HLA部分相合或單倍型親屬供者。HLA等位基因的遺傳規(guī)律遵從孟德爾遺傳定律，在遺傳過程中作為一個(gè)完整的遺傳單位由親代傳給子代，即是單倍型形式連鎖遺傳的，子代可隨機(jī)從親代雙方各遺傳一個(gè)HLA單倍型，因此，單倍型親屬包括父母、子女、同胞或堂表親。外周血造血干細(xì)胞聯(lián)合骨髓造血干細(xì)胞移植可減少慢性移植物抗宿主病發(fā)生，提高患者生存質(zhì)量[2]。河北燕達(dá)陸道培醫(yī)院在單倍型HSCT中，第1天在適合的麻醉術(shù)下采集適量骨髓造血干細(xì)胞，第2天行外周血造血干細(xì)胞(PBSC)采集術(shù)，采集足夠的造血干細(xì)胞是 HSCT成功的關(guān)鍵[3]。河北燕達(dá)陸道培醫(yī)院采用COBE apectra血細(xì)胞分離機(jī)應(yīng)用AutoPBSC程序通過離心作用將血液細(xì)胞進(jìn)行分離，以收集所需的血液成分。本研究對河北燕達(dá)陸道培醫(yī)院311例單倍型移植的健康供者的采集情況及相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行分析比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 采用回顧性分析方法，選取2016年2月至2018年2月在河北燕達(dá)陸道培醫(yī)院進(jìn)行PBSC采集的311例單倍型供者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)應(yīng)用COBE apectra血細(xì)胞分離機(jī)，循環(huán)血量10 000～15 000 mL；(2)供者年齡≥20歲；(3)骨髓造血干細(xì)胞采集術(shù)后次日行PBSC采集術(shù)者。因各種原因需再次采集PBSC者未納入本研究中。將納入研究的供者按性別分為男性組和女性組，男性組160例，平均年齡(36.24±0.64)歲，平均體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(24.97±3.94)kg/m2；女性組151例，平均年齡(35.85±0.63)歲，平均BMI(22.91±3.29)kg/m2。兩組供者年齡、循環(huán)血量、采集前WBC、采集時(shí)間等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)河北燕達(dá)陸道培醫(yī)院倫理委員會審查批準(zhǔn)。

1.2儀器與試劑 供者采集前血常規(guī)采用血細(xì)胞分析檢測儀(美國貝克曼庫爾特DXH800)，采集物WBC和采集物單個(gè)核細(xì)胞(MNC)%采用血細(xì)胞分析檢測儀(邁瑞B(yǎng)C-2600)，采集物CD34+%采用流式細(xì)胞檢測儀(BD FACSCalibur)。抗凝劑為山東威高集團(tuán)生產(chǎn)的血液保存液(Ⅰ)，為復(fù)方制劑，其1 000 mL的主要組分為：枸櫞酸鈉22.0 g、枸櫞酸8.0 g、葡萄糖24.5 g。

1.3方法 分析性別與年齡因素對健康供者造血干細(xì)胞質(zhì)量的影響。比較各組供者采集物中的WBC、MNC%、CD34+%、MNC數(shù)和CD34+數(shù)。(1)供者動員：移植前單倍型親屬供者常規(guī)做HLA配型、血常規(guī)+血型、生化全項(xiàng)、感染8項(xiàng)、凝血4項(xiàng)、HBV定量、HCV定量、弓形蟲免疫球蛋白(Ig)G+IgM、巨細(xì)胞病毒(CMV)IgG+IgM、EBV IgG+IgM、胸部X線片、心電圖等檢查，供者采用集落刺激因子(G-CSF)5～10 μg/(kg·d)分早晚2次皮下注射進(jìn)行干細(xì)胞動員。(2)靜脈通路：COBE apectra血細(xì)胞分離機(jī)應(yīng)用雙針式管路，需建立2條靜脈通路，異基因供者采血端一般選擇肘部靜脈穿刺，使用AutoPBSC管路自帶的背孔鋼針或18G靜脈留置針，回輸端一般選擇手背或手腕處靜脈穿刺，使用18G或20G靜脈留置針。因采集時(shí)間比較長，回輸端選擇手背或手腕處靜脈，可減少供者采集過程中的制動顧慮，增加舒適性，且回輸端選擇留置針，方便供者活動。(3)采集方法：動員3 d后行骨髓造血干細(xì)胞采集術(shù)，次日采集前2 h皮下注射G-CSF 5～10 μg/(kg·d)后行PBSC采集術(shù)。采用血細(xì)胞分離機(jī)安裝AutoPBSC管路，機(jī)器自檢通過后，輸入供者性別、身高、體質(zhì)量、外周血WBC和紅細(xì)胞比容(HCT)，根據(jù)輸入資料自動設(shè)置相關(guān)程序參數(shù)，采集過程根據(jù)具體情況手動調(diào)整。采集前口服葡萄糖酸鈣溶液20 mL，采集過程中每一小時(shí)口服10～20 mL。女性供者或瘦小男性供者采集全程將10%葡萄糖酸鈣注射液加入5%葡萄糖注射液250 mL中，另建靜脈通路緩慢輸注，嚴(yán)密觀察有無枸櫞酸鹽中毒癥狀，一旦發(fā)生中毒應(yīng)及時(shí)對癥處理。循環(huán)血量10 000～15 000 mL。全血流速40～60 mL/min。枸櫞酸鈉抗凝劑/全血比率1∶12～1∶15。將每一位供者的各項(xiàng)指標(biāo)記錄在采集登記本中。

2 結(jié) 果

2.1男性組和女性組造血干細(xì)胞供者一般情況比較 見表1。男性組和女性組造血干細(xì)胞供者年齡、采集前WBC、循環(huán)血量及采集時(shí)間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2男性組和女性組造血干細(xì)胞供者采集物情況比較 見表2。男性組采集物的WBC、CD34+%、MNC數(shù)、CD34+數(shù)與女性組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；男性組采集物的MNC%與女性組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3男性組和女性組不同年齡者采集物情況比較 見表3。男性組≤35歲者采集物的MNC%、CD34+%、CD34+數(shù)與>35歲者比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；女性組≤35歲者各項(xiàng)采集物指標(biāo)與>35歲者比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。男性組≤35歲者采集物的WBC、CD34+%、MNC數(shù)、CD34+數(shù)與女性組≤35歲者比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；男性組>35歲者采集物的MNC%、CD34+數(shù)與女性組>35歲者比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 男性組和女性組造血干細(xì)胞供者一般情況比較

表2 男性組和女性組造血干細(xì)胞供者采集物情況比較[M(P25～P75)]

注：與女性組比較,*P<0.05。

表3 男性組和女性組不同年齡者采集物情況比較

注：與本組>35歲者比較,*P<0.05；與女性組≤35歲者比較，#P<0.05；與女性組>35歲者比較，△P<0.05。

3 討 論

PBSC主要存在于有核細(xì)胞群體中[4]。HSCT成功的關(guān)鍵是供者提供的 CD34+細(xì)胞是否足量,采集物中CD34+細(xì)胞越多，即CD34+細(xì)胞>2×106/kg(受者體質(zhì)量)，對于受者造血及免疫系統(tǒng)的重建有重要作用[5]。替代供者尤其是單倍型移植的發(fā)展，使HSCT徹底告別供者來源困難的時(shí)代。目前的主要問題已不再為是否有供者，而是如何在多個(gè)供者中選擇最佳供者。本研究結(jié)果顯示，相同動員及采集情況下，男性供者年齡≤35歲與年齡>35歲時(shí)CD34+細(xì)胞數(shù)均優(yōu)于女性，年齡≤35歲的男性供者更優(yōu)于年齡>35歲的男性供者。年齡>35歲的女性供者M(jìn)NC%方面優(yōu)于年齡≤35歲的女性供者，但CD34+細(xì)胞數(shù)方面無區(qū)別。本研究結(jié)果可為臨床醫(yī)生在選擇供者時(shí)提供理論依據(jù)。有研究報(bào)道，在大量臨床病例基礎(chǔ)上提出的單倍型移植供者“優(yōu)化選擇法則”，即首選年輕、男性、非遺傳母系抗原不和供者，可有效降低移植合并發(fā)病率，提高患者生存率[6]，這與本研究結(jié)果相符。

有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，性別、年齡對PBSC動員采集并無明顯影響，但其報(bào)道中為患者，而本研究中全部為健康供者，患者與供者之間干細(xì)胞動員及采集的區(qū)別有待研究[6-7]。同時(shí)，也有研究表明，CD34+細(xì)胞數(shù)與性別、年齡、外周血WBC無關(guān)，而外周血MNC數(shù)量是影響采集效率的重要因素[8]，此研究中人群為兒童，其中位年齡為10歲，而本研究中人群為中青年。另外，有研究報(bào)道，供受者性別組合對于移植預(yù)后的影響主要存在于男性患者中，女供男是預(yù)后較差的供受者性別組合，女供男組非復(fù)發(fā)病死率較高，無病生存率及總生存率較低[2]。本研究結(jié)果顯示，男性供者在 CD34+細(xì)胞方面優(yōu)于女性，當(dāng)患者是男性時(shí)，優(yōu)先選擇男性供者，可為臨床提供理論依據(jù)。RINALDI等[9]和白連軍等[10]研究顯示，男性采集結(jié)果優(yōu)于女性，與本研究相符。張曦等[11]分析結(jié)果顯示，18～60歲患者采集效果最好，>60～65歲患者最差;男性較女性好，健康供者中性別對采集效果無影響。朱玲等[12]研究顯示，BMI僅對每公斤體質(zhì)量CD34+產(chǎn)率呈弱負(fù)相關(guān)，提示高BMI會減低供者每公斤體質(zhì)量細(xì)胞產(chǎn)率，但臨床PBSC成功的關(guān)鍵在于患者輸入CD34+細(xì)胞>2×106/kg(受者體質(zhì)量)。鄭龑龍等[13]分析結(jié)果顯示，BMI對采集PBSC后供者血紅蛋白(Hb)、血小板(PLT)降幅有影響，偏瘦組Hb水平下降程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于超重組及肥胖組，對偏瘦供者，應(yīng)在參數(shù)設(shè)置上進(jìn)行調(diào)整，減少供者外周血Hb降幅，提高PBSC采集的安全性。美國骨髓捐贈者登記中心規(guī)定，供者在PBSC采集前，若第1天PLT<120×109/L或第2天<80×109/L需考慮供者PBSC采集的安全性，以避免在采集后出現(xiàn)PLT<50×109/L[14]。

相對于非血緣造血干細(xì)胞來源與臍帶血造血干細(xì)胞來源，單倍型移植具有供者來源廣泛的特點(diǎn)，幾乎所有人均可找到供者。從倫理層面分析，由于親情關(guān)系的存在，供者的意愿會更強(qiáng)，當(dāng)患者因植入不良或復(fù)發(fā)等合并癥再次需要供者來源的造血干細(xì)胞或淋巴細(xì)胞時(shí)，操作性更強(qiáng)，有利于提高總體生存率。在有選擇供者空間時(shí)，優(yōu)先選擇年輕男性供者。