溫莪術(shù)油提取方法優(yōu)化研究

羅 莎，趙 祺，#，郭月琴，，崔 友，李曉祥，任仙櫻，4*

（1.溫州大學(xué)生命科學(xué)研究院，浙江溫州325035；2.合肥市未來(lái)藥物開(kāi)發(fā)有限公司，安徽合肥230000；3.浙江天瑞藥業(yè)有限公司，浙江瑞安325200；4.浙江省生物醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心，浙江溫州325035）

溫莪術(shù)（溫郁金、片姜黃）是浙江省著名的道地藥材，為歷版《中國(guó)藥典》收載品種。姜科植物溫郁金根莖部分經(jīng)蒸煮干燥后的藥材為溫莪術(shù)（根莖部分經(jīng)切片干燥后的藥材為片姜黃，須根膨大部分經(jīng)蒸煮干燥后的藥材為溫郁金），其性味辛、苦、溫，歸肝、脾經(jīng)[1-2]，具行氣破血、消積止痛功效[3]，臨床用于治療疲瘕痞塊、瘀血經(jīng)閉、食積脹痛、早期宮頸癌等癥狀。現(xiàn)代藥理研究顯示，莪術(shù)油為溫莪術(shù)主要活性成分，具有抗炎、抗腫瘤、抗早孕、抗菌、鎮(zhèn)痛、升高白細(xì)胞、保肝、抑制血小板聚集和抗血栓形成等作用[4-5]。莪術(shù)油的成分多為萜類(lèi)及倍半萜衍生物，其抗菌、抗病毒等的主要成分是倍半萜類(lèi)的莪術(shù)醇、莪術(shù)酮等[6]。因此可將莪術(shù)醇視為莪術(shù)油質(zhì)量控制的標(biāo)志性成分之一，以判斷其提取方法的優(yōu)劣。

通常揮發(fā)油的提取方法有水蒸氣蒸餾法、溶劑法、微波法、超臨界流體萃取法等[7]，現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道單一方法提取莪術(shù)油的工藝研究中僅以莪術(shù)油的提取量為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，尚未見(jiàn)系統(tǒng)研究提取工藝對(duì)莪術(shù)油提取率及其質(zhì)量的影響[8]。王曉慧等[9]研究了影響超臨界CO2萃取和水蒸汽蒸餾法中溫莪術(shù)揮發(fā)油提取的主要因素，這類(lèi)以莪術(shù)油得率為提取方法優(yōu)劣指標(biāo)評(píng)價(jià)的具有一定片面性[10]。超臨界CO2萃取法是通過(guò)超臨界流體提取出質(zhì)量完好的有效成分，無(wú)溶劑殘留，但存在生產(chǎn)上一次性設(shè)備投入較大、提取時(shí)間較長(zhǎng)等不足。水蒸氣蒸餾提取法中長(zhǎng)時(shí)間的加熱甚至煮沸也可能會(huì)使莪術(shù)揮發(fā)油中的某些成分分解。因此，為了克服現(xiàn)有提取技術(shù)存在的缺點(diǎn)和不足，筆者以石油醚、正己烷、環(huán)己烷等為前處理提取溶劑，建立一種超聲波前處理-微波法提取莪術(shù)油工藝。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

DFT-200 粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）；超聲波清洗器（上海Branson 公司，SB2200）；DZF-6020 恒溫真空干燥箱（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）；HA201-40-48 型超臨界CO2萃取設(shè)備（江蘇南通華安公司）；1 000 mL DZHW 調(diào)溫型電熱套（北京永光明醫(yī)療儀器廠）；Agilent LC-1260 高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；BT125D 型電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）。

石油醚（廣州化學(xué)試劑廠）、正己烷（天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠）、環(huán)己烷（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），試驗(yàn)所用試劑均為分析純。

1.2 莪術(shù)油提取方法

1.2.1 超聲波前處理-微波法提取莪術(shù)油。取烘干的溫莪術(shù)切片，粉碎，過(guò)50 目篩，得到溫莪術(shù)粉末，加入不同質(zhì)量比的有機(jī)溶劑，超聲處理30 min；通過(guò)減壓蒸餾除去70%的有機(jī)溶劑；加入不同倍數(shù)質(zhì)量的水，200 W 微波提?。淮崛⊥耆?，收集油相，加入干燥劑干燥，減壓蒸餾除去剩余有機(jī)溶劑，得莪術(shù)油。1.2.2 超臨界CO2萃取法提取莪術(shù)油。在溫度65℃下，設(shè)定固定分離壓力為5 MPa，分離溫度為50℃，流量為22 L/h，萃取壓力為25 MPa，萃取2 h。

1.2.3 水蒸氣蒸餾法提取莪術(shù)油。待測(cè)物的粒度為10 目，料液比倍數(shù)設(shè)定為10 倍，提取9 h。

1.3 揮發(fā)油含量測(cè)定

利用HPLC 測(cè)定不同方法提取的揮發(fā)油中莪術(shù)醇含量。

1.3.1 色譜條件。色譜柱：Agilent-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈∶水（58∶42）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；柱溫：25℃。莪術(shù)醇與其他成分能達(dá)到基線分離，理論塔板數(shù)以莪術(shù)醇計(jì)不低于3 500。

1.3.2 對(duì)照品溶液制備。精密稱(chēng)取莪術(shù)醇對(duì)照品10.0 mg，置于100 mL 容量瓶中，以流動(dòng)相定容，制得莪術(shù)醇對(duì)照品儲(chǔ)備液。

1.3.3 供試品溶液制備。取莪術(shù)油樣品0.2 g，精密稱(chēng)定，置于250 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)重。超聲處理30 min，放冷，稱(chēng)重，滴加甲醇補(bǔ)足減失的重量，制得供試品液。

1.3.4 精密度試驗(yàn)。取同一批溫莪術(shù)供試液，連續(xù)進(jìn)樣6 次進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果，計(jì)算RSD 值。所得RSD值為0.91%，表明該方法精密度良好。

1.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批溫莪術(shù)樣品5 份，按供試品制備法制得待測(cè)供試品，進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算莪術(shù)醇含量，測(cè)定結(jié)果，計(jì)算RSD。所得RSD 值為2.51%，表明該方法的重現(xiàn)性良好。

1.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取同一供試品溶液（批號(hào)XXXX）各10 μL，按“1.3.1”項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8、12、18、24 h 進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得莪術(shù)醇峰面積的RSD 為1.41%（n= 3），表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

1.3.7 加樣回收率試驗(yàn)。稱(chēng)取一已知含量的溫莪術(shù)樣品5 份，每份約0.1 g，精密稱(chēng)重，每份樣品中分別加入莪術(shù)醇對(duì)照品1.4 mg，按供試品制備法制得待測(cè)供試品，進(jìn)樣檢測(cè)。計(jì)算樣品的加樣回收率，結(jié)果平均回收率為99.57%，RSD 為3.10%。

1.3.8 樣品中莪術(shù)醇含量測(cè)定。分別取各法制備的莪術(shù)油樣品0.1 g，精密稱(chēng)定，按供試品液制備方法制得待測(cè)供試品液，進(jìn)樣檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

由表1～2 可知，采用超聲波前處理-微波法提取莪術(shù)油，最高提取率可達(dá)4.71%，其油中莪術(shù)醇的含量為3.31%，均高于超臨界CO2流體提取和水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)油含量和油中莪術(shù)醇的含量?？梢?jiàn)，該提取方法具有提取率高、耗時(shí)短以及操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。

表1 超聲前處理-微波法參數(shù)設(shè)置及提取率

表2 不同方法提取的莪術(shù)油及莪術(shù)醇含量的測(cè)定結(jié)果 %

3 結(jié)論

通過(guò)有機(jī)溶劑超聲處理藥材粉末，在超聲處理過(guò)程中實(shí)現(xiàn)物理破碎，使大部分揮發(fā)油在溶劑中溶解，然后除去有機(jī)溶劑，得到揮發(fā)油，測(cè)得收率可達(dá)3.5%～4.7%，最后利用HPLC 檢測(cè)其油中莪術(shù)醇的含量，測(cè)得莪術(shù)醇含量亦最高?？梢?jiàn)，該試驗(yàn)方法所需時(shí)間較短、成本較低，不需要一次性投入較大的設(shè)備，可用于規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。