S100A11、HIF-1α在胰腺癌組織中的表達及與腫瘤惡性程度的關系

李辰，茍菲，張?zhí)熹h

（南陽醫(yī)學高等?？茖W校第一附屬醫(yī)院普通外科，河南 南陽 473053）

流行病學研究證實，我國部分地區(qū)2010-2017年胰腺癌的平均發(fā)病率可達284~593/10萬人左右[1]。臨床上胰腺癌的無瘤生存時間不足18個月，綜合性治療措施治療后的3年生存率不足35%，臨床整體預后較差[2]。

在揭示胰腺癌的發(fā)病病因的過程中,可以發(fā)現(xiàn)腫瘤相關調控蛋白或者分子的改變,能夠通過影響到胰腺上皮細胞的多種病理機理的激活,從而促進了胰腺癌的發(fā)生。鈣囊素（S100A11）的表達上升，能夠通過結合細胞膜內的鈣離子,進而激活癌細胞內的腫瘤信號通路，提高了癌細胞核DNA的轉錄速度[3]；低氧誘導因子-1α（HIF-1α）能夠通過誘導缺氧性環(huán)境，促進癌細胞氧化應激性損傷，增加了癌細胞的持續(xù)性異常分裂和擴增的風險[4]。部分研究者探討了HIF-1α的表達在卵巢癌患者中的表達情況，認為HIF-1α的表達上升能夠顯著促進卵巢癌患者臨床預后的惡化,加劇卵巢癌患者臨床分期的進展[5]，但在胰腺癌患者中的研究較少。為了揭示S100A11、HIF-1α的表達與胰腺癌的關系,從而為臨床上胰腺癌患者的綜合性診療提供理論基礎,本次研究選取我院病理科2015年3月-2016年12月收治的80例胰腺癌組織,探討了S100A1 1、HIF-1α的表達及其與胰腺癌患者臨床病理特征的關系，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院病理科2015年3月-2016年12月收治的80例胰腺癌組織(胰腺癌)、胰腺癌術后切緣經病理學檢查證實為正常胰腺組織40例（癌旁組組織）。

胰腺癌組，年齡42~77歲，平均59.4±10.6歲，男44例、女36例；TNM分期：Ⅰ期18例、Ⅱ期34例、Ⅲ期28例；胰腺癌分化程度：高分化22例、中分化31例、低分化27例；發(fā)生淋巴結轉移39例；胰腺頭部72例、胰腺體尾部8例。癌旁組織，年齡42~75歲，平均58.7±9.8歲，男21例、女19例。兩組患者的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

納入標準：⑴胰腺癌的診斷標準參考《胰腺癌綜合診治專家共識2016年版》中的標準；⑵經病理學證實為胰腺癌，病理學類型均為導管腺癌；⑶手術前患者未接受放化療；⑷患者年齡19～79歲；⑸本研究獲得醫(yī)學倫理委員會的批準、患者知情同意，各項資料完整。

排除標準：⑴合并其他部位的惡性腫瘤；⑵手術前已經接受了放化療；⑶資料缺失，無法進行統(tǒng)計分析。

1.2 S100A11蛋白、HIF-1α蛋白檢測方法 采用石蠟進行連續(xù)性切片，脫蠟至水后采用H2O2室溫下孵育10min,磷酸鹽緩沖液沖洗3次,每次3~5min,8%的蛋白粉封閉液(商品名：BSA購自南京博奧生物科技公司)，封閉2h，倒去封閉液后加入一抗（兔來源 濃度1：1000~1500）,4℃冰箱過夜，磷酸鹽緩沖液沖洗3次,每次3~5min,加入二抗（鼠來源1：400~500），室溫孵育 20~30min，磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次3~5min，加入辣根酶或堿性磷酸酶的標記物，室溫孵育10min，磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次3~5min，滴加顯色劑（DAB購自南京博奧生物科技公司），復染，脫水，封片。

1.3 免疫組化結果判斷 免疫組化結果判定：S100A11蛋白的陽性著色表達于細胞質和細胞核、HIF-1α蛋白的陽性著色表達于細胞質,呈黃色、棕黃色、褐色表達,⑴根據著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據陽性細胞比例：陽性細胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數(shù)51%～75%為3分、陽性細胞數(shù)所占比例>75%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≧3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法 符合正態(tài)分布的計量數(shù)據表述采用（x±s）表示，正態(tài)分布檢測方法采用pp圖或者qq圖，兩組間比較采用兩組獨立樣本的t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman秩相關分析法；P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義，統(tǒng)計軟件采用SPSS16.0版本。

2 結果

2.1 兩組標本中的S100A11、HIF-1α蛋白情況比較 胰腺癌組織中的S100A11蛋白、HIF-1α蛋白陽性表達率分別為77.50%、70.00%,癌旁組織的S100A11蛋白、HIF-1α蛋白陽性表達率分別為17.50%、10.00%,兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；見表 1，圖 1、圖 2。

2.2 胰腺癌組織的S100A11蛋白、HIF-1α蛋白表達相關性 胰腺癌組織中的S100A11蛋白與HIF-1α蛋白表達無顯著的相關性（Spearman秩相關系數(shù)=0.170，P=0.132>0.05）；見表 2。

表1 兩組標本中的S100A11蛋白、HIF-1α蛋白情況比較[n（%）]

圖1 S100A11蛋白免疫組化檢測結果（×200）

圖2 HIF-1α蛋白免疫組化檢測結果（×200）

表2 胰腺癌組織的S100A11蛋白、HIF-1α蛋白表達相關性

2.3 胰腺癌組織的S100A11蛋白在不同病理參數(shù)組織中的表達差異 在Ⅲ期胰腺癌組織中的S100A11蛋白陽性表達率顯著的高于Ⅰ期和Ⅱ期，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；在不同病灶直徑、分化程度、是否發(fā)生淋巴結轉移的胰腺癌組織中的S100A11蛋白陽性表達率差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；見表 3。

2.4 胰腺癌組織的HIF-1α蛋白在不同病理參數(shù)組織中的表達差異 在Ⅲ期胰腺癌組織中、發(fā)生淋巴結轉移的胰腺癌組織中、病灶直徑＞3cm胰腺癌組織中的HIF-1α蛋白陽性表達率顯著的高于Ⅰ期和Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結轉移、病灶直徑≤3cm的胰腺癌組織，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；在不同分化程度的胰腺癌組織中的HIF-1α蛋白陽性表達率差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；見表4。

表3 胰腺癌組織的S100A11蛋白在不同病理參數(shù)組織中的表達差異

表4 胰腺癌組織的HIF-1α蛋白在不同病理參數(shù)組織中的表達差異

3 討論

胰腺導管上皮細胞的持續(xù)性病變,能夠顯著促進胰腺癌的發(fā)生,特別是在合并有膽道系統(tǒng)疾病的患者中，胰腺癌的發(fā)病風險可進一步的上升[6]。臨床上長期的觀察發(fā)現(xiàn),胰腺癌患者的五年生存率或者中位生存時間等預后指標不佳,其治療后的總體生存時間往往不足32個月[7]。免疫靶向性治療能夠在消化系統(tǒng)惡性腫瘤的輔助治療過程中發(fā)揮作用,其能夠抑制癌細胞的DNA的擴增速度，降低癌細胞的復發(fā)風險。而本次研究對于胰腺癌患者體內S100A11、HIF-1α的表達分析研究，不僅能夠揭示胰腺癌的發(fā)病機制,同時還能夠為臨床上胰腺癌患者的免疫靶向性治療提供治療研究靶點。

S100A11是S100蛋白家族成員,其主要表達于血管內皮細胞或者平滑肌細胞中,在鈣離子濃度的調控下,S100A11的表達濃度可顯著上升。S100 A11的上升能夠通過結合上皮細胞膜上的糖蛋白配體結構，誘導癌細胞內的第二信使的激活，增加了癌細胞內MAPK或者AKT信號通路的激活程度,導致胰腺導管上皮細胞的畸變的發(fā)生[8]；HIF-1α是缺氧誘導因子家族成員,其羧基結構上包含了數(shù)個磷酸化結構,能夠參與到炎癥反應或者惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中。HIF-1α誘導的局部腫瘤微環(huán)境的改變,能夠導致癌基因突變風險的顯著上升，導致癌基因錯配修復能力的下降[9]。基礎方面的研究還認為，HIF-1α的上升能夠抑制癌細胞的凋亡，導致癌細胞G0/S期比例的下降[10]。部分研究者探討了HIF-1α的表達與胰腺癌的關系，認為HIF-1α的表達與胰腺癌的發(fā)生密切相關，但對于S100A11的探討分析較少。

通過對于胰腺癌和癌旁組織的免疫組化分析可見,在胰腺癌組織中，S100A11、HIF-1α的表達濃度均明顯的上升,高于癌旁組織，差異較為明顯，提示了S100A11、HIF-1α的高表達均能夠促進胰腺癌的發(fā)生發(fā)展。通過匯集不同的相關文獻，筆者認為這主要由于S100A11、HIF-1α的下列幾個方面的作用機理有關[11-13]：⑴S100A11的上升能夠導致癌細胞的鈣離子濃度的調控異常,增加了鈣離子誘導的癌細胞內轉錄激活因子的上調,提高了癌細胞DNA的轉錄和增殖活性；⑵HIF-1α能夠通過誘導低氧微環(huán)境，促進癌細胞的畸變，導致癌細胞浸潤能力和侵襲能力的增強。Zhang Q等[14]研究者也認為,在胰腺癌患者中，HIF-1α的表達濃度可平均上升30%以上,特別是在短期內腫瘤病灶組織擴散較為顯著的患者中，HIF-1α的表達上升更為顯著。但本文并未發(fā)現(xiàn)S100A11、HIF-1α的表達具有相關關系,推測二者在影響到胰腺癌的發(fā)生過程中，并無顯著的協(xié)同作用效果。在臨床分期較晚的胰腺癌患者中，S100A11蛋白的表達陽性率顯著上升,提示了S100A11與胰腺癌患者的臨床病理特征密切相關,這主要由于S100A11的表達上升，能夠促進胰腺導管上皮細胞浸潤能力的提升,導致癌細胞對于腹腔內其他臟器組織的累及風險的上升，增加了臨床分期水平。但部分研究者認為，在胰腺癌患者中，S100A11的表達還與淋巴結轉移有關[3]，本文并未得出相關結論，存在不同結論,考慮可能與S100A11蛋白的檢測靈敏程度的差別有關。同樣，在臨床分期較晚、發(fā)生了淋巴結轉移或者腫瘤病灶組織大于3cm的患者中，HIF-1α的表達濃度同樣明顯的上升,提示HIF-1α與胰腺癌的發(fā)生同樣具有密切的關系,這主要由于HIF-1α的上升，能夠導致癌細胞粘附淋巴結組織能力的增強，提高了癌細胞的擴散和浸潤過程，進而增加了腫瘤病灶組織大小[15]。

綜上所述，在胰腺癌患者中，S100A11、HIF-1α的表達均明顯上升,同時S100A 11、HIF-1α的表達與胰腺癌患者的臨床病理特征密切相關。