乳腺癌患者TGF-β、SMAD3、SOX2表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義

王鵬 ，陳曉 ，任浩

（1.南陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校第一附屬醫(yī)院普外科，河南 南陽 473058；2.南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，河南 南陽 473058；3.南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院眼科，河南 南陽 473058）

乳腺癌是乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤,多發(fā)于女性，極少見于男性[1]。乳腺癌的臨床表現(xiàn)主要包括乳房腫塊、非妊娠期乳頭溢液、乳腺和周圍皮膚狀態(tài)改變及乳頭、乳暈異常等[2]。根據(jù)患者腫瘤分期和身體狀況，醫(yī)生選擇采取手術(shù)、放療、化療、內(nèi)分泌治療、生物靶向治療及中醫(yī)藥輔助治療中的一類或聯(lián)合使用[3]。近年許多研究表明SOX2與腫瘤的發(fā)生以及腫瘤干細(xì)胞的調(diào)控關(guān)系密切，轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）在腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中起到重要作用，SMAD3則與TGF-β共同激活或抑制相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄從而影響腫瘤細(xì)胞的增殖和分化過程[4]。為觀察乳腺癌患者的 TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白表達(dá)水平及其與腫瘤標(biāo)志物水平的相關(guān)性，研究選取在我院接受治療的乳腺癌患者(觀察組)及我院接受手術(shù)治療的乳腺良性腫瘤患者（對照組）,對比分析兩組患者 TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白水平的差異，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 患者一般資料 選取2017年2月-2018年2月在我院接受治療的乳腺癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴年齡≥18周歲；⑵經(jīng)手術(shù)病理檢查確診為乳腺癌者；⑶無其他部位原發(fā)腫瘤者。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者；⑵合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入研究對象100例，年齡28~62歲，平均46.08±5.47歲；乳腺良性腫瘤組納入排除標(biāo)準(zhǔn)：成年女性，經(jīng)病理檢查確診為乳腺良性腫瘤者，共納入100例，年齡30~64歲，平均46.11±4.89歲。兩組患者年齡等一般資料比較無差別。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審?fù)ㄟ^，且所有患者均知情同意。

1.2 方法 所有患者均將離體的新鮮組織標(biāo)本放入甲醇中固定，然后用石蠟包埋，制成切片后，切片經(jīng)烘烤后使用二甲苯及梯度乙醇進(jìn)行脫蠟水化。經(jīng)檸檬酸鹽緩沖液高壓抗原修復(fù)后,加入一抗，冰箱（4℃）中過夜，在37℃條件下復(fù)溫,加入二抗，室溫放置半小時。經(jīng)PBS沖洗三次，DAB顯色2 min后，使用蒸餾水沖洗干凈，再用蘇木精襯染，最后采用梯度乙醇及二甲苯脫水，中性樹膠封固，風(fēng)干，光鏡下觀察，評分，留圖。TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白水平根據(jù)染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行評分。對各蛋白的總體表達(dá)水平進(jìn)行半定量評估。

1.3 評價指標(biāo) 觀察兩組患者 TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白水平的差異，比較不同臨床特征乳腺癌患者 TGF-β、SMAD3、SOX2 蛋白水平的差異，分析影響乳腺癌患者TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白水平的因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)錄入后，采用SPSS11.5軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)和計(jì)量資料分別采用例和均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組患者、不同特征乳腺癌患者TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白表達(dá)情況的比較采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，采用回歸分析法分析影響乳腺癌患者TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白水平的因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者 TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白水平的比較 乳腺癌患者的SMAD3、SOX2蛋白表達(dá)水平低于乳腺良性腫瘤組，TGF-β蛋白表達(dá)水平高于乳腺良性腫瘤組，見表1。

表1 兩組患者TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白水平的比較

2.2 不同特征乳腺癌患者 TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白表達(dá)情況的比較 分化程度為中、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的乳腺癌患者的SMAD3、SOX2蛋白表達(dá)水平較低，TGF-β蛋白表達(dá)水平較高，見表2。

2.3 影響乳腺癌患者 TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白水平的因素分析 將單因素分析有意義的因素：分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期作為自變量，以乳腺癌患者 TGF-β、SMAD3、SOX2 蛋白水平作為因變量，進(jìn)行多重逐步回歸分析。結(jié)果分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)入回歸方程，見表3。

表3 影響乳腺癌患者TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白水平的因素分析

表2 不同特征乳腺癌患者TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白表達(dá)情況的比較

3 討論

乳腺癌細(xì)胞可轉(zhuǎn)移擴(kuò)散到身體各個部位,嚴(yán)重危害患者生命，是一類女性常見的惡性腫瘤[5,6]。一級親屬中有乳腺癌患者、乳腺腺體致密、月經(jīng)初潮早絕經(jīng)晚、長期使用雌激素和酗酒均為乳腺癌發(fā)生的高危因素，通過積極鍛煉、健康飲食、良好的作息習(xí)慣、積極治療乳腺疾病、高危人群中采用藥物預(yù)防、合理應(yīng)用雌激素等預(yù)防措施可有效降低乳腺癌的發(fā)生率[7]。乳腺癌患者常表現(xiàn)為乳腺腫塊、乳頭溢液、皮膚改變、乳頭和乳暈異常及腋窩淋巴結(jié)腫等癥狀[8]。自20世紀(jì)70年代末開始全球乳腺癌發(fā)病率就一直呈上升趨勢,我國乳腺癌發(fā)病情況同樣較為嚴(yán)重。近年我國乳腺癌發(fā)病率的增長速度高出高發(fā)國家1～2個百分點(diǎn),在我國乳腺癌發(fā)病率位居女性惡性腫瘤的第1位[9]。

TGF-β是屬于一組調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化的細(xì)胞因子，TGF-β表達(dá)與腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的形成有關(guān)[10]。SMAD3屬于受體調(diào)節(jié)型SMAD蛋白，SMAD3在TGF-β信號從細(xì)胞表面受體傳導(dǎo)至細(xì)胞核的過程中起到關(guān)鍵性作用,并且SMAD3與TGF-β共同激活或抑制它們調(diào)節(jié)的靶基因的轉(zhuǎn)錄[11]。其中轉(zhuǎn)錄因子SOX2是SOX基因家族的一個重要成員，SOX2促進(jìn)腫瘤細(xì)胞中VEGF、CD13的表達(dá)，其表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分級及TNM分期有關(guān)[12]。乳腺癌患者的SMAD3、SOX2蛋白表達(dá)水平低于乳腺良性腫瘤組，TGF-β蛋白表達(dá)水平高于乳腺良性腫瘤組。本結(jié)果證實(shí)了SMAD3、SOX2蛋白表達(dá)水平與腫瘤良、惡性之間的密切關(guān)聯(lián)，同時也說明了TGF-β對腫瘤生長的促進(jìn)作用。

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是腫瘤最常見的轉(zhuǎn)移方式,出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移常會導(dǎo)致腫瘤預(yù)后效果差[13]。TNM分期數(shù)越高，患者的生存期就越短，預(yù)后就越差[14,15]。分化程度為中、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的乳腺癌患者的SMAD3、SOX2蛋白表達(dá)水平較低,TGF-β蛋白表達(dá)水平較高,通過SMAD3、SOX2和TGF-β蛋白表達(dá)水平可在一定程度上判斷乳腺癌患者腫瘤惡性程度的高低。

通過單因素分析，將分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期作為自變量，以乳腺癌患者TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白水平作為因變量，進(jìn)行多重逐步回歸分析，結(jié)果分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)入回歸方程,該結(jié)果表明分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與TGF-β、SMAD3、SOX2蛋白水平之間存在密切關(guān)聯(lián)，可將二者共同結(jié)合來判斷患者所處分期，選擇最佳的治療方案。

綜述所述,乳腺癌患者的SMAD3、SOX2蛋白表達(dá)水平較低，TGF-β蛋白表達(dá)水平較高，且與分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),在臨床診斷中具有一定的應(yīng)用價值。