高效液相色譜法檢測(cè)中成藥中非法添加的布洛芬

童 楊，孫 蓓，羅欣杰，曹曉琴

（江漢大學(xué)，湖北 武漢 430056）

臨床研究對(duì)疼痛的治療機(jī)理尚不明了，亦無(wú)徹底消除的方法，不良商家在中成藥中添加化學(xué)藥物，來(lái)達(dá)到止痛的目的[1-2]。添加的化學(xué)藥物成分及劑量未遵循臨床用藥規(guī)范，必須有更專業(yè)的檢測(cè)手段及方法對(duì)其進(jìn)行監(jiān)控?，F(xiàn)有文獻(xiàn)都是應(yīng)用質(zhì)譜對(duì)該類藥物進(jìn)行檢測(cè)[3-4]，但質(zhì)譜儀器的普及率低，且操作繁瑣，成本高，并不能作為日?？焖贆z測(cè)的方法。而采用高效液相進(jìn)行鑒定分離時(shí)，采用的流動(dòng)相pH值低[5]，會(huì)給色譜柱造成損害。本文采用HPLC，對(duì)中成藥中添加的化學(xué)藥物成分布洛芬進(jìn)行檢測(cè)，方法簡(jiǎn)便快速，分離條件溫和，不損害色譜柱，可用于中成藥中添加的布洛芬的定性及定量檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

布洛芬(純度 99.7%)，3 種中成藥（網(wǎng)購(gòu)），乙醇、乙腈、乙酸銨(均為色譜純)，去離子水（自制）。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀(配紫外檢測(cè)器)，色譜數(shù)據(jù)工作站，Milli-Q 超純水系統(tǒng)，離心機(jī)，C18 色譜柱（150mm×4.6mm），紫外分光光度計(jì)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 對(duì)照品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取10mg 布洛芬對(duì)照品，乙醇溶解，10mL容量瓶定容，即得含布洛芬 1mg·mL-1的對(duì)照品貯備液（母液）10mL。再取1mg·mL-1的對(duì)照品貯備液（母液）1mL 于 10mL 容量瓶中，用乙醇定容，即得含布洛芬100μg·mL-1的對(duì)照品貯備液（中間液）10mL，用時(shí)用乙醇稀釋。分別配制不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣前用濾膜過(guò)濾。

2.2 供試品溶液的制備

元胡止痛片、風(fēng)濕骨痛寧膠囊、復(fù)方關(guān)節(jié)炎膠囊，隨機(jī)取同一批號(hào)的供試品4 片，研細(xì)作為試樣。稱取處理好的試樣約1.0g，置于5mL 離心管中，加入2mL 的乙醇水溶液（90∶10），功率143W、頻率40kHz 下超聲提取20min 后，4000r·min-1離心5min。取上清液過(guò)濾，再取1mL 的溶液于250mL 容量瓶中，用乙醇定容，濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。

所有采集的樣品均采用本檢測(cè)方法進(jìn)行空白基質(zhì)的篩選，測(cè)定結(jié)果以無(wú)干擾峰的基質(zhì)作為空白基質(zhì)，用于樣品添加實(shí)驗(yàn)。色譜條件：檢測(cè)波長(zhǎng) 263nm，流動(dòng)相：乙腈-0.02mol·L-1乙酸銨溶液（0.1%乙酸，60/40），柱溫30℃，進(jìn)樣量10 μL，流速1mL·min-1。

3 結(jié)果與討論

3.1 前處理方法的選擇

中成藥中含有許多雜質(zhì)，而布洛芬易溶于乙醇，故采用乙醇提取法[6-7]。實(shí)驗(yàn)前，分別用不同比例的乙醇水溶液溶解相同質(zhì)量的布洛芬，根據(jù)文獻(xiàn)[8-9]，263nm 紫外光照下，布洛芬有最大吸收。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，在乙醇-水（90/10）提取條件下的紫外吸收最大，即可確定在此條件下布洛芬的溶解度最佳，可作為供試品提取的最佳溶劑。

3.2 色譜條件的選擇

參考相關(guān)文獻(xiàn)[10]的研究結(jié)果，本文選用RP-18柱，以乙腈、乙酸銨混合溶液為流動(dòng)相[11-13]。實(shí)驗(yàn)前，分別采用乙腈-0.02mol·L-1乙酸銨溶液(0.1%乙酸，60/40)、乙腈-0.02mol·L-1乙酸銨溶液(0.1%乙酸，50/50)、乙腈-0.02mol·L-1乙酸銨溶液(0.1%乙酸，40/60)為流動(dòng)相，各流動(dòng)相的出峰時(shí)間分別為7.5min、17min、28min。由此可知，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH=6，乙腈-0.02mol·L-1乙酸銨溶液(0.1%乙酸，60/40)可在10min 內(nèi)出現(xiàn)布洛芬的色譜峰，且樣品有良好的分離(圖 1)。同時(shí)考察了流動(dòng)相中，甲醇和水的比例與出峰時(shí)間及峰形的關(guān)系，結(jié)果表明，出峰時(shí)間較快，峰型對(duì)稱尖銳，無(wú)拖尾現(xiàn)象。

圖1 空白樣品中添加50μg·L-1 布洛芬的色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms obtained of 50μg·L-1 Ibuprofen

3.3 檢出限、定量限及線性范圍

在 配 制 的 空 白 樣 品 中 按1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0μg·L-1的 水 平 加 入混 合 標(biāo)準(zhǔn) 溶 液，進(jìn)樣檢測(cè)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。以峰面積Y對(duì)進(jìn)樣質(zhì)量濃度X進(jìn)行線性回歸，以RSN=3 計(jì)算檢出限，以RSN=10 計(jì)算定量限。布洛芬的濃度在1～200μg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：A=28963.45086C+16289.83687，相 關(guān) 系 數(shù)R2為0.9988，組分的檢出限為2.9μg·L-1，定量限為 4.1μg·L-1。

3.4 樣品測(cè)定

取3 種網(wǎng)購(gòu)藥品，按優(yōu)化的操作條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣 20μL，平行測(cè)定3 次，用標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算布洛芬含量，結(jié)果見(jiàn)表 1。由表1 可知，元胡止痛片中不含布洛芬，風(fēng)濕骨痛寧膠囊與復(fù)方關(guān)節(jié)炎膠囊中均檢出西藥成分布洛芬。

表1 3 種樣品中布洛芬含量檢測(cè)結(jié)果Table 2 Detection results of Ibuprofen in 3 samples

4 結(jié)論

本研究建立了 HPLC 法檢測(cè)中成藥中非法添加布洛芬的方法。通過(guò)對(duì)前處理樣品方法和色譜條件的優(yōu)化，無(wú)需將流動(dòng)相調(diào)節(jié)至過(guò)酸狀態(tài)，即可實(shí)現(xiàn)10min 內(nèi)快速出峰，且峰形對(duì)稱，無(wú)拖尾現(xiàn)象。根據(jù)方法學(xué)的考察結(jié)果，本方法的專屬性強(qiáng)，靈敏度高，可作為非法摻入化學(xué)成分的有效檢測(cè)方法。