高致病性H5N1禽流感病毒研究進(jìn)展

黃薈穎 趙振偉 王然 肖勁男

[摘 要] H5N1禽流感病毒是一種高致病性病毒，是禽流感病毒的一種亞型。自1997年以來，該病毒每年都給大型家禽養(yǎng)殖者造成了重大經(jīng)濟(jì)損失，近幾年在中國(guó)和越南還出現(xiàn)了變種病毒。本文對(duì)高致病性H5N1禽流感病毒的基本特征、致病力、檢測(cè)及疫苗等方面的研究情況進(jìn)行總結(jié)，為高致病性H5N1禽流感的有效防控提供科學(xué)依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] H5N1禽流感病毒;致病力;檢測(cè);疫苗

[中圖分類號(hào)] S855.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-7909（2020）01-111-2

1 高致病性H5N1禽流感病毒概述

1.1 H5N1禽流感簡(jiǎn)介

高致病性禽流感是21世紀(jì)最令人關(guān)注的人畜共患傳染病之一，在家禽之間呈流行性傳播，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。1997年，從我國(guó)香港農(nóng)場(chǎng)和家禽市場(chǎng)的雞、鴨和鵝中分離出H5N1流感病毒。經(jīng)測(cè)試，來自我國(guó)香港家禽市場(chǎng)的每種H5N1病毒對(duì)雞均具有致死性，在HA1的羧基末端具有多價(jià)氨基酸，根據(jù)定義，其對(duì)禽類具有高致病性。

1.2 H5N1禽流感病毒的進(jìn)化

H5N1 HPAIV被H5 HA命名法分類為10個(gè)進(jìn)化枝（0～9）和幾個(gè)第二進(jìn)化枝，H5N1病毒已于2005—2006年在中國(guó)共同傳播，而2007—2009年中國(guó)家禽和水禽中的已傳播病毒屬于進(jìn)化枝2.3.2、2.3.4和7[1]。自2005年以來，在中國(guó)北方的雞只中出現(xiàn)了進(jìn)化枝7的H5N1 HPAIV。7.2型進(jìn)化枝病毒于2008年在中國(guó)出現(xiàn)。1996年第一次在中國(guó)廣東的鵝中分離出H5N1病毒[2，3]，在此之后病毒繼續(xù)在中國(guó)進(jìn)行傳播。1997年，在我國(guó)香港新界農(nóng)場(chǎng)的雞中發(fā)生該流感[4]，其基因型與之前的相似。2003年人類H5N1發(fā)生表明，鵝/廣東樣病毒已分化為8種基因型。2005年在中國(guó)的青海湖野禽中發(fā)生了禽流感，經(jīng)研究該種病毒后被定義為2.2枝[5]，同年2.2.1進(jìn)化枝進(jìn)入埃及。青海湖發(fā)生后，H5N1病毒繼續(xù)在亞洲、歐洲和非洲發(fā)生。2009年中期，一組2.3.2種病毒（2.3.2.1a）向西移動(dòng)，在俄羅斯和歐洲也發(fā)現(xiàn)了類似的情況。2015年，在俄羅斯發(fā)現(xiàn)了2.3.2.1c病毒。近年來，2.3.4.4支病毒傳播廣泛，這些病毒還于2014年年底進(jìn)入美國(guó)和加拿大。

1.3 H5N1禽流感病毒對(duì)動(dòng)物的致病力

根據(jù)禽流感病毒對(duì)家禽的致病力強(qiáng)弱，一般被分為低致病性或高致病性，H5N1禽流感病毒則屬于后者，這是由于HA切割位點(diǎn)中多個(gè)堿性氨基酸積累的結(jié)果。與低致病性禽流感不同的是，高致病性禽流感發(fā)病迅速且死亡率高。

1996年發(fā)生H5N1禽流感后，世界各國(guó)都發(fā)生了不同程度的H5N1禽流感，其特征均為家禽、水禽及野禽大面積突然死亡，這些都證實(shí)了H5N1對(duì)禽類的高致病性。

H5N1禽流感病毒也可以感染哺乳動(dòng)物，但是由很多因素決定。PA-X是一種甲型流感病毒（IAV）的融合蛋白。已有研究表明，缺失PA-X蛋白后會(huì)增強(qiáng)高致病性H5N1禽流感病毒對(duì)小鼠的致病性和復(fù)制力[6]。同時(shí)，對(duì)2012、2013年從越南分離出的病毒進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，其聚合復(fù)合體中PA蛋白中的2個(gè)氨基酸變化影響了小鼠中病毒聚合酶復(fù)合物的活性和毒力。2009年，H5N1和H1N1pdm09的共同流通引起了人們的擔(dān)憂，即重組事件可能導(dǎo)致高致病性流感病大發(fā)生。已有研究表明，從H1N1pdm09獲得NS片段會(huì)增強(qiáng)小鼠中H5N1的毒力[7]。

2 高致病性H5N1禽流感病毒檢測(cè)

根據(jù)世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）的規(guī)定，雞胚病毒分離培養(yǎng)常用于禽流感的檢測(cè)。我國(guó)發(fā)布的針對(duì)H5N1亞型的國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)有《H5亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測(cè)方法》《H5亞型禽流感病毒NASBA檢測(cè)方法》。近年來，許多研究利用生物傳感器來檢測(cè)病毒，如基于DNA模板的銀納米簇?zé)晒夥肿有艠?biāo)，只要嵌入相應(yīng)的識(shí)別序列，即可將設(shè)計(jì)精巧的分子信標(biāo)方便地用于檢測(cè)多種毒力基因，包括H5N1病毒的基因[8]。適體傳感器也可以用于檢測(cè)，在診斷和檢測(cè)分析中適體代表了抗體作為識(shí)別劑的替代品，并具有優(yōu)勢(shì)。2016年有學(xué)者提出了一個(gè)結(jié)合近紅外光與2個(gè)光子激發(fā)的H5N1病毒基因序列熒光檢測(cè)的分析平臺(tái)[9]。同時(shí)，已有研究提出了一種基于表面增強(qiáng)拉曼散射的數(shù)字微流體技術(shù)免疫測(cè)定方法，設(shè)計(jì)了一種夾心免疫測(cè)定法，可以靈敏地檢測(cè)出H5N1病毒[10]。

3 高致病性H5N1禽流感病毒的疫苗

3.1 滅活疫苗

利用反向遺傳技術(shù)，通過人工制造致病力極弱、很好地適應(yīng)了在雞胚胎中生長(zhǎng)的H5NI滅活疫苗種毒株，利用該毒株制成禽流感滅活疫苗[11]。

3.2 重組病毒載體疫苗

與滅活疫苗相比，重組的病毒載體疫苗能引發(fā)更多的輔助性T細(xì)胞產(chǎn)生免疫反應(yīng)。給病毒基因注射一種保護(hù)性外來抗原來獲得重組病毒，免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)的目標(biāo)蛋白，從而誘導(dǎo)免疫反應(yīng)[12]。目前研制出的針對(duì)H5N1禽流感的重組病毒載體疫苗主要有禽痘病毒載體疫苗、新城疫病毒載體疫苗、火雞皰疹病毒載體疫苗、鴨腸炎病毒載體疫苗以及傳染性喉氣管炎病毒載體疫苗。

3.3 DNA疫苗

與其他疫苗相比，DNA疫苗具有更多的優(yōu)勢(shì)。有研究報(bào)道在pCAGGS載體中插入optiHA從而構(gòu)建出一種DNA疫苗，當(dāng)肌肉注射給雞后會(huì)引起強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)[13]。為了提高針對(duì)H5N1流感病毒的DNA疫苗的功效，有研究在巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子的上游和SV40晚期聚腺苷酸信號(hào)的下游插入3個(gè)重復(fù)的Kappa B（κB）基序，這些基序由5 bp核苷酸間隔區(qū)隔開，雞只中具有κB位點(diǎn)的變體刺激了針對(duì)目標(biāo)抗原的更強(qiáng)的體液反應(yīng)[14]。

4 結(jié)語

H5N1禽流感是一種嚴(yán)重傳染病，雖然近年來我國(guó)未發(fā)生過嚴(yán)重的H5N1禽流感，但是我們不能掉以輕心，病毒在不斷進(jìn)化，所以繼續(xù)研發(fā)疫苗依然是重中之重，以保證養(yǎng)殖業(yè)穩(wěn)定發(fā)展以及人類生命健康。

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