裂隙淋巴細(xì)胞對(duì)百日咳的診斷價(jià)值

陳奕穎,林宏昌

廣東省揭陽市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東揭陽 522000

百日咳是一種具有高度傳染性的急性呼吸道疾病，人群普遍易感，以嬰幼兒多見，可引起長(zhǎng)達(dá)數(shù)月的咳嗽。百日咳疫苗的廣泛應(yīng)用明顯降低了百日咳的發(fā)病率和病死率。近年來，兒童百日咳發(fā)病率逐年升高，嚴(yán)重威脅兒童生命健康[1-2]。由于本院尚未開展百日咳鮑特菌培養(yǎng)、百日咳聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)及血清學(xué)檢測(cè)，百日咳的確診需要其他檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的協(xié)助才能完成，這不僅延長(zhǎng)了治療周期，也使得本院百日咳發(fā)病率被嚴(yán)重低估，因此，尋求簡(jiǎn)便而有效的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法尤為重要。本文通過對(duì)80例疑似百日咳患兒的白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞百分比(LYMPH%)、裂隙淋巴細(xì)胞的陽性率進(jìn)行分析，探討外周血涂片中裂隙淋巴細(xì)胞對(duì)百日咳的診斷價(jià)值，為基層醫(yī)院快速診治百日咳提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院80例疑似百日咳患兒為研究對(duì)象，其中男39例，女41例；年齡0～2歲，中位年齡3個(gè)月。按照百日咳桿菌核酸檢測(cè)結(jié)果將其分為百日咳陽性組和百日咳陰性組，每組各40例。百日咳陽性組男20例，女20例；中位年齡4個(gè)月。百日咳陰性組男19例，女21例；中位年齡2個(gè)月。所有患兒均以咳嗽為主要癥狀入院，百日咳陽性組的患兒均符合百日咳臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。所有入選患兒均排除自身免疫功能缺陷或伴有其他系統(tǒng)的嚴(yán)重疾病。

1.2儀器與試劑 XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及原裝進(jìn)口試劑(日本希森美康公司)；光學(xué)顯微鏡(日本奧林巴斯公司)；EDTA-K2抗凝管(上海澳翔醫(yī)療科技有限公司)；瑞氏染液(珠海貝索生物技術(shù)有限公司)；百日咳桿菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)由湖南圣湘生物科技有限公司提供。

1.3方法 所有患兒的血常規(guī)采用XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢測(cè)；由血液組專家進(jìn)行外周血WBC形態(tài)學(xué)檢查，所有血涂片經(jīng)瑞氏染色后，在光學(xué)顯微鏡下觀察WBC形態(tài)，并計(jì)算出裂隙淋巴細(xì)胞所占的比例；同時(shí)采集患兒的鼻咽拭子置于含采樣液的無菌管中，于4 ℃保存即日送檢。血常規(guī)檢測(cè)和外周血WBC形態(tài)學(xué)檢查均在本院完成，百日咳桿菌核酸檢測(cè)由廣州市金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心完成。所有操作均嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行。

1.4觀察指標(biāo) 分析兩組患兒WBC計(jì)數(shù)、LYMPH%、裂隙淋巴細(xì)胞陽性率的差異，同時(shí)比較各指標(biāo)對(duì)百日咳診斷的特異度和靈敏度。陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：WBC計(jì)數(shù)≥12×109/L， LYMPH%≥50%；外周血涂片中出現(xiàn)裂隙淋巴細(xì)胞則判定為陽性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組患兒WBC計(jì)數(shù)、LYMPH%、裂隙淋巴細(xì)胞陽性率的比較 百日咳陽性組WBC計(jì)數(shù)、LYMPH%、裂隙淋巴細(xì)胞陽性率明顯高于百日咳陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患兒WBC計(jì)數(shù)、LYMPH%、裂隙淋巴細(xì)胞陽性率的比較[n(%)]

2.2血涂片 所有研究對(duì)象中有22例患兒的血涂片中見到數(shù)量不等(3%～20%)的裂隙淋巴細(xì)胞。細(xì)胞體積較小，細(xì)胞質(zhì)較少，呈藍(lán)色或淺藍(lán)色透亮狀，細(xì)胞核染色質(zhì)聚集呈深紫色，核上有明顯的裂隙，裂隙貫穿整個(gè)細(xì)胞，呈現(xiàn)雙核樣或不對(duì)稱的雙核樣。見圖1。

圖1 光學(xué)顯微鏡下的裂隙淋巴細(xì)胞

2.3不同指標(biāo)對(duì)百日咳診斷的特異度和靈敏度比較 WBC計(jì)數(shù)、LYMPH%、裂隙淋巴細(xì)胞診斷百日咳的特異度分別為72.5%、32.5%、97.5%，裂隙淋巴細(xì)胞的特異度最高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；裂隙淋巴細(xì)胞診斷百日咳的靈敏度為52.5%，與WBC計(jì)數(shù)(87.5%)、LYMPH%的靈敏度(87.5%)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；WBC計(jì)數(shù)和LYMPH%診斷百日咳的靈敏度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討 論

百日咳是一種由百日咳桿菌感染引起的呼吸道傳染性疾病。近年來，百日咳發(fā)病率有升高趨勢(shì)，引起了醫(yī)學(xué)界的關(guān)注[4-5]。隨著百日咳疫苗的應(yīng)用，百日咳患兒的臨床表現(xiàn)并不典型[6-7]，基層醫(yī)院病原學(xué)檢測(cè)方法尚不完善，給百日咳的早期診斷和治療帶來困難，延誤治療會(huì)造成部分患兒出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，給患兒家庭、經(jīng)濟(jì)及生活帶來較大影響。

細(xì)菌培養(yǎng)是確診百日咳的“金標(biāo)準(zhǔn)”，其特異度高但靈敏度低，周期長(zhǎng)，且易受抗菌藥物、免疫接種、標(biāo)本采集時(shí)間等諸多因素的影響[8]。血清學(xué)檢查需要收集急性期和恢復(fù)期的雙份血清進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)于臨床表現(xiàn)不典型，疾病分期不明顯的患兒容易造成漏診。而PCR方法靈敏度和特異度較高[9]，但在基層醫(yī)院難以開展。因此，快捷、簡(jiǎn)便的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法是基層醫(yī)院實(shí)現(xiàn)早期診治百日咳的迫切需求。本研究結(jié)果顯示，百日咳陽性組患兒的WBC計(jì)數(shù)、LYMPH%陽性率較高，與既往研究基本一致[7-8,10]。這與百日咳桿菌產(chǎn)生的百日咳毒素(PT)相關(guān)。PT是百日咳致病的主要毒力因子，具有促進(jìn)WBC及淋巴細(xì)胞增殖的生物效應(yīng)[11]。且重癥百日咳患兒將出現(xiàn)嚴(yán)重的WBC增多癥和淋巴細(xì)胞增多，出現(xiàn)呼吸困難或呼吸衰竭[12]。目前淋巴細(xì)胞增多仍是臨床醫(yī)生診斷百日咳的重要依據(jù)，但特異度低。

近年來，有學(xué)者在百日咳患兒外周血中發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)缺乏、染色質(zhì)凝集、有裂隙的成熟小淋巴細(xì)胞——裂隙淋巴細(xì)胞。有研究報(bào)道，外周血涂片中找到裂隙淋巴細(xì)胞可能是簡(jiǎn)單、快速診斷百日咳的方法[13-14]。筆者在22例患兒的血涂片中見到數(shù)量不等(3%～20%)的特殊細(xì)胞，該種細(xì)胞體積較小，細(xì)胞質(zhì)較少，呈藍(lán)色或淺藍(lán)色透亮狀，細(xì)胞核染色質(zhì)聚集呈深紫色，核上有明顯的裂隙，裂隙貫穿整個(gè)細(xì)胞，呈現(xiàn)雙核樣或不對(duì)稱的雙核樣，這與上述研究描述的細(xì)胞形態(tài)一致，證實(shí)該細(xì)胞為裂隙淋巴細(xì)胞。北京兒科研究所的課題提示，裂隙淋巴細(xì)胞由PT誘導(dǎo)產(chǎn)生，提示裂隙細(xì)胞可能成為百日咳特異性診斷指標(biāo)，但還需進(jìn)一步研究明確[15]。本研究中，裂隙淋巴細(xì)胞陽性的22例患兒中有21例確診百日咳感染，特異度為97.5%， 這再次證明裂隙淋巴細(xì)胞的出現(xiàn)與百日咳感染有關(guān)，說明外周血涂片中出現(xiàn)裂隙淋巴細(xì)胞提示百日咳感染的可能，裂隙淋巴細(xì)胞可作為診斷百日咳的特異性指標(biāo)。百日咳感染和裂隙淋巴細(xì)胞的數(shù)量是否存在相關(guān)性也需進(jìn)一步擴(kuò)大研究。

臨床上疑似百日咳患兒，可建議進(jìn)行WBC形態(tài)學(xué)檢查。血涂片中出現(xiàn)裂隙淋巴細(xì)胞提示百日咳感染，臨床醫(yī)生可通過完善百日咳的相關(guān)檢查以明確診斷，有助于縮短診療周期，節(jié)約醫(yī)療成本，為基層醫(yī)院百日咳的早期診治提供依據(jù)。