腫瘤組織LVD 和D2-40 與早期結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究

張偉林

（桂林市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，廣西 桂林）

0 引言

結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展不僅意味著腫瘤增生增大，累及周圍組織和器官，而且伴隨腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[1]。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌常見的轉(zhuǎn)移途徑[2]。研究結(jié)直腸癌周圍淋巴管分布的密度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，可為術(shù)中淋巴結(jié)清掃和根治性手術(shù)范圍的確定提供重要的依據(jù)[3]。本研究旨在探討腫瘤組織LVD 和D2-40 與早期結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 基本資料

收集我院2014 年1 月至2019 年12 月存檔組織石蠟標(biāo)本，其中直腸癌標(biāo)本60 例，男患者35 例，女患者25 例，年齡范圍為29-82 歲，平均年齡為（53.55±10.53）歲，腫瘤直徑≤=4.5cm 32例，＞4.5cm 28 例；腫瘤位置在高位者11 例，中位者26 例，低位者23 例；高分化腺癌12 例，中分化腺癌28 例，低分化腺癌20 例；累及黏膜、黏膜下層、肌層者15 例，累及漿膜及漿膜外45 例；淋巴轉(zhuǎn)移者18 例，無轉(zhuǎn)移42 例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者6 例，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者54 例。另外收集60 例距離腫瘤10cm 的組織，以此作為健康對照組。

1.2 方法

均切片3um，通過免疫組化SP 法檢測D2-40 單克隆抗體表達(dá)，標(biāo)記微淋巴管密度。具體步驟如下：切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，過氧化氫抑制內(nèi)源性過氧化物酶10 分鐘，PBS 浸洗3 次，每次3 分鐘，滴加D2-40 單克隆抗體，37℃孵育30 分鐘至1 個(gè)小時(shí)，PBS 浸洗3 次，每次3 分鐘；滴加多聚物酶標(biāo)記的二抗，37℃孵育30 分鐘至1 個(gè)小時(shí)，PBS 浸洗3 次，每次3 分鐘；0.05%DBA＋0.03%過氧化氫顯色8-15 分鐘，流水沖洗，蘇木素復(fù)染，微波藍(lán)染；梯度乙醇脫水，二甲苯浸洗固定，樹脂封片，光學(xué)顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組標(biāo)本組織的D2-40 標(biāo)記LMVD，分析結(jié)直腸癌邊緣區(qū)和病理特征的關(guān)系。D2-40 陽性染色的位置在淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞胞膜、細(xì)胞質(zhì)，顯色棕黃色，呈顆粒狀。根據(jù)Weidner 方法對LMVD 進(jìn)行計(jì)數(shù)。采用200*（0.74mm2）的顯微鏡計(jì)數(shù)LMVD，每個(gè)患者計(jì)數(shù)3 個(gè)區(qū)域，取其平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對正態(tài)分布的數(shù)據(jù)進(jìn)行t 檢驗(yàn)，對非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示數(shù)據(jù)的分布趨勢，P＜0.05 表示數(shù)據(jù)的比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較兩組標(biāo)本組織的D2-40 標(biāo)記LMVD

根據(jù)表1 分析，在腫瘤組織中，微淋巴管分布在腫瘤邊緣和腫瘤中心，分布的位置和形態(tài)差異明顯。與對照組對比，結(jié)直腸癌組分布的微淋巴管數(shù)目LMVD 明顯更多，P＜0.05；與腫瘤的中心對比，腫瘤邊緣的微淋巴管數(shù)目明顯更多，P＜0.05，如表1。

表1 比較兩組標(biāo)本組織的D2-40 標(biāo)記LMVD

2.2 分析結(jié)直腸癌邊緣區(qū)和病理特征的關(guān)系

根據(jù)表2 分析，結(jié)直腸癌邊緣區(qū)高LMVD 和腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、Dukes 分期密切相關(guān)。與性別、年齡、腫瘤直徑、分布位置、分化程度無明顯關(guān)系，見表2。

表2 分析結(jié)直腸癌邊緣區(qū)和病理特征的關(guān)系

3 討論與結(jié)論

腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的重要因素，小于4cm的腫瘤對生存率無明顯影響，但淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移比腫瘤大小更為重要[4]。結(jié)直腸癌淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移直接影響了外科手術(shù)治療效果、患者的預(yù)后和生存率[5]。據(jù)研究[6]，在常規(guī)病理檢查無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的II 期患者中，20%死于復(fù)發(fā)，如果有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，復(fù)發(fā)比例將會更高。本研究顯示，在腫瘤組織中，微淋巴管分布在腫瘤邊緣和腫瘤中心，分布的位置和形態(tài)差異明顯。與對照組對比，結(jié)直腸癌組分布的微淋巴管數(shù)目LMVD 明顯更多，P＜0.05；與腫瘤的中心對比，腫瘤邊緣的微淋巴管數(shù)目明顯更多，P＜0.05。結(jié)直腸癌邊緣區(qū)高LMVD 和腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、Dukes 分期密切相關(guān)。與性別、年齡、腫瘤直徑、分布位置、分化程度無明顯關(guān)系。隨著病變的發(fā)展，腫瘤增大，浸潤加深，結(jié)直腸癌從B 期到C 期或從C 期轉(zhuǎn)到D 期，淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移率也隨之增高[7]。腫瘤組織一旦侵及漿膜層，大大增加淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生的可能性。本研究表明，腫瘤的分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。據(jù)研究[8]，侵及漿膜層的結(jié)直腸癌，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為38%，如加上淋巴管受侵發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為66%。

綜上所述，結(jié)直腸癌邊緣區(qū)高LMVD 和腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在密切的關(guān)系，在結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的過程中，淋巴管生成起到重要的推動作用。