淋巴結(jié)結(jié)核患兒分枝桿菌檢測(cè)結(jié)果研究

何 社 軍

(靈寶市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科 靈寶 472500)

淋巴結(jié)結(jié)核主要由結(jié)核分支桿菌感染引發(fā)所致，是臨床高發(fā)肺外結(jié)核病類型之一，多發(fā)于20～40歲青壯年群體及≤12歲的兒童群體，嚴(yán)重威脅患者身心健康[1]。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和發(fā)展，利用光學(xué)顯微鏡鑒別結(jié)核分支桿菌成為了行之有效的方法，但臨床確診仍需要結(jié)合生化試驗(yàn)及病菌培養(yǎng)結(jié)果。為了有效檢出分枝桿菌，提高淋巴結(jié)結(jié)核患兒分支桿菌檢測(cè)陽(yáng)性率，本研究以我院確診的157例淋巴結(jié)結(jié)核患兒為研究對(duì)象，就羅氏培養(yǎng)法和涂片鏡檢法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了如下探討，以供參考。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本材料

選取2015年9月～2018年9月醫(yī)院兒科確診的的157例淋巴結(jié)結(jié)核患兒，采用細(xì)針穿刺法吸取活檢組織樣本，樣本選取量0.6～4.0ml。

1.2 儀器材料

上海普赫光電科技有限公司提供的Olympus光學(xué)顯微鏡； 青島海博生物公司提供的萋-尼氏抗酸染液和硝基苯甲酸生長(zhǎng)試驗(yàn)(PNB法)鑒定培養(yǎng)基；濟(jì)南賽爾生物科技有限公司提供的中性羅氏培養(yǎng)基。

1.3 方法

按照1∶1的濃度，用2%NaOH-N-乙酰半胖氨酸消化處理采集樣本，終濃度1%，渦旋震蕩30s，消化20min，添加pH6.8的無(wú)菌磷酸鹽緩沖液直至50ml，離心15min，3000r/min，取沉淀物添加pH6.8無(wú)菌磷酸鹽緩沖液1ml混合均勻，待接種、涂片。(1)涂片鏡檢法：混勻處理后的樣本，用滴管戲曲0.1ml涂于載玻片正面右側(cè)約2/3處，自然干燥?；鹧婀潭ê蟛捎每顾崛旧R檢，抗酸桿菌呈紅色，背景呈藍(lán)色。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)如下：抗酸桿菌陰性(-)：0條/300個(gè)視野；具體抗酸桿菌數(shù)目：抗酸桿菌(4+)：每個(gè)視野≥10條；抗酸桿菌(3+)：每個(gè)視野1～9條；抗酸桿菌(2+)：每10個(gè)視野1～9條；抗酸桿菌(1+)：每100個(gè)視野3～9條；每300個(gè)視野1～8條[2]。(2)涂片鏡檢法：取處理后的樣本100μl，分別接種至兩個(gè)中性羅氏培養(yǎng)基上，室溫(37℃)下平臥培養(yǎng)基斜面，24h后調(diào)整為直立放置，接種第3d、第7d分別觀察1次，之后每周觀察1次，記錄培養(yǎng)基斜面菌落生長(zhǎng)情況。滿8周后報(bào)告陰性者。(3)根據(jù)《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)教程》采用PNB法鑒定分支桿菌菌型[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS23.0處理數(shù)據(jù)，以χ2檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料[n(%)]，P<0.05時(shí)，表明有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 羅氏培養(yǎng)和涂片鏡檢結(jié)果分析

羅氏培養(yǎng)結(jié)果提示，157例患兒陽(yáng)性48例(30.57%)，陰性109例(69.43%)，其中陽(yáng)性分級(jí)情況如下：4+占比6.25%(3/48)，3+占比8.33%(4/48)，2+占比4.17%(2/48)，1+占比25.00%(12/48)，3～20個(gè)占比33.33%(16/48)，1～2個(gè)占比22.92%(11/48)。涂片鏡檢結(jié)果提示，陽(yáng)性100例(63.69%)，陰性57例(36.31%)，其中陽(yáng)性分級(jí)情況如下：4+占比7.00%(7/100)，3+占比9.00%(9/100)，2+占比14.00%(14/100)，1+占比30.00%(30/100)，3～8個(gè)占比25.00(25/100)，1～2個(gè)占比15.00%(15/100)。

2.2 兩種方法檢查結(jié)果的一致性分析

涂片分級(jí)和羅氏培養(yǎng)的檢查結(jié)果一致性分析，見(jiàn)表1。

2.3 兩種培養(yǎng)方法結(jié)果一致性分布

由上述分析結(jié)果可知，羅氏培養(yǎng)診斷陽(yáng)性者48例中包含真陽(yáng)41例，109例陰性者包括真陰50例；涂片鏡檢診斷陽(yáng)性者100例中包含真陽(yáng)41例，109例陰性者中包括真陰50例。據(jù)此可知，涂片鏡檢和羅氏培養(yǎng)診斷均為陽(yáng)性者41例，均為陰性者50例，兩種方法結(jié)合可明確診斷者比例為57.96%(91/157)。

2.4 兩種方法檢驗(yàn)結(jié)果的陽(yáng)性率對(duì)比

根據(jù)上述研究結(jié)果可知，涂片鏡檢的陽(yáng)性率為63.69%(100/157)，羅氏培養(yǎng)的陽(yáng)性率為30.57%(48/157)，兩種方法檢驗(yàn)結(jié)果的陽(yáng)性率對(duì)比，χ2=35.559，P=0.000。

2.5 菌種檢驗(yàn)結(jié)果分析

根據(jù)PNB法檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)48株病菌分離株中包括結(jié)核桿菌復(fù)合群47株，占比97.92%(47/48)；非結(jié)核分枝桿菌1株，占比2.08%(1/48)。

3 討論

結(jié)合本文實(shí)踐結(jié)果可知，PNB法鑒定的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群為47株，在全部分離株中占比達(dá)到了97.92%，提示淋巴結(jié)結(jié)核患兒多為結(jié)核分支桿菌復(fù)合群感染病例。本文研究中中發(fā)現(xiàn)，為了提高離心沉淀后涂片鏡檢陽(yáng)性率，應(yīng)注意下述要點(diǎn)：(1)提高樣本采集數(shù)目，預(yù)先確認(rèn)檢查項(xiàng)目，結(jié)合檢查項(xiàng)目科學(xué)分配標(biāo)本；(2)先使用低倍鏡確認(rèn)片狀有效成分，再調(diào)換成油鏡詳細(xì)鏡檢；(3)嚴(yán)格控制離心力，這是因?yàn)殡x心過(guò)小沉淀物容易懸浮，導(dǎo)致濃縮集菌流失；(4)調(diào)低染色時(shí)的沖洗水流量，避免標(biāo)本從玻片上脫落[4]。

表1 兩種方法檢查結(jié)果的一致性分析[n(%)]

涂片分級(jí)羅氏培養(yǎng)4+3+2+1+3～20個(gè)1～2個(gè)陰性合計(jì)4+311000273+110311292+0114305141+00054219303～8個(gè)00014218251～2個(gè)0000111315陰性0010335057合計(jì)342121611109157

有學(xué)者對(duì)269例淋巴結(jié)結(jié)核患兒研究后發(fā)現(xiàn)，細(xì)針穿刺取活檢組織，經(jīng)消化處理、離心沉淀等操作濃縮集菌，能夠有效提高涂片鏡檢的分支桿菌陽(yáng)性率，其中涂片鏡檢陽(yáng)性率顯著高于培養(yǎng)法陽(yáng)性率，而結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群是導(dǎo)致淋巴結(jié)結(jié)核患兒發(fā)生的主要致病菌[5]。與既往報(bào)道結(jié)果相吻合，本文研究發(fā)現(xiàn)涂片鏡檢的分枝桿菌檢測(cè)陽(yáng)性率遠(yuǎn)高于羅氏培養(yǎng)法，初步分析這與部分患者近期接受過(guò)廣譜抗生素治療、培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生污染等因素密切相關(guān)，因此有必要加強(qiáng)淋巴結(jié)結(jié)核患兒分枝桿菌檢測(cè)環(huán)節(jié)的質(zhì)控力度。

綜上所述，采用細(xì)針穿刺提取組織樣本、消化處理、離心沉淀等措施濃縮集菌，可有效提高涂片鏡檢檢出分支桿菌的陽(yáng)性率，有利于醫(yī)師準(zhǔn)確檢出分支桿菌，明確患兒疾病類型，對(duì)后續(xù)科學(xué)制定診療方案發(fā)揮著積極的作用，同時(shí)為了進(jìn)一步明確患兒致病菌類型，有必要鑒定培養(yǎng)陽(yáng)性菌株菌型。