基于液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜的動物源農(nóng)產(chǎn)品獸藥殘留檢測研究綜述

王卉　劉慶菊　韓平

摘要：液相色譜-高分辨質(zhì)譜（LC-HRMS）具有高分辨率、高通量、高精確度等優(yōu)勢，在動物源農(nóng)產(chǎn)品的獸藥殘留檢測研究中顯示出極大的潛力。本文綜述了2014—2018年LC-HRMS檢測動物源農(nóng)產(chǎn)品中獸藥殘留的應(yīng)用研究進展。其中，QuEChERS方法和有機溶劑提取法是常用的獸藥殘留提取方法，提取液用PSA、C18和氧化鋁等吸附劑凈化，綠色的樣品前處理方法是未來的發(fā)展趨勢;液相系統(tǒng)和色譜柱的改良，使獸藥化合物得到更好的分離，提高了質(zhì)譜檢測的靈敏度;HRMS分辨率和靈敏度的提高，增強了LC-HRMS定性定量分析動物源農(nóng)產(chǎn)品中獸藥殘留的能力;數(shù)據(jù)處理軟件的開發(fā)和應(yīng)用，提高了LC-HRMS在獸藥殘留檢測中的工作效率。盡管LC-HRMS在獸藥殘留檢測中取得了進展，但仍存在不足和發(fā)展空間。

關(guān)鍵詞：液相色譜（LC）-高分辨質(zhì)譜（HRMS）;動物源農(nóng)產(chǎn)品;獸藥殘留;樣品前處理;色譜分離;質(zhì)譜檢測;數(shù)據(jù)處理

中圖分類號： TS207.5+3

文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2020）02-0057-08

收稿日期：2018-11-08

作者簡介：王 卉（1982—），女，內(nèi)蒙古鄂倫春人，博士，助理研究員，主要從事農(nóng)產(chǎn)品安全檢測工作。E-mail：wangh@brcast.org.cn。

通信作者：韓 平，副研究員，主要從事農(nóng)產(chǎn)品安全檢測工作。E-mail：hanp@brcast.org.cn。

獸藥殘留是畜禽產(chǎn)品質(zhì)量的主要監(jiān)控指標，獸藥的不科學(xué)使用會導(dǎo)致動物體內(nèi)藥物蓄積，對人類及環(huán)境產(chǎn)生慢性、長遠和積累性的影響。獸藥經(jīng)畜禽代謝后，通常以原藥的形式進入環(huán)境中，引起土壤污染、水污染和植物蓄積，環(huán)境中的獸藥殘留再通過食物鏈進入人體，影響人體健康[1]。當人體中的獸藥殘留蓄積到一定量時，會引起人體毒性反應(yīng)，導(dǎo)致癌變、畸變、基因突變等不良后果[2]。因此，動物源農(nóng)產(chǎn)品的獸藥殘留問題已經(jīng)成為國際上公認的農(nóng)業(yè)和環(huán)境問題[3]。

液相色譜（LC）-高分辨質(zhì)譜（HRMS）檢測技術(shù)是動物源農(nóng)產(chǎn)品中獸藥殘留檢測分析的常規(guī)技術(shù)手段[4]，LC能夠分離非揮發(fā)性化合物和大部分揮發(fā)性化合物[5]，HRMS具有高精確度、高通量、全掃描等優(yōu)勢，LC與HRMS聯(lián)用可全面獲取樣品中化合物[6]的精確分子質(zhì)量和碎片離子信息，區(qū)分同分異構(gòu)體和同重化合物，鑒定未知物[7]。

在LC-HRMS檢測動物源農(nóng)產(chǎn)品中獸藥殘留的研究中，首先通過樣品前處理來提取和凈化樣品中的獸藥化合物，前處理方法的選擇直接影響檢測結(jié)果。經(jīng)前處理后的樣品，通過液相色譜進行分離，以降低基質(zhì)的復(fù)雜程度，獲得高質(zhì)量的質(zhì)譜數(shù)據(jù)[8-9]。然后再用HRMS進行檢測分析，常用HRMS有飛行時間（TOF）質(zhì)譜、四級桿飛行時間（QTOF）質(zhì)譜、軌道阱質(zhì)譜（Orbitrap）、線性離子阱-軌道阱質(zhì)譜（LTQ-Orbitrap）、四級桿-軌道阱質(zhì)譜（Q-Orbitrap）等[10-13]，隨著HRMS分辨率和靈敏度的不斷提高[14-17]和質(zhì)譜采集數(shù)據(jù)量的增大，需不斷開發(fā)和優(yōu)化相應(yīng)軟件來處理數(shù)據(jù)。

本文概述了2014—2018年LC-HRMS在動物源農(nóng)產(chǎn)品的檢測研究中，涉及樣品前處理、液相分離、質(zhì)譜檢測、數(shù)據(jù)處理等方面的研究現(xiàn)狀，并對該技術(shù)未來的發(fā)展趨勢進行展望，旨在為此類研究提供參考。

1 樣品前處理

提取和凈化是LC-HRMS檢測動物源農(nóng)產(chǎn)品中獸藥殘留的主要步驟，溶劑提取法和QuEChERS（quick，easy，cheap，effective，rugged，safe）方法是獸藥殘留常用的提取方法[18-26]。提取后得到的樣品中可能存在共提物，會增加檢測噪聲，因此須進一步凈化處理將其去除，以降低檢測的檢測限和定量限。

當采用溶劑提取法提取動物源農(nóng)產(chǎn)品中的獸藥殘留時，單一溶劑提取可能無法取得滿意效果，此時可采用多種溶劑混合提取，如Chiesa等用有機溶劑提取魚中的21種抗生素時發(fā)現(xiàn)，單獨使用濃度為70%的甲醇（含0.1%甲酸）提取，或者單獨使用乙腈（含0.1%甲酸）對樣品進行提取，均不能使所有目標化合物取得滿意的回收率，因此將試驗分為2步，首先用酸化甲醇提取，再用酸化乙腈提取，最終獲得了滿意的回收率[27]。此外，可以在提取過程中應(yīng)用其他提取方法輔助提取來降低檢測限，如2015年，Cepurnieks等用5%三氯乙酸 （TCA）溶液提取牛奶中的26種抗生素[28]，檢測濃度<100 ng/mL。2018年，Saluti等用0.25%TCA水溶液提取牛奶中14種抗生素時，引入超聲來輔助提取，使檢測限≤33 μg/kg[29]。

QuEChERS方法是一種通用的前處理方法[30]，可同時提取樣品中的多種獸藥殘留。根據(jù)化合物的不同性質(zhì)，可改變QuEChERS方法中溶劑、酸、鹽、吸附劑等的種類和用量，提高獸藥殘留提取回收率[31]，除方法的改進外，QuEChERS方法提取自動前處理平臺的應(yīng)用是此項術(shù)進步的重要表現(xiàn)，自動化處理不僅減少了試劑對環(huán)境的污染，同時減少了人為因素對試驗的影響，如Jia等應(yīng)用QuEChERS自動前處理平臺提取了鱸魚中的24種大環(huán)內(nèi)酯類藥物及其代謝產(chǎn)物[32-45]。

凈化處理是提高獸藥檢測靈敏度的重要方法。常用的吸附劑有N-丙基乙二胺（PSA）、C18、氧化鋁和硅酸鎂等。近年來，科研人員對吸附劑凈化效果的研究不斷細化，如Chen等用QuEChERS方法提取雞肉中的16種β-內(nèi)酰胺類藥物，試驗用QuEChERS凈化管（150 mg C18，300 mg PSA 和900 mg 無水硫酸鎂）凈化提取液，上機檢測的檢測限（LOD）為0.01～0.35 μg/kg，定量限（LOQ）為003～1.16 μg/kg[23]，Lopez-Garcia等也采用QuEChERS方法來提取雞肉中的獸藥殘留[22]，并評價了 PSA、硅酸鎂、C18鍵合鋯膠（Z-Sep+）、氧化鋁和C18等吸附劑的凈化效果，發(fā)現(xiàn)經(jīng)硅酸鎂和氧化鋁凈化后的檢測靈敏度最好，而其他的吸附劑對目標化合物有吸附，導(dǎo)致靈敏度低。

動物源農(nóng)產(chǎn)品中獸藥殘留提取和凈化方法的選擇，要基于樣品基質(zhì)的理化性質(zhì)和研究目的，如果前處理方式不當，可能導(dǎo)致基質(zhì)干擾嚴重，有些重要的化合物未被提取，或在提取過程中丟失，進而影響研究結(jié)果。

2 色譜分離

在LC-HRMS檢測動物源農(nóng)產(chǎn)品的獸藥殘留研究中，LC分離能夠降低樣品的復(fù)雜程度，利于質(zhì)譜對樣品進行準確全面的檢測。與HRMS串聯(lián)使用的LC，已經(jīng)從高效液相色譜（HPLC）改進為超高效液相色譜（UPLC），UPLC的分辨率、靈敏度和穩(wěn)定性都優(yōu)于HPLC。同時，色譜柱的改良也有力地推動了LC-HRMS在動物源農(nóng)產(chǎn)品獸藥殘留檢測中的應(yīng)用。

在獸藥殘留的液相色譜分析研究中，以硅膠為基質(zhì)的反相色譜柱在獸藥檢測中的應(yīng)用最為廣泛[46]。其中，反相C18色譜柱可保留非極性化合物，而苯基柱適合分析親水性化合物[47]。與反相色譜柱相比，親水相互作用色譜柱（HILIC）對極性強的獸藥化合物的保留效果更好[48-49]。而且色譜柱填料的改進使色譜柱性能更加優(yōu)異，具體表現(xiàn)在填料顆粒的體積變小，超高效液相色譜柱的填料顆粒小于2 μm，因此分離效果更好，峰寬變窄[50]，色譜的峰容量得到提高，分離效果得到改善，減少了質(zhì)譜中的離子抑制。液相色譜柱可承受的壓力增加，高達 1 500 bar[51]，對樣品的洗脫速度加快，縮短了樣品的分析時間[52]。Zhao等在應(yīng)用LC-Q-Orbitrap測定斑石鯛中的80種獸藥殘留（獸殘）的研究中，對6種反相色譜柱分離樣品的效果進行了比較，其中色譜柱直徑和填料孔徑尺寸最小的亞乙基雜化橋顆粒（BEH） C18色譜柱的分離能力、效率和靈敏度優(yōu)于其他5種色譜柱[36]。

近年來，微流液相色譜（μLC）、毛細管液相色譜（CLC）及納升液相色譜（nano LC）與HRMS的聯(lián)用提高了HRMS的檢測靈敏度[53-54]，是未來LC-HRMS檢測發(fā)展的重要方向。Alcantara-Duran等應(yīng)用nano LC-HRMS定量檢測蜂蜜、牛奶、牛肉和雞蛋等樣品中的87種獸藥，將前處理后的樣品稀釋100倍，nano LC-HRMS仍能夠檢測到溶液中的目標化合物[37]，極大地提高了檢測靈敏度。Mirabelli等用nano LC-HRMS檢測殺蟲劑的檢測限可達到10 pg/mL[55]。

3 質(zhì)譜檢測

電噴霧電離（ESI）源是液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）應(yīng)用中最常用的接口之一。ESI電離是一種軟電離方式，電離效率高。Araceli等采用ESI、大氣壓化學(xué)電離（APCI）和大氣壓光電離（APPI）3種電離方式對5種化合物的電離效果進行比較研究，結(jié)果表明，化合物經(jīng)ESI電離后，產(chǎn)生的峰面積和信噪比明顯高于APCI和APPI[56]。在LC-MS的應(yīng)用研究中，超過80%的研究選用了ESI離子源，而APCI和APPI電離方式報道較少[57]。

樣品經(jīng)離子源電離后，進入質(zhì)譜檢測。HRMS具有高分辨率，能提供高精確度的全掃描數(shù)據(jù)，有良好的定性能力[11，58-60]。特別是當檢測的同分異構(gòu)體或同重化合物的保留時間和精確質(zhì)量數(shù)相同而無法區(qū)分時，可以通過碎片離子信息的差異作進一步的區(qū)分。因此，碎片離子信息采集的是否全面，是評價高分辨質(zhì)譜性能的重要評價指標。目前，常用的HRMS數(shù)據(jù)采集模式主要分為數(shù)據(jù)依賴型采集（DDA）和數(shù)據(jù)非依賴型采集（DIA）。DDA采集時，質(zhì)譜自動從全掃描一級質(zhì)譜（FS MS）轉(zhuǎn)換成全掃描二級質(zhì)譜（FS MS/MS），后者是在前者的基礎(chǔ)上開發(fā)出來的，包括離子碎片采集（AIF）和MSE采集模式等，能夠獲得所檢測質(zhì)量范圍內(nèi)所有的母離子和碎片離子信息。此外，離子淌度技術(shù)也是HRMS分離同分異構(gòu)體和同重化合物的重要技術(shù)，該技術(shù)在電場中根據(jù)離子的大小、結(jié)構(gòu)和電荷對其進行分離[61-62]。

HRMS的分辨率隨硬件的發(fā)展不斷提高。如Qtof是四級桿與飛行時間質(zhì)譜串聯(lián)的儀器，它在實際檢測中的分辨率<30 000，主要用來做定性試驗，可提供一級和二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)作為定性判斷依據(jù)，Nacher-Mestre等用UPLC- Xevo G2 Qtof定性篩查了動物加工副產(chǎn)品中的150種獸藥，當基質(zhì)加標量為0.2 mg/kg時可檢測出75%獸藥，當基質(zhì)加標量為0.1 mg/kg 時可檢測出65%的獸藥，當加標量為0.02 mg/kg時可檢測出30%的獸藥[42]。而 LTQ-Orbitrap 的分辨率高于Qtof，分辨率設(shè)置范圍為7 500～100 000，可以提供多級質(zhì)譜數(shù)據(jù)作定性定量研究。Saito-Shida等對146種化合物進行定量測定時，比較了應(yīng)用LC-Orbitrap-MS建立的方法和應(yīng)用LC-QTOF-MS建立方法的線性、回收率、精密度和基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果表明Orbitrap-MS的選擇性和靈敏度優(yōu)于QTOF-MS[63]，而且LTQ-Orbitrap的多級質(zhì)譜（MSn）數(shù)據(jù)采集模式可以為獸藥及其代謝物的鑒定提供更豐富的碎片離子信息。比LTQ-Orbitrap性能更好的Q-Orbitrap分辨率可以達到140 000，Jia等應(yīng)用UHPLC-Q-Orbitrap對鱸魚中的24種大環(huán)內(nèi)酯類藥物及其代謝產(chǎn)物做定性定量檢測，其中確定限（CCα）為 0.12～3.61 μg/kg，檢測容量（CCβ）為0.20～6.02 μg/kg[32]，具體檢測結(jié)果見表1。

HRMS最初主要被應(yīng)用于定性篩查研究中，目前隨著HRMS硬件的不斷進步，HRMS的分辨率和靈敏度得到提高，使基質(zhì)干擾問題得以解決[5，64]，HRMS在全掃描模式下的選擇性與三重四級桿在選擇反應(yīng)監(jiān)測（selected reaction monitoring，SRM）模式下的選擇性一樣好，因此被越來越多地應(yīng)用于獸藥定量研究中。4 數(shù)據(jù)分析

在LC-HRMS檢測動物源農(nóng)產(chǎn)品獸藥殘留的研究中，根據(jù)研究目的不同，可分為靶向檢測數(shù)據(jù)處理和非靶向檢測數(shù)據(jù)處理。在靶向檢測研究中，數(shù)據(jù)處理步驟包括原始數(shù)據(jù)采集、生成參考數(shù)據(jù)庫（自建數(shù)據(jù)庫或在線數(shù)據(jù)庫）、化合物的分離鑒定、數(shù)據(jù)的標準化和量化、數(shù)據(jù)分析步驟一體化（自動處理工具）。其中，數(shù)據(jù)的采集主要采用儀器供應(yīng)商提供的軟件[39-41，44]，如Thermo Fisher Scientific公司的Xcalibur軟件、Waters公司的MassLynx軟件、AB公司的Multiquant軟件、Agilent公司的Mass Hunter等，常用的數(shù)據(jù)處理軟件見表2。數(shù)據(jù)分析所用數(shù)據(jù)庫主要有2類，一類是由科研人員自己建立的數(shù)據(jù)庫，另一類是在線數(shù)據(jù)庫，如Chemspider、Metlin、Drug Bank等。通過搜索化合物的精確質(zhì)量數(shù)，可以得到與之對應(yīng)的化合物，但是存在以下問題：數(shù)據(jù)庫中所含化合物不夠全面;對給定的精確質(zhì)量數(shù)不能提供準確的分子結(jié)構(gòu);或?qū)ν痪_質(zhì)量數(shù)給出多個化合物。因此，須根據(jù)元素組成，對化合物分子式進行推斷，并結(jié)合特征碎片離子信息鑒定化合物，最后通過檢測標準品來確證。在使用數(shù)據(jù)處理軟件時，參數(shù)設(shè)置會影響研究結(jié)果，例如，若質(zhì)量提取窗口設(shè)置范圍過寬，可能有假陽性檢出。為避免假陽性或假陰性，須要對質(zhì)量提取窗口的寬度范圍進行試驗，如Jia等試驗了質(zhì)量提取窗口設(shè)置成1～10 μg/kg時，數(shù)據(jù)處理軟件對羅非魚中獸藥及其代謝物的選擇性，發(fā)現(xiàn)當質(zhì)量提取窗口為3 μg/kg時，目標分析物的提取效果最好[39]。

在動物源農(nóng)產(chǎn)品的非靶向檢測研究中，數(shù)據(jù)分析步驟為原始數(shù)據(jù)采集、數(shù)據(jù)保存和轉(zhuǎn)化、數(shù)據(jù)導(dǎo)入、數(shù)據(jù)壓縮和矩陣建立、數(shù)據(jù)歸一化、特征檢測、生物標志物篩查、鑒定。多元統(tǒng)計分析方法如主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判別分析（OPLS-DA）等可識別動物源樣品中的獸藥及其代謝產(chǎn)物，通用的商業(yè)軟件可能無法直接處理LC-HRMS檢測的原始數(shù)據(jù)，因此須要對原始數(shù)據(jù)進行格式轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換成開放性的數(shù)據(jù)格式之后便可進行數(shù)據(jù)處理[65-66]。近年來，隨著數(shù)據(jù)處理軟件的升級，自動化處理的程度越來越高。如Morales-Gutierrez等應(yīng)用UPLC-LTQ-Qrbitrap MS檢測雞的肉、肝、腎中的阿莫西林及其代謝產(chǎn)物時，用PCA方法對數(shù)據(jù)進行處理，獲得了區(qū)分用藥組和非用藥組的化合物，試驗測得的原始數(shù)據(jù)首先經(jīng)Xcalibur軟件轉(zhuǎn)化成mzXML文件，再用MzMine軟件和XCMS軟件來處理此數(shù)據(jù)，得到可以用Matlab處理的數(shù)據(jù)矩陣，最后用PCA法處理的數(shù)據(jù)矩陣，得到組間差異化合物[35]。而在Arias等用OPLS-DA模型識別用藥豬與未用藥豬之間差異的研究[67]中，數(shù)據(jù)前處理僅使用了TransOmics軟件[沃特世科技（上海）有限公司]，經(jīng)歸一化、標準化的數(shù)據(jù)直接導(dǎo)入SIMCA軟件（德國賽多利斯集團）進行多元統(tǒng)計分析。自動處理軟件的開發(fā)，簡化了處理過程，縮短了處理時間。

5 展望

動物源農(nóng)產(chǎn)品中的獸藥殘留直接危害公眾健康，因此受到消費者和監(jiān)管部門的重視。高效準確地檢測動物源農(nóng)產(chǎn)品中的獸藥殘留情況，對保證動物源農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全具有重要意義?；贚C-HRMS的獸藥殘留檢測方法已經(jīng)發(fā)展成為一項非常重要的檢測手段，綠色、高效的提取方法是未來 LC-HRMS 前處理方法的發(fā)展方向，色譜系統(tǒng)和色譜柱填料的進步，特別是將新型的色譜分離技術(shù)如nanoLC、μLC和CLC等與HRMS相結(jié)合是減少基質(zhì)效應(yīng)、提高分離效率的發(fā)展方向，HRMS分辨率的不斷提高以及應(yīng)用軟件的優(yōu)化會進一步促進LC-HRMS技術(shù)在動物源農(nóng)產(chǎn)品獸藥殘留檢測中的應(yīng)用研究。

參考文獻：

[1]王小平. 獸藥殘留對生態(tài)環(huán)境的影響及人體的危害[J]. 山東畜牧獸醫(yī)，2016（6）：47-48.

[2]童建軍，孫穩(wěn)平，朱育紅. 獸藥殘留危害分析與管控[J]. 中國畜禽種業(yè)，2017（4）：34-37.

[3]湯曉艷，鄭 鋅，王 敏，等. 畜禽產(chǎn)品獸藥殘留限量標準現(xiàn)狀與發(fā)展方向[J]. 食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報，2017（4）：8-12.

[4]Kaufmann A. The current role of high-resolution mass spectrometry in food analysis[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry，2012，403（5）：1233-1249.

[5]Masia A，Suarez-Varela M M，Llopis-Gonzalez A，et al. Determination of pesticides and veterinary drug residues in food by liquid chromatography-mass spectrometry：a review[J]. Analytica Chimica Acta，2016，936：40-61.

[6]Rochat B. From targeted quantification to untargeted metabolomics：why LC-high-resolution-MS will become a key instrument in clinical labs[J]. Trends in Analytical Chemistry，2016，84（suppl1）：151-164.

[7]Rathahao-Paris E，Alves S，Junot C A. High resolution mass spectrometry for structural identification of metabolites in metabolomics[J]. Metabolomics，2016，12（1）：10.

[8]Gao P，Xu G W. Mass-spectrometry-based microbial metabolomics：recent developments and applications[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry，2015，407（3）：669-680.

[9]Rainville P D，Theodoridis G，Plumb R S. Advances in liquid chromatography coupled to mass spectrometry for metabolic phenotyping[J]. Trends in Analytical Chemistry，2014，61：181-191.

[10]Delatour T，Racault L，Bessaire T A. Screening of veterinary drug residues in food by LC-MS/MS. Background and challenges[J]. Food Additives and Contaminants Part A（Chemistry Analysis Control Exposure & Risk Assessment），2018，35（4）：632-645.

[11]Fu Y Q，Zhao C X，Lu X，et al. Nontargeted screening of chemical contaminants and illegal additives in food based on liquid chromatography-high resolution mass spectrometry[J]. Trends in Analytical Chemistry，2017，96（SI）：89-98.

[12]Kaufmann A，Walker S. Comparison of linear intrascan and interscan dynamic ranges of orbitrap and ion-mobility time-of-flight mass spectrometers[J]. Rapid Communications in Mass Spectrometry，2017，31（22）：1915-1926.

[13]Fu Y，Zhou Z，Kong H，et al. Non-targeted screening method for illegal additives based on ultra high performance liquid chromatography-high resolution mass spectrometry[J]. Analytical Chemistry，2016，88（17）：8870-8877.

[14]Kaufmann A，Butcher P，Maden K，et al. Quantitative and confirmative performance of liquid chromatography coupled to high-resolution mass spectrometry compared to tandem mass spectrometry[J]. Rapid Communications in Mass Spectrometry，2011，25（7）：979-992.

[15]Morin L P，Mess J N，Garofolo F. Large-molecule quantification：sensitivity and selectivity head-to-head comparison of triple quadrupole with Q-TOF[J]. Bioanalysis，2013，5（10）：1181-1193.

[16]Grund B，Marvin L，Rochat B. Quantitative performance of a quadrupole-orbitrap-MS in targeted LC-MS determinations of small molecules[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2016，124：48-56.

[17]Kaufmann A，Butcher P，Maden K，et al. Determination of nitrofuran and chloramphenicol residues by high resolution mass spectrometry versus tandem quadrupole mass spectrometry[J]. Analytica Chimica Acta，2015，862：41-52.

[18]Moretti S，Dusi G，Giusepponi D A，et al. Screening and confirmatory method for multiclass determination of 62 antibiotics in meat[J]. Journal of Chromatography A，2016，1429：175-188.

[19]Cotton J，Leroux F，Broudin S，et al. High-resolution mass spectrometry associated with data mining tools for the detection of pollutants and chemical characterization of honey samples[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2014，62（46）：11335-11345.

[20]Turnipseed S B，Lohne J J，Storey J M，et al. Challenges in implementing a screening method for veterinary drugs in milk using liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2014，62（17）：3660-3674.

[21]Lopez-Garcia M，Romero-Gonzalez R，Garrido F A. Determination of rodenticides and related metabolites in rabbit liver and biological matrices by liquid chromatography coupled to orbitrap high resolution mass spectrometry[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2017，137：235-242.

[22]Lopez-Garcia M，Romero-Gonzalez R，Garrido F A. Determination of steroid hormones and their metabolite in several types of meat samples by ultra high performance liquid chromatography-orbitrap high resolution mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A，2018，1540：21-30.

[34]Wang J，Leung D. The challenges of developing a generic extraction procedure to analyze multi-class veterinary drug residues in milk and honey using ultra-high pressure liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry[J]. Drug Testing and Analysis，2012，4（Supplement S1）：103-111.

[35]Morales-Gutierrez F J，Hermo M P，Barbosa J，et al. High-resolution mass spectrometry applied to the identification of transformation products of quinolones from stability studies and new metabolites of enrofloxacin in chicken muscle tissues[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2014，92：165-176.

[36]Zhao F，Gao X，Tang Z X，et al. Development of a simple multi-residue determination method of 80 veterinary drugs in Oplegnathus punctatus by liquid chromatography coupled to quadrupole Orbitrap mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography B（Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences），2017，1065：20-28.

[37]Alcantara-Duran J，Moreno-Gonzalez D，Gilbert-Lopez B，et al. Matrix-effect free multi-residue analysis of veterinary drugs in food samples of animal origin by nanoflow liquid chromatography high resolution mass spectrometry[J]. Food Chemistry，2018，245：29-38.

[38]Jia W，Shi L，Chu X G. Untargeted screening of sulfonamides and their metabolites in salmon using liquid chromatography coupled to quadrupole orbitrap mass spectrometry[J]. Food Chemistry，2018，239：427-433.

[39]Jia W，Chu X G，Chang J，et al. High-throughput untargeted screening of veterinary drug residues and metabolites in tilapia using high resolution orbitrap mass spectrometry[J]. Analytica Chimica Acta，2017，957：29-39.

[40]Nunes K S，Vallim J H，Assalin M R，et al. Depletion study，withdrawal period calculation and bioaccumulation of sulfamethazine in tilapia （Oreochromis niloticus） treated with medicated feed[J]. Chemosphere，2018，197：89-95.

[41]Arsand J B，Jank L，Martins M T，et al. Determination of aminoglycoside residues in milk and muscle based on a simple and fast extraction procedure followed by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry and time of flight mass spectrometry[J]. Talanta，2016，154：38-45.

[42]Nacher-Mestre J，Ibanez M，Serrano R，et al. Investigation of pharmaceuticals in processed animal by-products by liquid chromatography coupled to high-resolution mass spectrometry[J]. Chemosphere，2016，154：231-239.

[43]Hiba A，Carine A，Haifa A R，et al. Monitoring of twenty-two sulfonamides in edible tissues：investigation of new metabolites and their potential toxicity[J]. Food Chemistry，2016，192：212-227.

[44]Du L J，Yi L，Ye L H，et al. Miniaturized solid-phase extraction of macrolide antibiotics in honey and bovine milk using mesoporous MCM-41 silica as sorbent[J]. Journal of Chromatography Acta，2018，1537：10-20.

[45]Junza A，Saurina J，Barron D，et al. Metabolic profile modifications in milk after enrofloxacin administration studied by liquid chromatography coupled with high resolution mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography Acta，2016，1460：92-99.

[46]Feng S X，Chiesa O A，Kijak P，et al. Determination of ceftiofur metabolite desfuroylceftiofur cysteine disulfide in bovine tissues using liquid chromatography-tandem mass spectrometry as a surrogate marker residue for ceftiofur[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2014，62（22）：5011-5019.

[47]Iglesias A，Nebot C，Miranda J M，et al. Detection and quantitative analysis of 21 veterinary drugs in river water using high-pressure liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry[J]. Environmental Science and Pollution Research，2012，19（8）：3235-3249.

[48]Chung S W，Lam C H. Development of a 15-class multiresidue method for analyzing 78 hydrophilic and hydrophobic veterinary drugs in milk，egg and meat by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Analytical Methods，2015，7（16）：6764-6776.

[49]Diez C，Guillarme D，Spoerri A S，et al. Aminoglycoside analysis in food of animal origin with a zwitterionic stationary phase and liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Analytica Chimica Acta，2015，882：127-139.

[50]胡海燕，朱馨樂，胡 昊，等. 超高效液相色譜簡介及應(yīng)用比較[J]. 中國獸藥雜志，2010，44（4）：48-50.

[51]la Barbera G，Capriotti A L，Cavaliere C A，et al. Liquid chromatography-high resolution mass spectrometry for the analysis of phytochemicals in vegetal-derived food and beverages[J]. Food Research International，2017，100（1）：28-52.

[52]Theodoridis G A，Gika H G，Want E J，et al. Liquid chromatography-mass spectrometry based global metabolite profiling：a review[J]. Analytica Chimica Acta，2012，711：7-16.

[53]Kim D，Kim B，Hyung S W，et al. An optimized method for the accurate determination of nitrofurans in chicken meat using isotope dilution-liquid chromatography/mass spectrometry[J]. Journal of Food Composition and Analysis，2015，40：24-31.

[54]Perez-Fernandez V，Dominguez-Vega E，Chankvetadze B，et al. Evaluation of new cellulose-based chiral stationary phases Sepapak-2 and Sepapak-4 for the enantiomeric separation of pesticides by nano liquid chromatography and capillary electrochromatography[J]. Journal of Chromatography A，2012，1234：22-31.

[55]Mirabelli M F，Wolf J C，Zenobi R. Pesticide analysis at ppt concentration levels：coupling nano-liquid chromatography with dielectric barrier discharge ionization-mass spectrometry[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry，2016，408（13）：3425-3434.

[56]Garcia-Ac A，Segura P A，Viglino L，et al. Comparison of APPI，APCI and ESI for the LC-MS/MS analysis of bezafibrate，cyclophosphamide，enalapril，methotrexate and orlistat in municipal wastewater[J]. Journal of Mass Spectrometry，2011，46（4）：383-390.

[57]Holcapek M，Jirasko R，Lisa M. Recent developments in liquid chromatography-mass spectrometry and related techniques[J]. Journal of Chromatography Acta，2012，1259：3-15.

[58]夏 曦，李曉薇，丁雙陽，等. 液相色譜-高分辨質(zhì)譜在獸藥殘留分析中的應(yīng)用進展[J]. 質(zhì)譜學(xué)報，2011（6）：333-340.

[59]Lehotay S J，Sapozhnikova Y，Mol H G. Current issues involving screening and identification of chemical contaminants in foods by mass spectrometry[J]. Trends in Analytical Chemistry，2015，69（SI）：62-75.

[60]Perez-Ortega P，Lara-Ortega F J，Garcia-Reyes J F，et al. A feasibility study of UHPLC-HRMS accurate-mass screening methods for multiclass testing of organic contaminants in food[J]. Talanta，2016，160：704-712.

[61]Porta T，Varesio E，Hopfgartner G. Gas-phase separation of drugs and metabolites using modifier-assisted differential ion mobility spectrometry hyphenated to liquid extraction surface analysis and mass spectrometry[J]. Analytical Chemistry，2013，85（24）：11771-11779.

[62]Regueiro J，Negreira N，Hannisdal R，et al. Targeted approach for qualitative screening of pesticides in salmon feed by liquid chromatography coupled to traveling-wave ion mobility/quadrupole time-of-flight mass spectrometry[J]. Food Control，2017，78：116-125.

[63]Saito-Shida S，Hamasaka T，Nemoto S A. Multiresidue determination of pesticides in tea by liquid chromatography-high-resolution mass spectrometry：comparison between orbitrap and time-of-flight mass analyzers[J]. Food Chemistry，2018，256：140-148.

[64]Kellmann M，Muenster H，Zomer P，et al. Full scan MS in comprehensive qualitative and quantitative residue analysis in food and feed matrices：how much resolving power is required？[J]. Journal of the American Society for Mass Spectrometry，2009，20（8）：1464-1476.

[65]Orchard S，Montechi-Palazzi L W，Binz P A，et al. Five years of progress in the standardization of proteomics data 4（th）annual spring workshop of the hupo-proteomics standards initiative April 23-25，2007 ecole nationale superieure（ens），Lyon，F(xiàn)rance[J]. Proteomics，2007，7（19）：3436-3440.

[66]扈 慶，方 向. mzXML在質(zhì)譜數(shù)據(jù)共享中的應(yīng)用[J]. 計算機與應(yīng)用化學(xué)，2007，24（12）：1635-1637.

[67]Arias M，Chevallier O P，Graham S F，et al. Metabolomics reveals novel biomarkers of illegal 5-nitromimidazole treatment in pigs. Further evidence of drug toxicity uncovered[J]. Food Chemistry，2016，199：876-884.華兆暉，范世航，李 俊. 甘藍型油菜啟動子pBnaC05g31880D的克隆與功能分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，48（2）：65-72.