軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)快繁體系的建立

王 禹

(黑龍江省農(nóng)科院園藝分院，哈爾濱 150069)

軟棗獼猴桃[Actinidaarguta(Sieb.et Zucc.)Planch.ex Miq]屬于獼猴桃科(Actinidiace)獼猴桃屬(Actinidia)多年生落葉藤本植物，又名軟棗子，獼猴梨。其果實(shí)可食用，富含維生素C、礦物質(zhì)元素、果膠質(zhì)等多種有益元素，還可以加工成果醬、果汁、罐頭以及糖果等多種食品；根可入藥，有清熱、健胃、止血，并對消化道癌癥有一定的治療和抑制作用；種子含油率達(dá)35.62%，是一種較好的干性油。軟棗獼猴桃可應(yīng)用在醫(yī)藥、科研、保健食品、園林綠化等多種行業(yè)中，是一項(xiàng)極具開發(fā)利用前景的自然資源。黑龍江省軟棗獼猴桃野生種質(zhì)資源豐富，許多優(yōu)良的種質(zhì)資源已被采集、馴化及利用。

植物組織培養(yǎng)具有生育期短、不受季節(jié)限制的特點(diǎn)，利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁育軟棗獼猴桃種苗，可提高繁殖速度，有利于野生種質(zhì)資源的保存、馴化及利用。本試驗(yàn)以軟棗獼猴桃的莖段為材料，研究適宜的生長、叢生芽增殖的培養(yǎng)基、繼代時間以及生根培養(yǎng)基，并探討了適宜的移栽條件，以期建立軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)快繁體系，提高種苗的繁殖速度。

1 供試材料

試驗(yàn)以黑龍江省采集野生資源野生馴化品系雌株4021、雄株4023的一年生嫩枝莖段為材料；采集地為黑龍江省農(nóng)科院園藝分院；采集時間為6月末～8月初。

2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法

2.1 軟棗獼猴桃莖段生長培養(yǎng)適宜的培養(yǎng)基

將采集的莖段剪成1 cm帶一個芽的小段，自來水流沖洗1 h，置于超凈工作臺中，酒精消毒1 min，蒸餾水沖洗1次，0.1%的升汞消毒7min，蒸餾水沖洗3次，接種到生長培養(yǎng)基上。生長培養(yǎng)基采用6-BA+AA+30 g/L 蔗糖+7 g/L 瓊脂 pH 5.4～5.8；培養(yǎng)溫度為22～ 25 ℃，光照時間14 h/d。調(diào)查6-BA、IAA對莖段萌發(fā)的影響。

2.2 軟棗獼猴桃增殖培養(yǎng)適宜的培養(yǎng)基

將萌發(fā)的軟棗獼猴桃芽轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基采用6-BA+IAA+ZT+30 g/L 蔗糖+7 g/L 瓊脂 pH 5.4～5.8；培養(yǎng)溫度為22～25 ℃，光照時間14 h/d。調(diào)查6-BA、IAA、ZT對草莓叢生芽增殖的影響。

2.3 軟棗獼猴桃增殖培養(yǎng)適宜的繼代時間

待芽生出叢生芽且莖節(jié)間伸長后，將莖段切成0.5 cm帶芽的小段，接種到增殖培養(yǎng)基上繼續(xù)增殖，調(diào)查繼代時間莖段增殖的影響。

2.4 軟棗獼猴桃組培苗生根的適宜的培養(yǎng)基

將組培苗的莖段切成0.5 cm帶芽的小段，轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基采用MS或1/2MS+IBA+IAA+30 g/L 蔗糖+7 g/L 瓊脂pH 5.4～5.8；培養(yǎng)溫度為22～25℃；光照時間12 h/d。調(diào)查MS或1/2MS、IBA、IAA對軟棗獼猴桃生根的影響。

2.5 軟棗獼猴桃組培苗適宜的移栽條件

組培苗移栽14 d后，調(diào)查遮光率、組培苗高度、根系長度、空氣濕度及環(huán)境溫度對移栽成活率的影響。

3 結(jié)果與分析

3.1 適宜軟棗獼猴桃腋芽萌發(fā)的培養(yǎng)基篩選

表1 生長激素對軟棗獼猴桃腋芽萌發(fā)的影響

腋芽接種15 d后陸續(xù)開始萌發(fā)，從表1得出添加1～2 mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/L IAA可促進(jìn)腋芽萌發(fā)，且芽體長勢強(qiáng)壯。

3.2 適宜軟棗獼猴桃叢生芽增殖的培養(yǎng)基篩選

表2 生長激素對叢生芽增殖的影響

從表2得出，以0.5～1 mg/L 6-BA+0.5～1 mg/L ZT增殖效果較好；6-BA達(dá)到3 mg/L，葉片尖端發(fā)白，生長發(fā)育不良。

3.3 適宜軟棗獼猴桃叢生芽增殖培養(yǎng)的繼代時間

表3 繼代時間對叢生芽增殖的影響

從表3得出，叢生芽生長至40 d時增殖系數(shù)提高明顯，且莖伸長較多；生長50 d以后生長勢衰弱，葉片及莖變白。因此，軟棗獼猴桃40 d繼代一次最佳。

3.4 適宜軟棗獼猴桃組培苗生根的培養(yǎng)基篩選

表4 生長激素對組培苗生根的影響

生根實(shí)驗(yàn)得出，1/2MS比MS生根快，根生出后MS比1/2MS根粗壯；MS比1/2MS植株長勢快，添加IAA植株長勢亦快，馴化時植株高、根系長不利于成活。建議培養(yǎng)基使用1/2MS，且不添加IAA，以1/2MS+0.2～0.5 mg/L IBA培養(yǎng)基最佳。

3.5 軟棗獼猴桃組培苗移栽適宜條件

實(shí)驗(yàn)得出，軟棗獼猴桃組培苗移栽時，組培苗矮、根短,移栽成活率較高；移栽后光照較弱不利于軟棗獼猴桃組培苗產(chǎn)生新根；環(huán)境溫度低或者空氣濕度小都不利于組培苗新根的生長。從表5得出，軟棗獼猴桃組培苗移栽的適宜條件為組培苗高度不超過1.5 cm；根系長度不超過0.5 cm；遮光率不高于60%；空氣濕度不低于40%；環(huán)境溫度不低于15 ℃、不高于30 ℃，移栽成活率可達(dá)到93%。

表5 軟棗獼猴桃組培苗移栽適宜條件篩選

4 結(jié)論與討論

軟棗獼猴桃快繁體系的步驟為：6月末～8月初，采集一年生嫩枝莖段，剪成1 cm帶一個芽的小段，自來水流沖洗1 h，置于超凈工作臺中，酒精消毒1 min，蒸餾水沖洗1次，0.1%的升汞消毒7 min，蒸餾水沖洗3次，接種到生長培養(yǎng)基上。生長培養(yǎng)基采用1～2 mg/L 6-BA+0.1～0.5 mg/L IAA+30 g/L 蔗糖+7 g/L 瓊脂pH 5.4～5.8；培養(yǎng)溫度為22～25 ℃，光照時間14 h/d。將萌發(fā)的軟棗獼猴桃芽轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基采用0.5～1 mg/L 6-BA+0.5～1 mg/L ZT+30 g/L 蔗糖+7 g/L 瓊脂pH 5.4～5.8、培養(yǎng)溫度為22～25 ℃、光照時間14 h/d。待芽生出叢生芽且莖節(jié)間伸長后，將莖段切成0.5 cm帶芽的小段，繼續(xù)接種到增殖培養(yǎng)基上，40 d轉(zhuǎn)一次瓶，增殖系數(shù)6.3。將組培苗的莖段切成0.5 cm帶芽的小段，轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基采用1/2MS+0.2～0.5 mg/L IBA+30 g/L 蔗糖+7 g/L 瓊脂pH 5.4～5.8；培養(yǎng)溫度為22～25 ℃；光照時間14 h/d。軟棗獼猴桃組培苗高度不超過1.5 cm、根系小于0.5 cm時，轉(zhuǎn)至移栽環(huán)境開蓋放置1 d。移栽基質(zhì)采用草炭土，拌入30%的多菌靈(多菌靈∶土1∶100)，噴灑73%炔螨特乳油2000倍液，覆蓋塑料布消毒3 d。將組培苗洗凈根部培養(yǎng)基栽入育苗盤中，育苗盤采用72穴，厚度5 cm。移栽后遮光率不高于60%，空氣濕度不低于40%，環(huán)境溫度不低于15 ℃、不高于30 ℃，移栽成活率可達(dá)到93%。

軟棗獼猴桃組培苗增殖時，隨著6-BA使用濃度的增高，叢生芽產(chǎn)生的越多，但出現(xiàn)葉片尖端發(fā)白，生長發(fā)育不良的現(xiàn)象，要控制激素使用量；本實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)的增殖系數(shù)為1個芽可產(chǎn)生的叢生芽數(shù)量，未計(jì)算節(jié)間切割可產(chǎn)生的增殖量，因此可適當(dāng)添加生長激素，促使叢生芽節(jié)間伸長，可以提高增殖量。生根實(shí)驗(yàn)得出，1/2MS比MS生根快，根生出后MS比1/2MS根粗壯；MS比1/2MS植株長勢快，雖然MS比1/2MS組培苗長勢優(yōu)良，但馴化時植株高、根系長不利于馴化成活。