EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥的臨床相關(guān)因素分析

鐘小婷，馬祥波，胡志愿，肖仁威，羅秋鳳

（英德市人民醫(yī)院，廣東 英德 513000）

依賴(lài)性假性血小板減少癥是乙二胺四乙酸（EDTA）鹽作為抗凝劑的抗凝血在全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上檢測(cè)時(shí)，發(fā)生血小板聚集而引起的假性血小板減少的現(xiàn)象。乙二胺四乙酸作為被國(guó)際學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)推薦使用對(duì)血細(xì)胞影響較小的抗凝劑，廣泛應(yīng)用于血常規(guī)檢測(cè)中[1]。據(jù)相關(guān)報(bào)道[2]：使用乙二胺四乙酸能導(dǎo)致血小板聚集、粘附，能夠引起EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥，這項(xiàng)發(fā)現(xiàn)引起人們的重視。我院在EDTA抗凝管血常規(guī)工作中，凡發(fā)現(xiàn)血小板明顯減少但沒(méi)有臨床癥狀的患者進(jìn)行涂片染色鏡檢。本文以確診的37例EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥患者作為對(duì)象開(kāi)展研究，探討EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥的臨床相關(guān)因素分析，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2018年1月-2019年6月在我院住院及門(mén)診檢測(cè)到EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥病例37例。男25例，女12例，年齡17-85歲，平均（48±3.50）歲；另選到醫(yī)院檢查體檢健康者37例，男26例，女11例，年齡18-84歲，平均（46±2.90）歲。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥病診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。（2）所有患者未出現(xiàn)皮膚瘀點(diǎn)、瘀斑、鼻出血以及腸胃道和泌尿系統(tǒng)出血等臨床癥狀。

1.3 方法 （1）儀器與試劑：血細(xì)胞分析儀為希森美康XS-500i全自動(dòng)血液分析儀，試劑采用儀器配套試劑（溶血?jiǎng)⑾♂屢汉颓逑匆海〦DTA-K2抗凝劑和枸櫞酸鈉抗凝劑。儀器采用專(zhuān)用校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn),由希森美康公司進(jìn)行。EDTA-K2和枸櫞酸鈉真空采血管為山東威高公司提供，真空采血管分別為1.8 mg/mL及109 mmol/L。瑞氏染液由貝索公司提供。（2）方法：采取合格樣本采用希森美康XS-500i全自動(dòng)血液分析儀進(jìn)行分析，參照標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)國(guó)際血液學(xué)復(fù)檢專(zhuān)家推薦的“41條復(fù)檢規(guī)則”和儀器提示有血小板聚集的標(biāo)本，首先將涂片用瑞氏一姬姆薩染色，然后使用光學(xué)顯微鏡在油鏡下觀察血小板的分布情況，發(fā)現(xiàn)血小板簇狀分布則懷疑為EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥。對(duì)可疑為EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥的病例重新采取2份靜脈血標(biāo)本，其中一份使用EDTA-K2抗凝劑，另一份使用枸櫞酸鈉抗凝劑。取血后迅速搖動(dòng)，15 min內(nèi)上機(jī)進(jìn)行檢測(cè)。如EDTA抗凝血結(jié)果與首次檢測(cè)相符，枸櫞酸抗凝血結(jié)果明顯提高者確定為EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥，否則排除。

1.4 觀察指標(biāo) （1）血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果：使用不同抗凝劑的血標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，分別記錄PLT、WBC、RBC、HBG的數(shù)據(jù)，然后分別進(jìn)行涂片、染色，鏡檢，用光學(xué)顯微鏡觀察血小板分布情況。（2）EDTA組與健康組血沉以及免疫球蛋白的結(jié)果比較。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 18.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表1 希森美康XS-500i全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)結(jié)果比較（Mean±SD）

表2 兩組血沉以及免疫球蛋白比較（Mean±SD）

2 結(jié)果

2.1 希森美康XS-500i檢測(cè)結(jié)果 EDTA-K2抗凝劑和枸櫞酸鈉抗凝劑血分別采用希森美康XS-500i全自動(dòng)血液分析儀進(jìn)行3次檢測(cè)，結(jié)果取平均值，血小板計(jì)數(shù)（PLT）數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而WBC、RBC、HBG無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

EDTA-K2抗凝血標(biāo)本和枸櫞酸鈉抗凝血標(biāo)本各進(jìn)行涂片、染色進(jìn)行鏡檢，鏡檢結(jié)果為：EDTA-K2抗凝血標(biāo)本出現(xiàn)血小板互相聚集、堆積；而枸櫞酸鈉抗凝血標(biāo)本未發(fā)現(xiàn)血小板聚集、堆積的現(xiàn)象。

2.2 EDTA組與健康組血沉以及免疫球蛋白比較 EDTA組觀血沉、IgG、IgM檢測(cè)結(jié)果明顯高于健康者（P＜0.05），而IgA檢測(cè)結(jié)果與健康者無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05） 見(jiàn)表2。

3 討論

假性血小板減少癥是由于EDTA的作用使血小板膜表面抗原改變，或是隱蔽的抗原暴露所引起的抗原抗體反應(yīng)，使血小板聚集，進(jìn)而導(dǎo)致了血細(xì)胞分析儀血小板計(jì)數(shù)結(jié)果的假性減少，目前該病的發(fā)生機(jī)制尚不明確，同樣也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)與特定的病因或誘因相關(guān)[4]。假性低血小板計(jì)數(shù)可能會(huì)導(dǎo)致臨床上增加一些不必要的輔助檢查，甚至可能會(huì)引起臨床誤診、誤治現(xiàn)象發(fā)生。因此，臨床檢驗(yàn)人員對(duì)EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥的鑒定與檢查顯得十分重要。

近年來(lái)，針對(duì)EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥的現(xiàn)象國(guó)內(nèi)外已經(jīng)產(chǎn)生廣泛的關(guān)注。本研究中，通過(guò)觀察用EDTA-K2抗凝劑血儀器法檢測(cè)結(jié)果，以及EDTA-K2抗凝血標(biāo)本涂片使用瑞氏一姬姆薩染色進(jìn)行鏡檢結(jié)果，說(shuō)明使用EDTA作為抗凝劑，免疫介質(zhì)導(dǎo)致冷抗血小板自身抗體產(chǎn)生，可能導(dǎo)致隱藏的抗原暴露，進(jìn)而使假性血小板減少。本研究中，EDTA組觀血沉、IgG、IgM檢測(cè)結(jié)果明顯高于健康者（P＜0.05），說(shuō)明EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥可能與某種隱匿性抗原有關(guān)，EDTA可以誘導(dǎo)血小板表面糖蛋白GPIIb/IIIa的表達(dá)，改變了血小板的形態(tài)，也改變了血小板的膜表面的某種隱匿性抗原的構(gòu)象，進(jìn)而激活了細(xì)胞膜上的磷酸酯酶A2和磷酸酶C，促使血小板膜磷酸水解，釋放出花生四烯酸（AA）、ADP、膠原、凝血酶原、內(nèi)源性鈣離子等活性物質(zhì)，釋放出的這些活性物質(zhì)將血小板纖維蛋白受體（FIB-R）活化，導(dǎo)致血小板與纖維蛋白原聚集成團(tuán)。另有研究發(fā)現(xiàn)[5]：多數(shù)患者存在血小板抗體的同時(shí)，也存在抗磷脂抗體，血小板表面帶有負(fù)電荷的磷脂抗體與EDTA修飾的抗原相互結(jié)合，這也可能是導(dǎo)致假性血小板減少的起因。血常規(guī)是一項(xiàng)常規(guī)的檢查項(xiàng)目，應(yīng)用已經(jīng)相當(dāng)普遍，雖然EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥發(fā)生的概率非常低，但依然能夠?qū)颊咴斐烧`診，為患者以及醫(yī)院診治工作者帶來(lái)較大的困擾[6]。現(xiàn)實(shí)中患者抽血在15 min以?xún)?nèi)完成血常規(guī)檢查相當(dāng)困難，然而EDTA-K2抗凝劑超過(guò)30 min的時(shí)間在去做血常規(guī)檢查，血小板的計(jì)數(shù)減少，但白細(xì)胞的數(shù)量相對(duì)會(huì)上升。臨床研究表明[7]：血小板主要是用于止血以及防止血栓形成的作用，因而血小板檢測(cè)的準(zhǔn)確性十分重要。對(duì)于血小板減少的患者應(yīng)予以重視，若不對(duì)其給予高度關(guān)注可能會(huì)導(dǎo)致患者發(fā)生意外，造成不可挽回的傷害和損失。遇到血小板較低的患者，應(yīng)該從多方面進(jìn)行考慮，首先考慮到的是EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥，然后對(duì)患者進(jìn)行詳細(xì)詢(xún)問(wèn)，仔細(xì)檢查。

綜上所述，EDTA致使血小板減少的病理機(jī)制到目前為止不是很清晰，因而臨床檢驗(yàn)人員對(duì)EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥的鑒定顯得尤為重要，避免出現(xiàn)誤診、誤治現(xiàn)象的發(fā)生。