新生兒血液樣本溶血對血清NSE檢測結(jié)果的影響及其校正公式的建立

唐莉莉

（長興縣人民醫(yī)院，浙江 湖州 313100）

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集長興縣人民醫(yī)院在2015年期間出生時間小于24 h的新生兒并對其血清樣本和資料進(jìn)行統(tǒng)計，其中男新生兒共44名，女新生兒共28名，共計72名。對起其他不同時間出生的588位新生兒血清的膽紅素進(jìn)行綜合性的回顧分析來對血清當(dāng)中膽紅素分布特征進(jìn)行探索。

1.2 研究方法 使用文齊氏液、氰化高鐵血紅蛋白配置的標(biāo)準(zhǔn)液等材料進(jìn)行血清分析，使用NSE檢測試劑和配套的全自動化學(xué)分析系統(tǒng)對血清當(dāng)中具體成分進(jìn)行深入分析，隨后根據(jù)吸光度的不同來建立起來Hb標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 利用TU-1901雙光紫外線設(shè)備，其分光度計測量50、100、150、200 g/L Hb標(biāo)準(zhǔn)也在540納米處吸光度（A）值，將A值作為縱坐標(biāo)，Hb濃度則為橫坐標(biāo)，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。采取10分出生時間不超于24 h的新生兒全血樣本混勻以后，從中吸取20 μL加入文齊氏5 mL液體中，搖晃均勻后在15 min測量540納米處A值，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得此混合全血的Hb濃度。利用90% Nacl稀釋全血Hb濃度，分別為6、8、10 g/L。并吸取100 μL稀釋液以后，將其加入到文齊氏2.5 mL液體中，搖晃均勻以后在15 min內(nèi)測量540納米的A值，將A值為縱坐標(biāo)，Hb濃度為橫坐標(biāo)，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 測定血清中NSE濃度 選擇此次研究主體出生時間不超過24 h的新生兒血液樣本，將2583×g離心5 min作為標(biāo)準(zhǔn)，血清分離，提取上層血清500 μL，將其放置于干凈的試管之內(nèi)，便于檢測NES濃度；對下層紅細(xì)胞進(jìn)行吸取，并取200 μL將其凍存至管內(nèi)，凍存溫度控制在-80oC冰箱之內(nèi)，反復(fù)3次。針對已經(jīng)檢測完畢的血清樣本吸取出300 μL血清，將其放置另一只干凈的試管內(nèi)，加入經(jīng)凍融處理后的紅細(xì)胞10 μL，搖晃均勻后以2583×g離心5 min為標(biāo)準(zhǔn)，吸取上層血清放在干凈的試管中，對添加凍融紅細(xì)胞的進(jìn)行血清NSR濃度檢測。

2 結(jié)果

出生在25-120 h的新生兒血清TB濃度為（164.5±74.4）μmol/L，與出生不超過24 h的新生兒相比（45.7±13.1）μmol/L明顯較高。在臨床上醫(yī)師出具NSE檢測醫(yī)囑的新生兒已經(jīng)達(dá)到91.70%，且出生時間＜24 h。出生時間不超過24 h新生兒血液樣本有不同的溶血，其樣本溶液程度）≥2 g/L Hb，已經(jīng)達(dá)到61.79%。

3 討論

NSE是一種細(xì)胞內(nèi)的金屬酶，由γ-dimerα-γheterodimer組成，血清NSE檢測對HIE患兒腦損傷的嚴(yán)重程度及預(yù)后具有重要意義。經(jīng)實驗，顯示血清NSE濃度的臨界值設(shè)為40 mg/L，判斷HIE及HIE是否嚴(yán)重，閾值為45.4 mg/L，用以判斷預(yù)后。因此，NSE檢測結(jié)果的可靠性對HIE的診斷尤為重要。然而，在紅細(xì)胞中存在一定數(shù)量的NSE。血樣溶血會導(dǎo)致NSE檢測結(jié)果的錯誤增加，這可能會影響臨床醫(yī)生的判斷，尤其是在血樣不易采集和容易溶血的新生兒中。當(dāng)新生兒發(fā)生生理溶血時，NSE和Hb在體內(nèi)有自己的代謝模式和半衰期，使得很難評估血清NSE結(jié)果與Hb結(jié)果之間的關(guān)系。尤其是在Hb到膽紅素的代謝過程中。本研究結(jié)果表明，新生兒血清結(jié)核濃度明顯高于出生時≤24 h的新生兒。這說明新生兒生理溶血時間或Hb代謝成膽紅素的時間可能主要在出生后24 h。

新生兒血清Hb濃度低，如果使用標(biāo)準(zhǔn)HiCN方法，溶血前后A值的差異很小，靈敏度低。因此，此次研究通過對測量方法的改進(jìn)，有助于提升檢測的靈敏反應(yīng)，結(jié)合新生兒血清Hb濃度建立有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)曲線。由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變，治療窗口時間很短（平均約6 h），因此及時、正確的診斷和治療HIE預(yù)后非常重要。因此，有必要建立新生兒溶血標(biāo)本的NSE檢測結(jié)果的校正公式。

總之，應(yīng)該避免溶血，并且當(dāng)檢測到血清NSE時丟棄溶血樣品。但是，新生兒標(biāo)本采集容易發(fā)生溶血，反復(fù)采血難以避免，容易引起醫(yī)患之間的矛盾。因此，對于新生兒溶血樣品，在不能再次采集血液的情況下，可以選擇校正公式來校正NSE檢測結(jié)果，以幫助臨床評估新生兒HIE的嚴(yán)重程度和預(yù)后。