食品中羅丹明B的檢測方法

孔繁迪 龐明利 施裔陽 陸思堯 周倩雯

摘 要：羅丹明B是一種人工合成堿性染料，對人體有一定的致癌作用，因此，國家將其列為禁用添加劑。本文綜述了食品中羅丹明B常用的檢測方法，并對各檢測方法的特點進行相應的分析與評價。

關鍵詞：羅丹明B;檢測;食品

Abstract：Rhodamine B is a synthetic basic dye that has a certain carcinogenic effect on the human body. Therefore， the country has listed it as a banned additive. This paper summarized the commonly used detection methods of rhodamine B in food， and analyzed and evaluated the characteristics of each method..

Key words：Rhodamine B; Detection; Food

中圖分類號：TS201.6

隨著經(jīng)濟的不斷發(fā)展，人們的生活水平也在不斷的提高。“吃”作為最基本的生存需求，人們已經(jīng)不再僅僅滿足于吃飽，還要吃好，所以食品添加劑應運而生。食品添加劑是為改善食品色、香、味等品質(zhì)及為滿足防腐、加工工藝的需要而加入食品中的人工合成或者天然物質(zhì)[1]。目前我國食品添加劑有23個大類，上千個品種，常見的添加劑有甜味劑、抗氧化劑、著色劑、防腐劑及營養(yǎng)強化劑等。隨著人們對“吃”的要求越來越高，添加劑對身體所帶來的健康隱患讓人越來越重視。

著色劑俗稱色素，是食品添加劑的一種，按照著色劑的來源，可分為天然色素和合成色素兩大類。我國食品安全國家標準GB 2760-2014《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》中明確規(guī)定了其在食品中允許添加的范圍和用量。羅丹明B是一種人工合成的堿性染料，一般常用于實驗室中細胞熒光染色劑、有色玻璃、特色煙花爆竹等行業(yè)。羅丹明B會導致老鼠皮下組織產(chǎn)生肉瘤，半數(shù)致死量為（大鼠，經(jīng)口）

500 mg·kg-1。根據(jù)國際癌癥研究署（IARC）化學品致癌風險評價表明，攝取、吸入及皮膚接觸該物質(zhì)均會造成急性和慢性的中毒傷害[2]。美國也曾對該物質(zhì)的危害進行研究，顯示其具有致癌性，歐洲食品安全局（EFSA）證實了羅丹明B的致癌性[3]。我國、日本、歐美等國家和地區(qū)都相繼禁止使用該物質(zhì)。一些不良商人為了降低成本，獲取更加高額利潤，將羅丹明B用于臘腸、調(diào)味品等食品的染色，消費者如果長期食用會導致身體健康的損害。因此，2008年衛(wèi)生部發(fā)布《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單（第一批）》，明確規(guī)定羅丹明B禁止在食品中添加。目前，羅丹明B的檢測方法主要分為高效液相色譜法、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等儀器方法和免疫類方法。

1 分光光度法

分光光度法的原理是在分光光度計中，用不同波長的光連續(xù)照射樣品溶液，可得到與波長相對應的吸收強度。通過建立坐標，可繪制出該物質(zhì)的吸收光譜曲線。利用該曲線進行物質(zhì)定性、定量的分析方法稱為分光光度法。羅丹明B的醇溶液為紅色熒光，最大吸收波長554 nm，最大熒光波長610 nm，激光峰值波長610 nm，調(diào)諧范圍578～610 nm。李緒婷等[4]研究了以乙醇作為分散劑、二氯甲烷作為萃取劑萃取食物中羅丹明B的適宜條件，創(chuàng)建了分散液-液微萃取分光光度法測定食品中的羅丹明B。

2 高效液相色譜法

高效液相色譜是將具有不同極性的溶劑流動相泵入色譜柱中，依據(jù)相似相溶原理，不同組分因極性不同在柱內(nèi)被分離后，先后進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析的方法。因檢測器不同，液相色譜法又可分為高效液相-紫外法、高效液相-熒光法等。

高效液相-紫外法較簡單、快速。孫磊龍等[5]通過甲醇正己烷提取辣椒油中的羅丹明B，經(jīng)過C18固相萃取柱凈化，再用高效液相色譜紫外檢測器檢測。溶液在550 nm波長有最大吸收，方法在0.1～10 mg·L-1范圍內(nèi)線性良好，相關系數(shù)>0.999 4。

與高效液相-紫外法相比，高效液相-熒光法的靈敏度更高，選擇性也更好。王傳現(xiàn)等[6]通過用磷酸乙腈水溶液提取樣品中的羅丹明B，經(jīng)C18固相萃取柱濃縮凈化，再用高效液相色譜熒光檢測，色譜柱采用C18色譜柱，流動相為水和甲醇，激發(fā)波長

550 nm，發(fā)射波長580 nm為色譜條件，創(chuàng)建了通過用固相萃取富集凈化高效液相色譜熒光檢測器測定食品羅丹明B。林長虹等[7]用甲醇水溶液提取，再用超高效液相色譜熒光檢測器測定辣椒及其制品中羅丹明B殘留量。

3 高效液相色譜-質(zhì)譜法

高效液相色譜-質(zhì)譜法是在高效液相的基礎上串聯(lián)質(zhì)譜的一種檢測分析方法，與高效液相相比，加強了組分的鑒定能力。程慧等[8]用乙酸乙酯-環(huán)己烷（1∶1，V/V）超聲提取香腸中殘留的羅丹明B，經(jīng)過凝膠色譜凈化系統(tǒng)凈化并濃縮后，用高效液相色譜-質(zhì)譜儀器進行檢測。選取443.5作為母離子，399與355作為子離子進行檢測。胡俠等[9]針對辣椒粉及辣椒油中的羅丹明染料創(chuàng)建了相應的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。樣品經(jīng)過正己烷或甲醇水溶液提取后，經(jīng)凈化小柱凈化，選取SB-C18色譜柱分離，用甲酸乙腈溶液和甲酸水溶液作為流動相進行梯度洗脫，回收率達到了85.0%以上。

4 薄層色譜檢測法

薄層色譜法主要包括固定相、流動相兩個部分，利用各組分對吸附劑的吸附能力不同進行分離、鑒定的一種技術。夏立婭等[10]使用乙醇氨溶液提取，采用高效硅膠G色譜板作為固定相，正丁醇∶無水乙醇∶1%氨水（6∶2∶2）作為流動相，在波長520 nm進行掃描，創(chuàng)建辣椒粉中羅丹明B的薄層色譜檢測技術。羅丹明B的最低檢出量可達到0.01μg。

5 毛細管電泳-電化學發(fā)光分離檢測法

與色譜、質(zhì)譜儀器價格昂貴且前處理較為復雜、分光光度計選擇性差相比，毛細管電泳-電化學發(fā)光分離檢測法更為快捷，方便，靈敏度高。毛細管電泳是一種以毛細管作為分離通道，用高壓直流電場驅(qū)動，根據(jù)樣品的多種特性來分離的液相微分離分析技術。而電化學發(fā)光是一種電能在電場的作用下在電極表面轉(zhuǎn)化為輻射能的化學發(fā)光方法[11]。屈忠凱等[12]創(chuàng)建了辣椒粉中羅丹明B的毛細管電泳-電化學發(fā)光分離檢測的方法。羅丹明B的檢測電壓為1.14 V，分離電壓是15 kV，在5 mmol·L-1濃度的Ru（bpy）32+溶液的條件下進行分離，這種方法具有進樣量少，選擇性高等優(yōu)點。

6 免疫檢測方法

免疫學檢測是近幾年發(fā)展起來的一種新的檢測技術。免疫學檢測通過免疫學原理，待測物進行特異性結合反應，從而測定樣品中待測物質(zhì)含量。與其他化學檢測方法相比，免疫檢測法具有靈敏度高、特異性強、敏感性強的優(yōu)點。

除常規(guī)的免疫分析檢測方法，如酶聯(lián)免疫吸附分析法、膠體金免疫分析法外;技術人員開始嘗試將免疫分析與理化儀器分析相結合，研究出新的檢測方法，其中最常見的是免疫分析與色譜類儀器相結合的檢測方法。

酶聯(lián)免疫吸附試驗（簡稱ELISA）是免疫分析方法中應用最廣的一種技術。其基本方法是選取聚苯乙烯微量反應板作為固相載體，然后將已知的抗原或抗體吸附在其表面，同時需保持抗原、抗體和酶的免疫學活性，酶標記過的抗原、抗體在固相表面進行反應，洗去液相中的游離成分。底物與酶反應生成有色產(chǎn)物，再通過酶標儀測定吸光度。通過吸光度的大小進行定性，定量分析。酶有催化作用，間接地放大了免疫反應的結果，使得測定方法具有較高的敏感度，大大提高了方法的靈敏度。王庭欣等[13]利用二醛法創(chuàng)建了羅丹明B的免疫分析方法，其方法是將羅丹明B的類似物羅丹明123（R123）與載體牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶聯(lián)制備免疫抗原R123-BSA和包被抗原R123-OVA。

膠體金免疫層析技術是免疫金標記技術和抗原抗體反應相結合的一種應用技術，它是通過NC膜的毛細作用使樣品中的待測物與NC膜上針對待測物的受體發(fā)生高特異性、高親和性的免疫反應的過程，結果直觀，短時間即可出現(xiàn)顯色反應[14]。劉春森[15]等創(chuàng)建了辣椒中羅丹明B的免疫層析法快速定量檢測方法，該方法填補了羅丹明缺少快速檢測方法的空缺。利用有包被有膠體金偶聯(lián)的羅丹明B抗體的微孔、噴涂有羅丹明B抗原檢測線和羊抗鼠二抗的質(zhì)控線和稀釋緩沖液組成的定量快檢卡，可對辣椒中的羅丹明B進行快速定量篩查。

免疫親和色譜（簡稱IAC）是以免疫反應原理為基礎，結合色譜理論，實現(xiàn)樣品組分分析的一種檢測方法。宋珊珊[16]使用混合酸酐法與BSA偶聯(lián)，用碳二亞胺法與OVA，通過免疫兔子制備出多克隆抗體，優(yōu)化條件，結合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（LC/MS）進行檢測，創(chuàng)建了羅丹明B的IAC-LC/MS檢測方法，回收率可達90%。

7 結語

近幾年，國內(nèi)外常有違法使用羅丹明B的事件發(fā)生。我國沒有制定羅丹明B的相關國家檢測標準，2010年國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布實施了行業(yè)標準SN/T 2430-2010 《進出口食品中羅丹明B的檢測方法》，該標準儀器檢測法，通過乙酸乙酯和環(huán)己烷溶劑提取試樣中的羅丹明B，再經(jīng)過凝膠色譜凈化系統(tǒng)進行凈化，最后用液相色譜-熒光檢測器或液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀進行測定，雖然準確性高，但是耗時較長，不適合大批量的篩選。因此，除了建立完善的法律法規(guī)外，盡快找到一種快速有效準確的檢測技術，制定相關國家標準至關重要。

參考文獻：

[1]郝利平，夏延斌，陳永泉，等.食品添加劑[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2002.

[2]陳艷美，于 淼.羅丹明B染色食品對人體的危害及檢測.科學之友.2011（18）：153，157.

[3]LarsenJC.Legal and illegal colours[J].Trends in Food Science & Technology，2008，19：S64-S69.

[4]李緒婷.基于微萃取技術的羅丹明B分光光度檢測新方法研究[D].衡陽：南華大學，2012.

[5]孫磊龍，楊志華.高效液相色譜測定食品中的羅丹明B.中國衛(wèi)生檢驗雜志.2011，21（7）：1648-1649.

[6]王傳現(xiàn)，韓 麗，方曉明.食品中羅丹明B的高效液相色譜熒光檢測[J].分析儀器，2008（1）：27-30.

[7]林長虹，胡書玉，黃達鍇，等.辣椒及其制品中羅丹明B的超高效液相色譜熒光檢測[J].廣東化工，2011，38（4）：140-141.

[8]程 慧，李 兵，占春瑞.臘腸中羅丹明B的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法[J].食品科學，2010，31（4）：223-225.

[9]胡 俠，肖 光，潘 緯，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定辣椒粉及辣椒油中的7種羅丹明染料[J].色譜，2010，28（6）：590-595.

[10]夏立婭，韓媛媛，匡林鶴，等.薄層色譜掃描法同時檢測豆制品中堿性橙、皂黃、檸檬黃和日落黃以及辣椒粉中酸性橙Ⅱ、麗春紅2R和羅丹明B[J].分析實驗室，2010，29（6）：15-18.

[11]高秀霞，徐春熒，袁柏青，等.毛細管電泳-電化學發(fā)光分離檢測技術在分析化學中的應用[J].長春理工大學學報（自然科學版），2009，32（4）：583-587.

[12]屈忠凱，鄧光輝，王士偉，等.毛細管電泳-電化學發(fā)光分離檢測辣椒粉中羅丹明B.食品科學，2015，36（4）：217-220.

[13]王庭欣，趙志磊，李小亭.羅丹明123人工抗原的合成及抗體的酶聯(lián)免疫檢測[J].食品科學，2010，31（2）：211-213.

[14]周麗巖.呂寶新.任勃儒，等.膠體金免疫層析技術在食品安全檢測中的應用研究[J].中國調(diào)味品，2015，40（2）：128-131.

[15]劉春森.羅 爽.王彥斐，等.免疫層析法快速定量檢測辣椒中羅丹明B[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2017（20）：56-57.

[16]宋珊珊.食品中羅丹明B的殘留免疫檢測方法的研究[D].無錫：江南大學，2011.