食品中脫氫乙酸的測定

暴會蕊 郭會芝

摘 要：目的：用液相色譜法對不同食品中脫氫乙酸的測定進(jìn)行驗證。方法：經(jīng)50 g·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)樣品pH提取脫氫乙酸，經(jīng)離心、過柱凈化、洗脫、過膜，用紫外檢測器測定樣品中的脫氫乙酸。結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)曲線有良好的線性關(guān)系（R2=1），最低檢出濃度為0.44 μg·mL-1，測定樣品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.65%～8.36%，加標(biāo)回收率為79.2%～111.2%。結(jié)論：該方法操作簡單，檢測靈敏度高，干擾少，結(jié)果準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：液相色譜法;蛋糕;橙汁飲料;脫氫乙酸

Abstract：Objective： To verify the determination of dehydroacetic acid in different foods by liquid chromatography. Methods： Dehydroacetic acid was extracted by adjusting the pH of the sample with 50 g·L-1 sodium hydroxide solution， purified by centrifugation， column， elution and membrane， and the dehydroacetic acid in the sample was determined by UV detector. Results： The standard curve had a good linear relationship （R2=1）， the lowest detection concentration was

0.44 μg·mL-1， the relative standard deviation of the samples was 2.65%～8.36%， and the recovery rate of spiked samples was 79.2%～111.2%. Conclusion： The method is simple， sensitive and accurate.

Key words：Liquid chromatography; Cake; Orange juice beverage; Dehydroacetic acid

中圖分類號：R155.5

脫氫乙酸是一種低毒高效的防腐劑，在酸、堿條件下均有一定的抗菌作用。尤其是對霉菌的抑制作用最強，是一種有效的消毒劑。自1940年發(fā)現(xiàn)其具有抗菌性，就被用作防腐劑，脫氫乙酸及其一些衍生物已用于食品、紡織、造紙、橡膠、塑料、檔案以及工藝美術(shù)品等工業(yè)品的防腐防霉。目前，脫氫乙酸測定方法主要是氣相色譜法、液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。本文選用液相色譜法對食品中的脫氫乙酸進(jìn)行測定。

1 材料及方法[1]

1.1 原理

用氫氧化鈉溶液提取試樣中的脫氫乙酸，經(jīng)脫脂，去蛋白處理，過膜，用Thermo U3000紫外檢測器測定，以色譜峰的保留時間定性，外標(biāo)法定量。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器

Thermo U3000配紫外檢測器，十萬分之一天平，粉碎機。

1.2.2 試劑

甲醇（色譜純）、0.02 mol·L-1乙酸銨溶液、50 g·L-1氫氧化鈉溶液、10%甲酸溶液、120 g·L-1硫酸鋅溶液、70%甲醇溶液、正己烷（色譜純）、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品（編號：21680，批號：171011，含量：99.90%）、脫氫乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品（編號：BW4067，批號：T160352，含量：99.40%）、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（編號：SB05-261-2011，批號：201902，含量：1 000 ?g·mL-1），所有標(biāo)準(zhǔn)品均在有效期內(nèi)。

1.3 色譜條件

色譜柱：依利特C18 4.6 mm×250 mm，5 μm;流動相：甲醇+0.02 mol L-1乙酸銨溶液（10+90，體積比）;流速：1.0 mL·min-1;柱溫：30 ℃;進(jìn)樣量：20 μL;檢測波長：293 nm。

1.4 樣品處理

1.4.1 蛋糕

用粉碎機將蛋糕粉碎，混勻。稱取試樣2 g（精確至0.001 g），置于25 mL離心管中，加入10 mL水、5 mL硫酸鋅溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。置于離心管中，超聲提取10 min，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，加入10 mL正己烷，振搖1 min，靜置分層，棄去正己烷層，加入10 mL正己烷重復(fù)進(jìn)行一次，取下層水相置于離心管中，4 000 r·min-1離心10 min，取上層清液過膜上機待測。

1.4.2 橙汁飲料

樣品混勻后，稱取試樣5 g（精確至0.001 g），置于50 mL離心管中，加入10 mL水，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。置于離心管中，4 000 r·min-1離心10 min。取20 mL上清液用10%的甲酸溶液調(diào)pH至5，定容至25 mL。取5 mL過已活化的C18固相萃取柱（500 mg，6 mL），用5 mL水淋洗，2 mL70%的甲醇溶液洗脫，收集洗脫液2 mL，渦旋混合，取上清液過膜上機待測。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品預(yù)處理

2.1.1 蛋糕

樣品在調(diào)pH至7.5時，因臨界點不好掌握，用20 g·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)pH時，因加入量在5～8 mL，加入量較大，后期混勻較難，故在國家標(biāo)準(zhǔn)方法基礎(chǔ)上相應(yīng)提高氫氧化鈉溶液的濃度，用50 g·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)pH時，加2.75～3.00 mL氫氧化鈉溶液將其pH值控制在6.8～8.2，其測定結(jié)果見表1。

2.1.2 橙汁飲料

因在處理前測得原樣pH值在4.6，樣品中脫氫乙酸含量為未檢出，故在加標(biāo)測定時，對調(diào)pH和不調(diào)pH做了相應(yīng)的比對，其比對結(jié)果見表2。

在處理過程中固相萃取柱必需保持濕潤狀態(tài)，通過反復(fù)實驗，在經(jīng)過固相萃取柱凈化后用2 mL洗脫液洗脫存在洗脫不完全現(xiàn)象，故對方法進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整，將洗脫液提高至5 mL，以確保洗脫完全。

2.2 線性范圍與最低檢出限

2.2.1 線性范圍

在本實驗室條件下，脫氫乙酸含量在0.4～200 μg·mL-1內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)含量（x）與峰面積（y）有良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)為1.000 0，回歸方程為y=0.521 5x+0.172 9，標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見圖1。

2.2.2 最低檢出限

取濃度0.08、0.20、0.40 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)樣品分別進(jìn)樣10次，定性分析確定臨界值如表3，定量限檢測數(shù)據(jù)見表4，最低檢出限：0.4+3S=0.44 μg·mL-1。

2.3 方法提取回收率實驗與精密度實驗[3]

樣品色譜圖見圖2、圖3，加標(biāo)樣品色譜圖見圖4、圖5。取2 g左右的蛋糕勻樣分別加入1.0 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)液0.075、0.300、1.500 mL，各測定6次，其平均回收率為84.8%～111.2%，RSD值在5.14%～7.39%，見表5;取5 g混勻后的橙汁飲料分別加入1.0 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)液0.025、0.200、1.00 mL，其平均回收率為79.2%～100.2%。各測定5次，RSD值在2.65%～8.36%，見表6。

3 結(jié)論

本實驗室對測定蛋糕和橙汁飲料中脫氫乙酸的測定法，方法線性范圍寬，基質(zhì)干擾少，靈敏度高，前處理簡單，準(zhǔn)確度高。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.GB 5009.121-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脫氫乙酸的測定[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.

[2]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB/T 27417-2017 合格評定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗證指南[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.

[3]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB/T 27404-2008 實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.