不同麻醉藥品對(duì)珍珠龍膽石斑魚的麻醉效應(yīng)研究

吳勇 嚴(yán)偉益 潘傳豪 莫洋 謝又興 施鋼

摘 要 為研究水產(chǎn)麻醉藥品對(duì)珍珠龍膽石斑魚的麻醉效應(yīng)，以苯唑卡因、丁香酚、MS-222為主麻醉藥品，以依托咪酯、2-苯氧乙醇為預(yù)麻醉藥品，對(duì)珍珠龍膽石斑魚在（20±0.5）℃、（25±0.5）℃水溫下進(jìn)行了麻醉實(shí)驗(yàn)，麻醉效果判定標(biāo)準(zhǔn)為同時(shí)滿足進(jìn)入深度麻醉（IS3）的引導(dǎo)時(shí)間300 s以內(nèi)并且完成恢復(fù)時(shí)間300 s。結(jié)果表明：在實(shí)驗(yàn)濃度下，單種和混合麻醉實(shí)驗(yàn)中，各組實(shí)驗(yàn)的珍珠龍膽石斑魚成活率均為100%;在單種麻醉實(shí)驗(yàn)中，推薦水溫25 ℃，苯佐卡因、丁香酚、MS-222均可作為麻醉劑，其推薦濃度分別為40 mg·L-1、20 mL·L-1、80 mL·L-1;混合麻醉組合中，推薦水溫25 ℃，依托咪酯、2-苯氧乙醇均可作為預(yù)麻醉劑，其推薦濃度為3 mg·L-1、0.4 mL·L-1，

主麻醉藥為苯佐卡因或者M(jìn)S-222，其推薦濃度為苯佐卡因40 mg·L-1或者60 mg·L-1，MS-222 80 mg·L-1。

關(guān)鍵詞 珍珠龍膽石斑魚;苯唑卡因;丁香酚;MS-222（間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽）;依托咪酯;2-苯氧乙醇;麻醉

中圖分類號(hào)：S965.334 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2020.20.072

龍虎斑為棕點(diǎn)石斑魚（E. fuscoguttatus♀）和鞍帶石斑魚（E. lanceolatus♂）的雜交品種，俗稱龍虎斑或珍珠斑，在臺(tái)灣、新加坡和馬來(lái)西亞被稱為珍珠龍膽或珍珠斑[1-3]。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)珍珠龍膽石斑魚的相關(guān)研究報(bào)道較多，如珍珠龍膽石斑魚營(yíng)養(yǎng)成分與品質(zhì)的研究[4]、溫度對(duì)于珍珠龍膽石斑魚呼吸與排泄的影響[5]、溫度和鹽度對(duì)龍虎斑存活和攝食的影響[6]、鹽度對(duì)龍虎斑的影響[7]等;Salim Farrakhan等[8]對(duì)珍珠龍膽的鹽度耐受性和滲透壓調(diào)節(jié)等進(jìn)行了研究。但是，關(guān)于麻醉劑對(duì)珍珠龍膽石斑魚的麻醉效應(yīng)研究尚無(wú)報(bào)道。

在魚類麻醉劑中，較為常用的為丁香酚（Eugenol，4-allyl-2-methyoxyphenol）、苯唑卡因（Benzocaine）、MS-222（Tricaine mesylate）、2-苯氧乙醇（2-phenoxyethanol）和依托咪酯（Etomidate）等。其中，丁香酚對(duì)魚類的麻醉研究目前已有丁香酚對(duì)于斑馬魚[9]、大黃魚[10]、鯔魚[11]多種魚類的麻醉作用研究。苯唑卡因與MS-222在挪威被批準(zhǔn)應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)[12-13]。MS-222，又名間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽，F(xiàn)DA批準(zhǔn)將MS-222作為魚用麻醉劑，用MS-222麻醉過(guò)的魚須在清水中飼養(yǎng)21 d后才能出售[14]。目前關(guān)于MS-222的研究有：任潔等[14]研究了MS-222對(duì)于活魚運(yùn)輸?shù)男Ч?，李偉業(yè)等[15]研究了MS-222對(duì)于東海帶魚幼魚麻醉效果。2-苯氧乙醇，又名乙二醇苯醚，目前關(guān)于2-苯氧乙醇應(yīng)用于魚類麻醉的研究有其對(duì)于扁吻魚幼魚[16]、尼羅羅非魚[17]、許氏平鲉幼魚[18]的麻醉作用等。依托咪酯為咪唑類衍生物，系催眠性靜脈麻醉藥，其麻醉特點(diǎn)為短效而且速效，對(duì)呼吸、循環(huán)影響很小，誘導(dǎo)與蘇醒均較快，相對(duì)安全[19]。目前，對(duì)于依托咪酯的相關(guān)報(bào)道較少，有胡紅專等[20]報(bào)道依托咪酯的藥理特點(diǎn)和臨床應(yīng)用，還有研究報(bào)道依托咪酯對(duì)斑馬魚的麻醉效果[21]。

為在捕捉等操作時(shí)降低魚體的應(yīng)激反應(yīng)和魚體的損傷，需對(duì)魚類進(jìn)行麻醉，此外，麻醉還可有效降低其呼吸頻率與耗氧量，提高運(yùn)輸密度與成活率[22]。基于此，研究丁香酚、苯唑卡因、MS-222、2-苯氧乙醇和依托咪酯這5種麻醉藥品對(duì)大規(guī)格珍珠龍膽石斑魚的單獨(dú)或組合麻醉效應(yīng)，以期為珍珠龍膽石斑魚捕撈作業(yè)、活魚運(yùn)輸?shù)忍峁┞樽砝碚搮⒖家罁?jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

珍珠龍膽石斑魚來(lái)自廣東海洋大學(xué)東海島海洋生物研究基地，實(shí)驗(yàn)選取了體長(zhǎng)（22.68±1.24）cm，體重（355.03±44.32）g珍珠龍膽石斑魚720尾來(lái)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)前3 d停止投喂。

丁香酚、苯唑卡因、2-苯氧乙醇、MS-222和依托咪酯由上海麥克林生化科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

實(shí)驗(yàn)用海水鹽度為30，pH為7.96～8.20，溫度17～23 ℃，水溫控制在20±0.5 ℃或25±0.5℃。

魚體麻醉狀態(tài)分析，參照Pawar的文獻(xiàn)[23]修改后的麻醉狀態(tài)判斷標(biāo)準(zhǔn)。

實(shí)驗(yàn)濃度梯度設(shè)置如表1和表2所示，單種麻醉藥物采用苯唑卡因、丁香酚和MS-222，混合麻醉藥物采用2-苯氧乙醇和依托咪酯為預(yù)麻醉劑，苯唑卡因、丁香酚和MS-222為麻醉藥品。除麻醉實(shí)驗(yàn)組外，另設(shè)對(duì)照組1組，加入等量水或無(wú)水乙醇，所有試驗(yàn)組和對(duì)照組合記錄20尾魚的IS3（深度麻醉）和RS3（恢復(fù)期）時(shí)間數(shù)據(jù)及存活率。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Microsoft Excel 2010和IBM SPSS 19.0 STATISTICS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，先做方差分析，再進(jìn)行多重比較[24-25]。

2 結(jié)果與分析

2.1 單種麻醉實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 成活率

1～12組的實(shí)驗(yàn)組所有麻醉和恢復(fù)成活率均為100%。

2.1.2 魚體進(jìn)入深度麻醉時(shí)間

表3數(shù)據(jù)表明，第4組（170.05 s）最快由正常進(jìn)入IS3，且與其他各組入麻時(shí)間差異顯著（p<0.05）;第9組（746.25 s）最遲由正常狀態(tài)進(jìn)入IS3，且入麻時(shí)間與其他各組差異顯著（p<0.05）。

2.1.3 魚體由深度麻醉進(jìn)入恢復(fù)期時(shí)長(zhǎng)

由表4得出，第5組（140.25 s）的魚最快由IS3進(jìn)入RS3，第4組（425.80 s）最遲由IS3進(jìn)入RS3，并且與其他各組差異顯著（p<0.05）。

綜合入麻時(shí)間和恢復(fù)時(shí)間，第2組、第8組、第12組比較適合用來(lái)麻醉此規(guī)格的珍珠龍膽石斑魚。單種麻醉實(shí)驗(yàn)中，推薦水溫25℃，苯佐卡因、丁香酚、MS-222均可作為麻醉劑，其推薦濃度分別為40 mg·L-1、

20 mL·L-1和80 mL·L-1。

2.2 混合麻醉實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 成活率

13～36組的實(shí)驗(yàn)組所有實(shí)驗(yàn)魚麻醉和恢復(fù)成活率均為100%。

2.2.2 魚體進(jìn)入深度麻醉（IS3）時(shí)長(zhǎng)

如表5所示，第36組的魚最快由正常狀態(tài)進(jìn)入IS3（223.85 s），其入麻時(shí)間與其他所有組差異均顯著

（p<0.05）;由正常狀態(tài)進(jìn)入IS3時(shí)間跨度最長(zhǎng)的是第21組，其平均入麻時(shí)間長(zhǎng)達(dá)581.20 s，其他所有各組之間差異均顯著（p<0.05）。入麻時(shí)間合適的混合麻醉組合為第16組、第18組、第20組、第28組、第32組和第36組。

2.2.3 魚體由深度麻醉狀態(tài)（IS3）進(jìn)入恢復(fù)期（RS3）時(shí)長(zhǎng)

如表6所示，第22組（105.45 s）的魚最快由IS3進(jìn)入RS3，其恢復(fù)時(shí)間與第13組、21組、25組恢復(fù)時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05），而與其他各組恢復(fù)時(shí)間差異極顯著（p<0.05）;第28組由IS3進(jìn)入RS3時(shí)間最長(zhǎng)，其恢復(fù)時(shí)間與其他組間兩兩比較差異均極顯著。單純考慮恢復(fù)時(shí)間，除了第20組、第28組恢復(fù)時(shí)間超過(guò)300 s，其他各組的恢復(fù)時(shí)間均在300 s以內(nèi)，均可以作為麻醉應(yīng)用中的麻醉組合。

綜合入麻時(shí)間和恢復(fù)時(shí)間，第16組、第18組、第32組和第36組比較適合用來(lái)麻醉此規(guī)格的珍珠龍膽石斑魚?；旌下樽斫M合中，推薦水溫25 ℃;依托咪酯、2-苯氧乙醇均可作為預(yù)麻醉劑，其預(yù)麻醉濃度分別為3.0 mg·L-1、0.4 mL·L-1;主麻醉藥品為苯佐卡因或MS-222，其麻醉濃度為苯佐卡因40 mg·L-1或者60 mg·L-1，MS-222 80 mg·L-1。

3 討論

3.1 麻醉藥品濃度對(duì)麻醉效應(yīng)的影響

麻醉劑作用機(jī)制為：先抑制了魚類的腦皮質(zhì)使其喪失觸覺(jué)，再作用在魚類的基底神經(jīng)節(jié)和小腦，使其興奮，最后作用在脊髓，過(guò)大劑量、過(guò)長(zhǎng)時(shí)間接觸可深及髓質(zhì)，使呼吸和血管舒縮中樞呈麻痹狀態(tài)，最終致死[19]。處于麻醉狀態(tài)之中的魚可通過(guò)自身的新陳代謝，解除麻醉狀態(tài)，從而進(jìn)入恢復(fù)期[26]。單種麻醉實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，丁香酚、苯佐卡因、MS-222三者的入麻時(shí)間都隨著麻醉濃度的升高而顯著加快，這與李靖等[27]的丁香酚對(duì)大西洋鮭的麻醉效果的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果一致;苯佐卡因和丁香酚的恢復(fù)時(shí)間隨著麻醉濃度的升高而顯著變慢，但是MS-222的兩種設(shè)計(jì)濃度下，恢復(fù)時(shí)間隨著麻醉濃度的升高，變化無(wú)統(tǒng)計(jì)差異。這可能是藥品的濃度不同或者M(jìn)S-222濃度設(shè)計(jì)的梯度差異較小導(dǎo)致的，不同麻醉藥物對(duì)珍珠龍膽石斑魚產(chǎn)生麻醉作用的生理過(guò)程不一樣，可能是受魚體內(nèi)部對(duì)藥品的吸收和代謝的影響。

3.2 溫度對(duì)單種麻醉實(shí)驗(yàn)麻醉效應(yīng)的影響

在單種麻醉實(shí)驗(yàn)中，苯佐卡因和MS-222的入麻時(shí)間都隨著溫度的升高而加快，丁香酚入麻時(shí)間僅在

20 mg·L-1隨著溫度的升高而變長(zhǎng)，且差異顯著（p<0.05）。這一結(jié)果與張麗等[28]關(guān)于MS-222對(duì)大黃魚的麻醉效果的研究結(jié)果部分相似：在16 ℃時(shí)，大黃魚的入麻所需時(shí)間是最長(zhǎng)且最穩(wěn)定的，隨著溫度改變，入麻時(shí)間遞減且趨于不穩(wěn)定。這可能是水溫不同，珍珠龍膽石斑魚生理狀態(tài)不一樣而導(dǎo)致的。

4 結(jié)論

麻醉實(shí)驗(yàn)中，各組實(shí)驗(yàn)的珍珠龍膽石斑魚成活率均為100%;無(wú)論是單種、混合麻醉實(shí)驗(yàn)，對(duì)于此規(guī)格珍珠龍膽石斑魚更合適的麻醉水溫均是25 ℃。單種麻醉實(shí)驗(yàn)中，苯佐卡因、丁香酚、MS-222均可作為麻醉劑;混合麻醉組合中，依托咪酯、2-苯氧乙醇均可作為預(yù)麻醉劑，主麻醉藥品為苯佐卡因或者M(jìn)S-222。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張海發(fā)，王云新，黃國(guó)光，等.雜交“虎龍斑”的培育方法：中國(guó)：CN101933476A[P].2010-08-09.

[2] 陳超，孔祥迪，李炎璐，等.棕點(diǎn)石斑魚（♀）×鞍帶石斑魚（♂）雜交子代胚胎及仔稚幼魚發(fā)育的跟蹤觀察[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展，2014，35（5）：135-144.

[3] 楊超，孫建明，徐哲，等.循環(huán)水高密度養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚效果研究[J].漁業(yè)現(xiàn)代化，2016，43（3）：18-22.

[4] 王際英，張德瑞，馬晶晶，等.珍珠龍膽石斑魚肌肉營(yíng)養(yǎng)成分分析與品質(zhì)評(píng)價(jià)[J].海洋湖沼通報(bào)，2015（4）：61-69.

[5] 仇登高，黃種持，鄭樂(lè)云，等.溫度對(duì)不同規(guī)格珍珠龍膽石斑魚（棕點(diǎn)石斑魚♀×鞍帶石斑魚♂）呼吸和排泄的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2017，24（2）：295-305.

[6] 梁華芳，黃東科，吳耀華，等.溫度和鹽度對(duì)龍虎斑存活與攝食的影響[J].廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，33（4）：22-26.

[7] 王成桂，梁華芳，黃東科，等.不同鹽度對(duì)龍虎斑生長(zhǎng)和攝食的影響[J].廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，34（4）：40-44.

[8] Salim F，Nastiti W，Agoes S.Survival and osmoregulation of juvenile of hybrid grouper （Epinephelus fuscoguttatus 3 Epinephelus lanceolatus） during acclimation in calcium-supplementedfreshwater[J].Aquaculture International，2017，25：693-704.

[9] 陳德芳，汪開毓，廖國(guó)平，等.丁香酚對(duì)斑馬魚麻醉效果的研究[J].水產(chǎn)科技情報(bào)，2013，40（4）：193-198.

[10] 趙艷麗，楊先樂(lè)，黃艷平，等.丁香酚對(duì)大黃魚麻醉效果的研究[J].水產(chǎn)科技情報(bào)，2002（4）：163-165.

[11] 周裕華，潘桂平，周文玉.丁香酚對(duì)鯔魚麻醉效果研究[J].水產(chǎn)科技情報(bào)，2016，43（6）：332-334.

[12] Iversen M，F(xiàn)instad B，Mckinley R S，et al.The efficacy of metomidate， clove oil， Aqui-S? and Benzoak?; as anaesthetics in Atlantic salmon （Salmo salar L.） smolts， and their potential stress-reducing capacity[J].Aquaculture，2003，221（1）：549-566.

[13] Gomes L C，Chipparigomes A R，Lopes N P，et al.Efficacy of benzocaine as an anesthetic in juvenile tambaqui Colossoma macropomum[J].Journal of the World Aquaculture Society，2010，32（4）：426-431.

[14] 任潔，黃永濤，黃二春，等.MS-222用于幾種活魚運(yùn)輸?shù)男Ч鸞J].淡水漁業(yè)，1998（1）：24-26.

[15] 李偉業(yè)，徐志進(jìn)，柳敏海，等.MS-222對(duì)東海帶魚幼魚的麻醉效果研究[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，33（5）：589-594.

[16] 韓軍軍，胡江偉，時(shí)春明，等.不同條件下2-苯氧乙醇對(duì)扁吻魚幼魚麻醉效果的研究[J].上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2019，28（2）：211-218.

[17] 王春，羅月媚，葛國(guó)昌.影響乙二醇苯醚對(duì)尼羅羅非魚麻醉作用的因子[J].水利漁業(yè)，1996（5）：27-30.

[18] 關(guān)健，官曙光，鄭永允，等.2-苯氧乙醇和丁香酚對(duì)許氏平鲉幼魚麻醉效果的實(shí)驗(yàn)研究[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展，2010，31（6）：22-28.

[19] Chen Li Y，Liang X Y，Tan X M，et al.Safety and efficacy of combined use of propofol and etomidate for sedation during gastroscopy： Systematic review and meta-analysis[J].Medicine，2019，98（20）：e15712.

[20] 胡紅專，秦榜勇.依托咪酯的藥理特點(diǎn)及臨床應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)綜述，2013，19（8）：1467-1469.

[21] 杜文杰，杜久林，喻田.斑馬魚依托咪酯麻醉模型的建立[J].生理學(xué)報(bào)，2016，68（3）：301-305.

[22] 陳守義.魚類麻醉劑在活魚運(yùn)輸中的應(yīng)用[J].水產(chǎn)科學(xué)，1992（10）：21-23.

[23] Pawar H B，Sanaye S V，Sreepada R A，et al.Comparative efficacy of four anaesthetic agents in the yellow seahorse， Hippocampus kuda （Bleeker， 1852）[J].Aquaculture，2011，311（1-4）：155-161.

[24] 許衛(wèi)華，溫澤淮，王奇.重復(fù)測(cè)量資料的單獨(dú)效應(yīng)分析及多重比較[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，34（5）：766-770.

[25] 丁雪梅，陳承禎，孫博興，等.不同實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式滿意度分析中統(tǒng)計(jì)方法的選擇及在SPSS19.0軟件上的實(shí)現(xiàn)[J].實(shí)驗(yàn)室研究與探索，2018，37（11）：198-203.

[26] 何莉.魚類麻醉運(yùn)輸?shù)默F(xiàn)狀及發(fā)展前景[J].水利漁業(yè)，1999，19（3）：48-49.

[27] 李靖，劉寶良，王順奎，等.丁香酚對(duì)大西洋鮭麻醉效果的實(shí)驗(yàn)研究[J].海洋科學(xué)進(jìn)展，2015，33（1）：92-99.

[28] 張麗，汪之和.MS-222對(duì)大黃魚成魚麻醉效果的研究[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（18）：38-40.

（責(zé)任編輯：劉昀）