大鯢細(xì)菌性疾病研究進(jìn)展

張晗 鄧捷 趙虎 孔飛 馬紅英 姜維 張紅星 王啟軍

摘 要：為深入了解和治療大鯢（Andrias davidianus）細(xì)菌性疾病，針對已知的大鯢細(xì)菌性疾病的致病病原菌、發(fā)病的臨床特征及診斷防治措施進(jìn)行了簡單概述，并提出了相應(yīng)研究展望。

關(guān)鍵詞：中國大鯢（Andrias davidianus）;細(xì)菌性疾病;防治

中國大鯢（Andrias davidianus），俗稱娃娃魚，隸屬兩棲綱（Amphibia）、有尾目（Caudata）、隱鰓鯢科（Cryptobranchidae），因其具有較高的食用和藥用價值，近年來成為陜西、湖北等省份農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化和特色農(nóng)業(yè)重點開發(fā)動物品種[1-2]。隨著大鯢人工養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴展，細(xì)菌性疾病，例如：腹脹病、敗血病等，嚴(yán)重威脅養(yǎng)殖個體的健康，甚至引起養(yǎng)殖群體的大量死亡，造成養(yǎng)殖企業(yè)虧損，已成為大鯢養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要制約因素。本文從致病菌的分類及主要特征、大鯢發(fā)病的臨床特征及其診斷防治措施幾個方面對大鯢細(xì)菌性疾病的現(xiàn)狀進(jìn)行了概述，并提出了相應(yīng)研究展望，以期為大鯢產(chǎn)業(yè)發(fā)展和相關(guān)領(lǐng)域研究提供基本資料和參考[3-5]。

1 致病細(xì)菌分類及主要特征

引起大鯢細(xì)菌性疾病的致病菌主要包括8個屬的13種細(xì)菌，具體分類及主要特征見表1。其中，在氣單胞菌屬（Aeromonas）中，溫和氣單胞菌（Aeromonas sobria）與嗜水氣單胞菌（A. hydrophila）的區(qū)別要點在于前者生化特性方面對七葉苷和水楊苷的分解不明顯;豚鼠氣單胞菌（A. caviae）與同屬上述兩種菌最重要的區(qū)別在于生化特性方面的發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。假單胞菌屬（Pseudomonas）的惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida）和熒光假單胞菌（P. fluorescens）多個特征較為相似，區(qū)別要點為前者不液化明膠、不產(chǎn)生卵磷脂酶，陳舊培養(yǎng)物上有腥臭味。柱狀黃桿菌（Flavobacterium columnaris）之前歸屬于屈撓桿菌屬（Flexibacter），名柱狀屈撓桿菌（Flexibacter columnaris）。除此之外，屈撓桿菌屬部分細(xì)菌會引起大鯢患爛嘴病或爛尾病，布魯氏桿菌屬（Brucella）某些細(xì)菌會使大鯢患腹脹病[6]。

2 細(xì)菌性疾病分類

2.1 腹脹病

又稱腹水病，是大鯢規(guī)?；B(yǎng)殖中的主要疾病之一?；疾■F食欲不振，行動呆滯，偶見嗆水狀。全身較柔軟，頭部、腹部腫脹，嚴(yán)重時腹部上翻，眼球突出。解剖可見腹腔有呈淡黃色的積水，肝腫大，腸、肝、胃有出血點，并伴有不同程度的潰爛。體表無潰爛，疣點凸出，部分個體死亡時體表分泌大量黏液[7-8]。引起大鯢腹水病的病原菌主要有6種，包括嗜水氣單胞菌、溫和氣單胞菌、熒光假單胞菌、布魯氏桿菌、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）、腐敗希瓦氏菌（Shewanella putrefaciens）[9-11]。陶凱等在患病鯢中分離得到的腐敗希瓦氏菌、熒光假單胞菌、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌、布魯氏桿菌四株菌，其均會引起大鯢肝臟、心臟病變，其中后三者還會致使脾臟發(fā)生病變，進(jìn)而導(dǎo)致脾臟淋巴細(xì)胞增生[11]。趙澤民在多尾患病鯢體內(nèi)分離到的幾株病原菌也均使大鯢肝臟、心臟、脾臟發(fā)生不同程度病變[12]。

2.2 腐皮病

又稱皮膚潰爛病或爛肢病，患病率高，危害性大?；疾■F體表黏液脫落，出現(xiàn)白色小點或白色斑塊狀，嚴(yán)重者進(jìn)一步腐爛至可見帶紅色肌肉，四肢最為嚴(yán)重。頭、尾、口腔處均有出血。解剖可見肝臟腫脹，腸胃充血，心臟失血，肺和肝臟均呈紫紅色。氣單胞菌屬的嗜水氣單胞菌、溫和氣單胞菌、維氏氣單胞菌（A. veronii）、點狀氣單胞菌（A. punctata）、殺鮭氣單胞菌（A. salmonicida）均能引起大鯢患該病[8，13-15]。

2.3 赤皮病

患病鯢全身紅腫、膨脹，體表有大面積不規(guī)則紅斑，紅斑區(qū)域可見淺黃色圓形小顆粒或小顆粒破裂引起的潰爛病灶。解剖可見腹水增多，肝臟腫大，有出血點，腸糜爛。該病廣泛流行，熒光假單胞菌為其致病菌，主要通過體表創(chuàng)傷處入侵[16]。

2.4 敗血病

患病鯢皮膚潰爛，尤以四肢和腹側(cè)最為突出?？谇火つ浬⑿猿鲅?。解剖可見肝臟腫脹有出血點;肺臟出血，呈紫紅色;腸道出血、糜爛。敗血病的致病菌主要包括遲鈍愛德華菌（Edwardsiella tarda）、熒光假單胞菌、嗜水氣單胞菌、弗氏檸檬酸桿菌（Citrobacter freundii）、柱狀黃桿菌[16-19]。余波等人工回歸感染試驗表明嗜水氣單胞菌產(chǎn)生β—溶血環(huán)，致死率較弗氏檸檬酸桿菌和柱狀黃桿菌更高[18]。王高學(xué)等指出熒光假單胞菌一方面可通過體表創(chuàng)傷感染使大鯢體表產(chǎn)生潰瘍性紅斑，嚴(yán)重者發(fā)展成敗血病，另一方面，其可產(chǎn)生內(nèi)毒素?fù)p傷組織細(xì)胞，此為敗血病根源[16]。

2.5 腸炎病

患病鯢體表黏液增多，皮膚無光澤，食欲減退，偶見吐食?；蚩裨昙?、四周亂撞，或萎靡不振、行動遲緩。糞便不成形，嚴(yán)重者呈黏液膿血便，泄殖孔呈紅色，稍摁腹部有血水流出。解剖可見腸道充血、糜爛。該病的病原菌主要為腸型點狀氣單胞菌（Aeromonas punctata f. intestinalis），孫翰昌等在患腸炎病大鯢的腸道、肝臟和腹水中均分離出了該種致病菌[20]。

2.6 疥瘡病

該病大鯢幼體、成體均可感染，無明顯流行季節(jié)，不易流行?；疾■F體背部皮膚及肌肉組織發(fā)炎，形似膿瘡。嚴(yán)重者肌肉組織滲出體液，繼而壞死、形成潰瘍。解剖可見腸道充血發(fā)炎[21]。該病的病原菌為疥瘡型點狀氣單胞菌（Aeromonas punctata f. furunculus）[22]。

2.7 打印病

又稱紅梅斑病?；疾■F體表有豆粒狀紅斑，嚴(yán)重者紅斑處表皮腐爛，發(fā)病部位主要集中在背部、尾部，少數(shù)在軀干和四肢。解剖未見肝臟、心臟、胃、腸、肺等部位病變。該病的致病菌主要為遲鈍愛德華菌和屈撓桿菌屬（Flexibacter）部分細(xì)菌[8]。有報道稱點狀氣單胞菌點狀亞種（Aeromonas punctata sub. punctata）也是該病致病菌[23]。

2.8 爛嘴病

又稱口腔潰爛病，患病鯢主要為成鯢和幼鯢，死亡率高。癥狀表現(xiàn)為口腔潰爛，或唇腫大、滲血、潰爛，嚴(yán)重時露出上、下頜骨;或唇外觀正常，口腔內(nèi)上腭組織形成大塊蝕斑，出血嚴(yán)重。長期不進(jìn)食，體質(zhì)變差，易引發(fā)感染進(jìn)而死亡。該病主要由屈撓桿菌屬的細(xì)菌引起，其中，有研究指出柱狀黃桿菌多與嗜水氣單胞菌、檸檬酸桿菌及大鯢虹彩病毒（Andrias davidianus iridovirus，ADIV）混合感染[24-25]。

2.9 爛尾病

患病鯢尾部皮膚充血、發(fā)炎、糜爛，分泌白色臭味黏液，周圍皮膚呈現(xiàn)白色。嚴(yán)重者尾部肌肉壞死、腐爛，骨骼外露，有淡黃色或暗紅色液體滲出。該病致病菌主要為嗜水氣單胞菌、屈撓桿菌屬細(xì)菌及熒光假單胞菌[11，26]。

2.10 爛腳病

患病鯢肢體紅腫、末端有內(nèi)凹病灶、腳底發(fā)炎潰爛，皮膚壞死呈灰白色，肌肉出血，嚴(yán)重者斷肢。解剖可見肝臟腫大充血，胃、腸有點狀充血。該病病原菌主要為嗜水氣單胞菌[8]。

2.11 水腫病

患病鯢頭部、眼瞼、腹部、后肢腫大，解剖可見水腫部位有淡黃色或透明液體流出，胃、大腸明顯水腫，腹腔和胸腔有積液。該病主要由致病性大腸桿菌（Escherichia coli）毒素引起體內(nèi)組織水腫進(jìn)而損傷中樞神經(jīng)，死亡率極高[8]。

3 細(xì)菌性疾病的診斷及防治

3.1 細(xì)菌性疾病的主要診斷方法

大鯢細(xì)菌性疾病種類多，有些臨床癥狀較相似，并且容易引起繼發(fā)性感染和混合感染。所以除觀察患病鯢癥狀及病理變化之外，可采用實驗診斷以進(jìn)一步確認(rèn)病原細(xì)菌種類?，F(xiàn)階段實驗診斷的方法主要包括：（1）利用微生物生理生化檢測技術(shù)，包括反復(fù)增菌、菌落分離、多種生理生化指標(biāo)鑒定等，結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)確，并且可以獲得該種致病菌，供后續(xù)研究使用，缺點在于繁瑣重復(fù)、費時費力。（2）ELISA技術(shù)，該技術(shù)屬于免疫學(xué)檢測范疇，依據(jù)抗原、抗體特異性結(jié)合的原理檢測出致病菌，特異性好，靈敏度高。（3） PCR技術(shù)，即在體外進(jìn)行特定DNA片段的復(fù)制，操作簡單、特異性好、靈敏度高。（4）芯片技術(shù)，具有大規(guī)模、高通量的特點，可在極短時間內(nèi)用極少量的樣品獲得大量信息，通過一步檢測即可確定待檢樣品中致病細(xì)菌的種、屬、亞型、毒性、致病性及耐藥性等[27-28]。

3.2 細(xì)菌性疾病的預(yù)防措施

3.2.1 環(huán)境 大鯢生殖環(huán)境確保陰涼無風(fēng)，水質(zhì)干凈，水溫10～25 ℃，溶氧量3 mg/L及以上，pH 6.8～8.8[29-30]。采用微流水養(yǎng)殖或靜水養(yǎng)殖，靜水養(yǎng)殖需勤換水，定期監(jiān)測水體各項指標(biāo);定期消毒滅菌，清除潛在病原，可采用20 mg/L的高錳酸鉀浸泡全池，確保養(yǎng)殖池潔凈安全。與此同時也可將大鯢用10 mg/L的高錳酸鉀浸洗15～20 min，增強大鯢自身抵抗力[7-8]。

3.2.2 餌料 餌料來源應(yīng)確保安全，健康無病害，新鮮投喂，投喂前可采用5%食鹽浸泡30 min進(jìn)行消毒滅菌，殘餌必須及時清除。餌料投喂要確保定時、定量、定位、定質(zhì)，并根據(jù)季節(jié)、年齡、水溫、攝食狀況等因素靈活調(diào)整。另可在餌料中添加藥物以增強組織器官抗菌功能，提高機體免疫能力[31-32]。

3.2.3 日常管理 清楚苗種來源，確保苗種不攜帶病原，在捕撈、運輸、放養(yǎng)過程中避免苗種受傷。建立戶籍檔案和日常生產(chǎn)管理日志，及時掌握大鯢健康狀況。成鯢養(yǎng)殖階段，大鯢代謝旺盛，體重增長迅速，養(yǎng)殖密度相對增大，發(fā)病幾率增加，所以需合理控制養(yǎng)殖密度。養(yǎng)殖過程應(yīng)遵守“三巡”（上午、下午、晚上巡池）、“三看”（看大鯢、看餌料、看糞便）、“三動手”（動手呵護(hù)大鯢、動手處理餌料、動手打掃養(yǎng)殖池），注重預(yù)防為主，綜合防治[33]。

3.3 細(xì)菌性疾病的治療手段

3.3.1 傳統(tǒng)抗生素 患病鯢若能正常進(jìn)食，則將藥物注入餌料中或直接投喂藥物即可;若不能正常進(jìn)食，則需采取浸浴、注射、涂抹或遍灑等方法。藥敏試驗表明，嗜水氣單胞菌對氟苯尼考、鏈霉素、環(huán)丙沙星、氟潔霉素和丁胺卡那霉素最敏感，對新霉素次之，對四環(huán)素、強力霉素、青霉素、頭孢菌素、磺胺異嚼唑、氟哌酸不敏感[34-35]。惡臭假單胞菌對舒普深、諾氟沙星、呋喃妥因等敏感[36]。熒光假單胞菌對鏈霉素、氯霉素、氟哌酸、慶大霉素高度敏感[16]。弗氏檸檬酸桿菌對頭抱呱酮、氨曲南、先鋒噻肟和頭孢三嗪等敏感，對左氧氟沙星、青霉素和美滿霉素等次之[37]。柱狀黃桿菌對頭孢噻吩、頭孢拉定高度敏感[25]。恩諾沙星、諾氟沙星對魚類赤皮病、敗血病、爛鰓病、打印病、腸炎病等病原菌均有較好的抑菌效果[38-39]。由于某些不同來源的同種細(xì)菌對抗生素的敏感程度有一定的一致性和差異性，或部分細(xì)菌經(jīng)多年進(jìn)化對某種抗生素的敏感程度已明顯大大降低，因此需針對性地采用相應(yīng)高敏藥物對細(xì)菌性疾病加以防治，同時注意避免濫用抗生素引起的病原菌耐藥性問題，合理選藥，選藥前可進(jìn)行相應(yīng)藥敏試驗，以達(dá)到最佳效果[40-41]。目前，大鯢細(xì)菌性疾病的普遍治療方法總結(jié)如下。

腹脹病，該病爆發(fā)性不強，較為常見，起因主要為水質(zhì)污染和食物不干凈，發(fā)病初期癥狀不明顯，如若及時發(fā)現(xiàn)，易治療。中后期癥狀明顯，此時可采用（1）肌肉注射硫酸慶大霉素，劑量為5 000～10 000 IU/kg，每天一次，連續(xù)3～7 d;（2）能攝食者按計量混合服用多維150 mg/kg和恩諾沙星100 mg/kg，每天一次，連續(xù)5 d;（3）若為靜水養(yǎng)殖，每日加換水1～2次。

腐皮病的治療可采取：（1）肌肉注射硫酸慶大霉素注射液（80 mg/支），一日一次0.3 mL，連續(xù)注射5 d，對潰瘍面大的，涂抹慶大霉素原粉;（2）用1片二氧化氯泡騰片劑加5升水藥浴5～6 min，連續(xù)藥浴5 d;（3）金霉素軟膏涂抹大鯢體表潰爛處，每天一次，連續(xù)5 d，病鯢潰爛部位逐漸恢復(fù)，白斑消失，食欲恢復(fù)，治愈率100%[15]。