奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

李明

（山東省臨朐縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 262600）

子宮內(nèi)膜炎是奶牛場常見疾病，多由病原菌感染引起。當(dāng)出現(xiàn)子宮內(nèi)膜炎后，其繁殖能力會受到很大影響，從而影響奶牛的產(chǎn)乳能力[1]，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來重大損失。想要更好的治療奶牛子宮內(nèi)膜炎，需要了解子宮內(nèi)膜炎發(fā)病原因，因此，本文主要通過奶牛子宮內(nèi)膜炎的病原菌分離鑒定和藥敏試驗(yàn)來探究奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病原因，以期更好地為奶牛子宮內(nèi)膜炎的防控治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)對象

試驗(yàn)選擇某標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)模奶牛養(yǎng)殖場27 頭經(jīng)臨床診斷患有子宮內(nèi)膜炎的奶牛進(jìn)行觀察試驗(yàn)，患牛沒有經(jīng)過治療，且經(jīng)診斷后不存在其他傷病。產(chǎn)后3 個(gè)月內(nèi)屢配不孕，且出現(xiàn)子宮角粗大、子宮分泌物增多、陰道排出大量黃色或白色膿汁等現(xiàn)象。直腸檢查時(shí)可以明顯感覺到患牛出現(xiàn)子宮頸口開張的情況，所有患牛均進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)管理。

1.2 病料采集

首先，掏便處理。選定患牛后通過直腸檢查的方式將患牛體內(nèi)殘余的糞便掏出，并徹底清洗患牛外陰部，清洗液選擇0.1%的新潔爾滅溶液。其次，分泌物提取。完成外陰部清洗后，選擇滅菌輸精管送入到患牛的子宮頸當(dāng)中，操作方式與人工授精術(shù)操作相同，通過滅菌輸精管來有效提取患牛子宮內(nèi)的分泌物，提取量控制在3ml 左右即可。完成分泌物提取后，將其裝入實(shí)驗(yàn)室滅菌離心試管中，做好密封和編號，并在離心管上貼上相應(yīng)標(biāo)簽，及時(shí)進(jìn)行冷藏保存，冷藏溫度控制在4℃為宜。最后，涂片制作。從離心管中將患牛的子宮分泌物逐一滴在載玻片上，每個(gè)載玻片滴1～2 滴既可，隨后做好固定和染色，在顯微鏡上進(jìn)行觀察，了解病原菌的形態(tài)，并且將革蘭氏陽性、陰性菌的比例記錄下來。

1.3 病原菌分離鑒定

事先準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)用的肉湯培養(yǎng)液，然后將患牛子宮分泌物逐一接種到培養(yǎng)液中，溫度調(diào)節(jié)至37℃進(jìn)行增菌培養(yǎng)。完成增菌培養(yǎng)后，將營養(yǎng)液通過劃線接種的形式接種到37℃的瓊脂平板上，并且在瓊脂平板上培養(yǎng)24h。將單個(gè)菌落挑取，制作成涂片，并且做好革蘭氏染色，再進(jìn)行顯微鏡檢查。根據(jù)菌落的特征進(jìn)行分離培養(yǎng)，其中疑是桿菌的菌落可以在康凱培養(yǎng)基上培養(yǎng)，并且根據(jù)病原菌的染色特征、菌體形態(tài)、菌落形態(tài)等進(jìn)行分離，最后進(jìn)行純培養(yǎng)，培養(yǎng)基選擇鮮血瓊脂斜面，在逐個(gè)分離后進(jìn)行生化檢驗(yàn)。最后參照相關(guān)鑒定手冊和方法，結(jié)合生化反應(yīng)結(jié)果、鏡檢結(jié)果、革蘭氏染色結(jié)果、菌落形態(tài)等做好病原菌分離鑒定。

1.4 藥敏試驗(yàn)

將已經(jīng)做好分離純化的病原菌菌株分別接種到提前準(zhǔn)備好的營養(yǎng)肉湯中，于37℃的溫度下培養(yǎng)24h，取 0.2ml 培養(yǎng)物，將其涂抹在瓊脂平板上，待充分干燥后，于每個(gè)瓊脂平板放置6 片藥敏紙片進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，有效測定病原菌對藥物的敏感性。

2 結(jié)果

2.1 病原菌分離鑒定結(jié)果

本次研究選擇的27 頭子宮內(nèi)膜炎患牛子宮分泌物中病原菌共發(fā)現(xiàn)6 種，分別為金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、表皮葡萄球菌、鏈球菌、沙門氏菌、蠟狀芽孢桿菌，其中混合感染占比40.74%，單一感染占比59.26%，具體見表1。

表1 患牛病原菌感染情況

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

蠟狀芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌均對阿莫西林、環(huán)丙沙星、氨芐西林高敏感，大腸桿菌對阿莫西林高敏感，3 種病原菌對林可霉素、新生霉素均低敏感，具體見表2。

3 討論

奶牛子宮內(nèi)膜炎是一種病因復(fù)雜的疾病，該疾病主要由于細(xì)菌感染所致，但其他包括產(chǎn)道損傷、子宮積膿、子宮炎、產(chǎn)后處理不當(dāng)?shù)染鶗T發(fā)子宮內(nèi)膜炎[2]。如不及時(shí)治療會給養(yǎng)殖戶帶來較大的損失。想要更好的治療疾病，必須先了解疾病感染病原菌，該疾病感染的病原菌種類多種多樣，通過常規(guī)方式很難準(zhǔn)確判定[3]。因此，臨床上將病原菌分離鑒定和藥敏性引入其中，通過分別培養(yǎng)的方式能有效找出病原菌，同時(shí)藥敏性試驗(yàn)還能更好的探究病原菌的藥物敏感性，從而選擇更多科學(xué)有效的藥物，保證治療效果[4]。

表2 藥敏性試驗(yàn)結(jié)果分析

本次試驗(yàn)選擇27 頭感染子宮內(nèi)膜炎的奶牛進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，蠟狀芽孢桿菌、大腸桿菌、鏈球菌、沙門氏菌、表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌等奶牛子宮內(nèi)膜炎常見病原菌，且單一感染的概率更高，其中蠟狀芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌均對阿莫西林、環(huán)丙沙星、氨芐西林高敏感，大腸桿菌對阿莫西林高敏感，3 種病原菌對林可霉素、新生霉素均低敏感。該研究結(jié)果與龔團(tuán)蓮[5]在相關(guān)研究中結(jié)果相似。另外，由于臨床條件所限，本試驗(yàn)未進(jìn)行細(xì)菌的厭氧培養(yǎng)，故針對厭氧菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)無法進(jìn)行論述。

綜上所述，做好奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌分離鑒定和藥敏性實(shí)驗(yàn)?zāi)転槟膛Ｗ訉m內(nèi)膜炎的治療提供更多依據(jù)，臨床價(jià)值較高。