HPLC測定養(yǎng)血當(dāng)歸軟膠囊中阿魏酸的含量

馬紀(jì)偉 劉 玉 李樂萍

(1.南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 南陽 473058；2.南陽第一高級中學(xué)，河南 南陽 473000)

養(yǎng)血當(dāng)歸軟膠囊由當(dāng)歸、川芎、白芍、熟地黃、黨參、黃芪等8味中藥組成，具有補(bǔ)氣血，調(diào)經(jīng)的功效。臨床上用于貧血虛弱，產(chǎn)后體虛，萎黃肌瘦，月經(jīng)不調(diào)，行經(jīng)腹痛，產(chǎn)后血虛[1]。本品為軟膠囊，所含輔料成分復(fù)雜，干擾大，給含量測定帶來困難，為控制制劑的質(zhì)量，我們經(jīng)實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法測定制劑中有效成分阿魏酸的含量，方法靈敏、準(zhǔn)確、簡便。

1 儀器、試劑和藥品

日本島津LC-10AD高效液相色譜儀；島津SPD-10A紫外檢測器；Agilent 1100自動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent 1100色譜工作站。阿魏酸對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號1883—9716)；養(yǎng)血當(dāng)歸軟膠囊(江西三九藥業(yè)有限公司，批號：180621，180622，180623)。甲醇(北京化學(xué)試劑公司)、乙腈(美國Fisher公司)均為色譜純；其余試劑為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱用Diamonsil Cl8柱(150 mm × 4.6 mm，5μm)；流動(dòng)相為甲醇一乙腈一0.1% 磷酸溶液(10：10：89)；檢測波長317nm；柱溫30℃；流速1mL·min-1，理論塔板數(shù)按阿魏酸計(jì)算，應(yīng)不得低于4 000。

2.2 供試液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物約1.0g，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加70%甲醇20 ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失重量，濾過，即得供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密取阿魏酸對照品適量，精密稱定.置棕色量瓶中，加70% 甲醇溶解并稀釋至刻度，制成濃度為0.1mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取缺當(dāng)歸、川芎的樣品軟膠囊內(nèi)容物1.0g，精密稱定，同供試品溶液方法制備，制得陰性對照溶液。

2.2.4 空白試驗(yàn) 按照上述條件色譜，精密吸取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液。分別注入測定色譜儀，結(jié)果見圖1— 3。結(jié)果陰性對照溶液在與阿魏酸對照品相同保留時(shí)間處未顯色譜峰，故認(rèn)為無干擾。

圖1 阿魏酸對照品HPLC色譜圖

圖2 供試品HPLC色譜圖

圖3 陰性對照溶液HPLC色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取2.2.2項(xiàng)下對照品溶液2.0mL置50mL量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，濃度為10.06μg·mL-1，搖勻，并從中精密吸取1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，以阿魏酸對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算線性回歸方程為Y=104719.69X+3852，r=0.9998，結(jié)果表明阿魏酸在0.03～0.527μg。范圍內(nèi)與色譜峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

在相同的色譜條件下，精密吸取樣品溶液(180621)10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測定其峰面積，測定阿魏酸峰面積積分值，RSD=0.89%。結(jié)果表明本方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取置棕色量瓶中的樣品供試液(批號180621)，每隔2h進(jìn)樣10μL，連續(xù)測定12h，結(jié)果RSD為0.96% 。表明供試品液在避光條件下12h穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取軟膠囊(批號：180622)6份，精密稱定，按樣品溶液制備項(xiàng)下操作，制成供試品溶液，在上述色譜條件分別進(jìn)樣測定，結(jié)果阿魏酸平均含量為0.04571μg/粒，RSD為0.96%(n=6)。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法。取已測得含量的軟膠囊(批號180623)6份，每份約0.6 g，精密稱定，分別加入已知濃度為0.0351 mg·mL-1的阿魏酸對照品溶液1.0mL按“2.2.1”項(xiàng)下供試品制備方法進(jìn)行制備，在含量測定方法下進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率

2.8 樣品的測定

制備3批樣品的供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液10μL進(jìn)樣，用外標(biāo)法測定阿魏酸的含量(n=3)，測定結(jié)果見表2。

表2 樣品的測定

3 討論

根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)告，阿魏酸在313nm處有最大吸收[2]。經(jīng)試驗(yàn)，從阿魏酸對照品的紫外吸收光譜可見在317nm處有最大吸收。

實(shí)驗(yàn)采用甲醇一水一冰醋酸系統(tǒng)作為流動(dòng)相不能達(dá)到基線分離[2]，以甲醇一乙腈一0.1% 磷酸溶液(10：10：89)為流動(dòng)相，得到分離效果較好。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本文測定方法簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可有效地控制該制劑的質(zhì)量。