不同型重度子癇前期患者胎盤組織STAU1、PLGF表達(dá)與妊娠結(jié)局

鄒 強(qiáng) 張其華 李 璃

1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬腦科醫(yī)院(210008)； 2.南京醫(yī)科大學(xué)附屬附屬兒童醫(yī)院；3.南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京市婦幼保健院

子癇前期(PE)是妊娠期常見并發(fā)癥[1]。隨病情發(fā)展可演變成重度子癇前期(SPE),全球孕婦子癇前期發(fā)病率為2%～8%,而死亡孕產(chǎn)婦中17%～24%是由SPE所致[2]。根據(jù)發(fā)病時(shí)間分為早發(fā)型(ESPE)和晚發(fā)型重度子癇前期(LSPE)[3]。研究認(rèn)為[4],ESPE和LSPE發(fā)病機(jī)制不同,且ESPE具有發(fā)病隱匿性、病情進(jìn)展迅速性等特點(diǎn),對(duì)母嬰危害遠(yuǎn)大于LSPE。因此尋找預(yù)測(cè)ESPE、LSPE發(fā)病的生化指標(biāo)有重要臨床意義。有研究認(rèn)為ESPE可能與胎盤組織中某些蛋白異常表達(dá)相關(guān)。Staufen1蛋白(STAU1)在機(jī)體各組織中均有表達(dá),參與細(xì)胞發(fā)育、分化、凋亡等過程[5]?？紤]到此過程與胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞具有相似生物學(xué)行為,我們推斷STAU1可能在胎盤組織中起到一定作用。胎盤生長(zhǎng)因子(PLGF)在胎兒血管生成中發(fā)揮重要作用[6]。鑒于STAU1與PLGF在胎盤組織中可能存在的生物學(xué)行為特性,本研究分析了孕婦胎盤組織中二者表達(dá)水平與ESPE、LSPE發(fā)病關(guān)系,探討其與妊娠結(jié)局關(guān)系,以期為臨床預(yù)防和監(jiān)測(cè)SPE病情進(jìn)展提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017年1月—2019年10月于本院分娩的SPE孕婦86例,其中ESP43例(ESPE組),LSPE43例(LSPE)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①SPE孕婦均符合樂杰主編《婦產(chǎn)科學(xué)》中診斷標(biāo)準(zhǔn)；②單胎妊娠,剖宮產(chǎn)分娩；③孕婦及家屬知情并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并糖尿病、甲亢、肝腎功能不全、免疫系統(tǒng)疾病等；②多胎妊娠、宮內(nèi)感染、胎膜早破等；③有既往不良妊娠史等。同期正常妊娠分娩孕婦43例為對(duì)照組。匹配標(biāo)準(zhǔn)：①年齡、體質(zhì)指數(shù)等基線資料匹配；②孕期產(chǎn)前檢查正常,未見PE或其他并發(fā)癥；③單胎且自愿行剖宮產(chǎn)分娩。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批。

1.2 方法

1.2.1樣本采集剖宮產(chǎn)后5min內(nèi)在胎盤中央母體面取胎盤組織,生理鹽水反復(fù)沖洗干凈后,分割組織塊置4%多聚甲醛保存待測(cè)。

1.2.2 STAU1檢測(cè)方法取50mg胎盤組織樣本進(jìn)行蛋白質(zhì)提取并檢測(cè)蛋白濃度。待蛋白質(zhì)變性后置-20℃恒溫箱內(nèi)。采用凝膠電泳轉(zhuǎn)膜處理樣本1h,5%脫脂奶粉封閉樣本2h。處理結(jié)束后在樣本中加入兔抗人STAU1抗體(美國(guó)Signalway公司)和兔抗人GAPDH抗體(上海酶聯(lián)生物科技有限公司),置4℃ 24h。恢復(fù)室溫30min后加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔抗體(北京百奧萊博科技有限公司)孵育2h。采用Azure Biosystems C600成像系統(tǒng)分析STAU1蛋白表達(dá)水平。

1.2.3 PLGF檢測(cè)方法將4%多聚甲醛固定24h以上胎盤組織樣本常規(guī)石蠟包埋切片,免疫組化學(xué)法檢測(cè)胎盤組織中PLGF水平,試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。將樣本石蠟切片放入60℃烤片機(jī)處理20min,磷酸緩沖鹽溶液(PBS)充分洗滌切片后采用二甲苯脫除切片中石蠟。分別采用不同濃度乙醇水化處理切片,將切片置于pH=6.0的枸鹽酸納緩沖液,放入100℃水中孵育20min。取出處理好的切片封閉處理20min,再次PBS洗滌。樣本中加入兔抗人PLGF多克隆抗體(美國(guó)Proteintech公司)置4℃恒溫箱24h。恢復(fù)室溫后用PBS清洗樣本,加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔抗體(北京百奧萊博科技有限公司)孵育30min,使用DAB試劑盒顯色,利用Powersite410顯微圖像分析系統(tǒng)計(jì)算光密度值,從而代表胎盤組織中PLGF表達(dá)水平。

1.3 觀察指標(biāo)

比較ESPE、LSPE及對(duì)照組產(chǎn)婦胎盤組織中STAU1、PLGF表達(dá)水平,記錄胎盤重量、新生兒出生體重、1min Apgar評(píng)分等妊娠結(jié)局情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般資料

ESPE組年齡(30.3±4.7)歲(25～37歲),體質(zhì)指數(shù)(BMI)(29.7±1.4)kg/m2；LSPE組年齡(30.7±4.4)歲(26～36歲),BMI(30.1±1.5)kg/m2；對(duì)照組年齡(30.6±4.8)歲(26～38歲),BMI(29.9±1.6)kg/m2。3組年齡、BMI無(wú)差異(P>0.05)。

2.2 胎盤組織中STAU1 、PLGF 表達(dá)

胎盤組織中STAU1、PLGF表達(dá)水平,ESPE組均低于LSPE組和對(duì)照組(P<0.05),LSPE組和對(duì)照組比較無(wú)差異(P>0.05)。見表1。

2.3 妊娠結(jié)局情況

胎盤重量、新生兒出生體重、新生兒1min Apgar評(píng)分均ESPE組低于LSPE組和對(duì)照組,且LSPE組均低于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表1 3 組胎盤組織中STAU1 、PLGF 表達(dá)水平比較

表2 3 組孕產(chǎn)婦妊娠結(jié)局比較

2.4 Pearson 相關(guān)性分析

以發(fā)生ESPE為自變量,新生兒出生體重、新生兒1min Apgar評(píng)分、胎盤重量為因變量進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析。ESPE與新生兒出生體重(r=-0.441)、新生兒1min Apgar評(píng)分(r=-0.572)、胎盤重量(r=-0.615)均呈負(fù)相關(guān)(P=0.000)。

3 討論

20世紀(jì)80年代,國(guó)外學(xué)者以孕34周為界提出了早發(fā)型重度子癇前期和晚發(fā)型重度子癇前期概念。隨著研究深入,眾多學(xué)者認(rèn)為ESPE與LSPE的致病機(jī)理、臨床特征及生物標(biāo)記物均不同[7]。相關(guān)數(shù)據(jù)表明,SPE患者中5%～20%為ESPE,75%～80%為L(zhǎng)SPE,雖然ESPE占比較小但對(duì)母嬰健康威脅更大[8]。ESPE與LSPE發(fā)展過程均存在胎盤灌注不良和胎盤功能障礙,繼而引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)而促使炎癥因子大量釋放,從而使母體表現(xiàn)出臨床癥狀[9]。由于ESPE、LSPE的發(fā)病機(jī)理具有多因素、多機(jī)制特點(diǎn),加強(qiáng)ESPE、LSPE病情發(fā)展預(yù)測(cè)及診療對(duì)改善妊娠結(jié)局有重要意義。

STAU1是一類雙鏈RNA結(jié)合蛋白,Bonnet Magnaval[10]等報(bào)道STAU1不僅在人體各組織表達(dá),而且還是一種應(yīng)激反應(yīng)基因,使細(xì)胞具有抗氧化應(yīng)激能力。此外,STAU1還可在細(xì)胞分化、增殖、凋亡等過程中發(fā)揮重要作用,因此普遍認(rèn)為STAU1在正常細(xì)胞中發(fā)揮不可替代作用[11]。本研究發(fā)現(xiàn),ESPE孕產(chǎn)婦胎盤組織中STAU1表達(dá)顯著低于LSPE組和對(duì)照組,提示ESPE發(fā)病過程會(huì)抑制STAU1蛋白表達(dá)。雖然LSPE胎盤組織中STAU1水平與對(duì)照組未見差異,說明ESPE孕產(chǎn)婦胎盤組織STAU1低表達(dá)與ESPE病情發(fā)展有一定關(guān)聯(lián)。分析認(rèn)為,ESPE發(fā)病過程會(huì)因胎盤灌注不良及胎盤功能障礙誘發(fā)機(jī)體炎癥因子爆發(fā),而STAU1作為一種抗氧化應(yīng)激因子,在炎癥反應(yīng)強(qiáng)烈時(shí)表達(dá)水平被抑制。

胎盤組織中滋養(yǎng)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞均可分泌PLGF,通過與滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞上絡(luò)氨酸酶受體結(jié)合,刺激受體細(xì)胞DNA生長(zhǎng)、增殖、分化；作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)還可促進(jìn)細(xì)胞分裂和分化,調(diào)節(jié)胎盤、胎兒血管生成和血管網(wǎng)重鑄。由于PLGF與胎盤組織的密切關(guān)聯(lián),臨床上常將PLGF作為評(píng)估SPE危險(xiǎn)程度的生化因子之一。一些研究顯示PLGF表達(dá)水平降低與SPE病情進(jìn)展相關(guān)：Caroline Diguisto[12]等報(bào)道ESPE孕產(chǎn)婦血清及胎盤PLGF均低于正常孕產(chǎn)婦；王茜[13]等提出SPE患者血清PLGF表達(dá)水平可作為SPE病情進(jìn)展早期預(yù)測(cè)指標(biāo)之一。本研究發(fā)現(xiàn),ESPE孕產(chǎn)婦胎盤組織中PLGF表達(dá)顯著低于LSPE組和對(duì)照組,而LSPE組與對(duì)照組未見差異,與王慧娟[14]等報(bào)道結(jié)果一致。分析認(rèn)為,PLGF表達(dá)降低會(huì)降低胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、趨化過程,進(jìn)而抑制胎盤、胎兒血管誘導(dǎo)生成過程,胎盤血管重塑障礙而誘發(fā)ESPE。

本研究不同孕產(chǎn)婦妊娠結(jié)局結(jié)果表明,孕產(chǎn)婦胎盤重量、新生兒出生體重、新生兒1min Apgar評(píng)分ESPE組最低,LSPE組其次,對(duì)照組最高,與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致。提示相比LSPE,ESPE對(duì)妊娠結(jié)局的影響更明顯。需要特別說明的是,由于對(duì)照組孕婦均屬正常妊娠分娩,因而相比ESPE、LSPE兩組孕周更長(zhǎng),由于胎兒發(fā)育及胎盤重量均與孕周密切相關(guān), 使得ESPE、LSPE兩組的胎盤重量、新生兒出生體重必然會(huì)低于對(duì)照組。故本研究將重點(diǎn)關(guān)注ESPE、LSPE兩組孕產(chǎn)婦的妊娠結(jié)局。分析認(rèn)為,由于ESPE發(fā)病過程中并發(fā)炎癥反應(yīng)和胎盤血管重塑抑制,胎盤血管網(wǎng)絡(luò)障礙限制了胎盤絨毛間隙和絨毛血管為母胎物質(zhì)交換,不僅干擾了胎盤功能運(yùn)轉(zhuǎn),還會(huì)導(dǎo)致胎兒發(fā)育遲緩,從而導(dǎo)致ESPE孕產(chǎn)婦分娩時(shí)孕周早、新生兒體重輕、Apgar評(píng)分低等妊娠結(jié)局。ESPE胎盤組織PLGF活性降低還會(huì)影響胎盤血管構(gòu)建和生長(zhǎng),因此產(chǎn)婦胎盤重量低于LSPE組和對(duì)照組。相關(guān)性分析表明,ESPE與新生兒出生體重、新生兒1min Apgar評(píng)分、胎盤重量呈負(fù)相關(guān),進(jìn)一步提示ESPE不利于妊娠結(jié)局。

綜上所述,ESPE孕婦胎盤組織中STAU1、PLGF顯著低表達(dá),而LSPE孕婦與正常孕婦差異不顯著,說明胎盤組織中STAU1、PLGF可能參與了ESPE發(fā)病過程,其表達(dá)水平被抑制。ESPE孕產(chǎn)婦分娩時(shí)發(fā)生孕周早、新生兒出生體重及Apgar評(píng)分低的概率較大,增加了不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn),提示臨床上應(yīng)予以重視。