短時受精卵丘消化程度對IVF結局的影響

蔣 彥 田 耕 曹堯南 吳小華

石家莊市第四醫(yī)院生殖醫(yī)學中心(石家莊,050011)

在體外受精-胚胎移植(IVF-ET)治療中,精卵結合障礙在不明原因不孕患者中的發(fā)生比例為20%～25%[1-2]。 本中心采用短時受精,早剝除顆粒細胞觀察極體,及時行補救卵胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)的方法,以防止IVF受精失敗[3]。IVF短時受精去除顆粒細胞時,部分患者卵丘-卵母細胞復合物(COCs)依然存在,未被精子消化完全；部分患者COCs結構消化完全,顆粒細胞容易去除,其對IVF受精情況的影響尚不明確,是否能預測IVF受精失敗,本文進行探討。

1 資料與方法

1.1 研究對象

對2019年3月—2019年7月在本中心接受IVF-ET的患者進行回顧性研究。納入標準：第1周期IVF助孕,年齡<40歲,原發(fā)不孕,男方精液檢查提示正常,獲卵數(shù)>5個。

1.2 方法

1.2.1促排卵方案采用標準黃體期促性腺激素釋放激素激動劑(GnRH-a)長方案。即前一月經(jīng)周期的黃體中期開始給予GnRH-a(達必佳,德國輝凌制藥)0.1mg/d(年齡<35 歲)或 0.05mg/d(年齡≥35歲)共16～20d,至垂體完全降調(diào)節(jié)(子宮內(nèi)膜厚度< 5mm,雙側卵巢卵泡直徑<5mm,血清FSH<5U/L,血清促黃體生成素<5U/L,雌二醇<30pg/ml),開始予促性腺激(Gn)促排卵。同時B超監(jiān)測卵泡數(shù)量、大小、子宮內(nèi)膜厚度及血清激素水平。有>2個卵泡直徑達≥18 mm 時,予10 000 U人絨毛膜促性腺激素(hCG； 麗珠制藥),36～38h后在陰道B超引導下行穿刺取卵術。

1.2.2受精、胚胎評價及分組采用梯度離心法處理精液標本備用。hCG 注射后38～40h,在加有COCs的雙井皿(Falcon,美國)中加入適量處理后的精子,使平均每個卵子周圍精子數(shù)為(0.5～1)×105/ml,每個孔內(nèi)所含COCs數(shù)不超過5枚。精卵共培養(yǎng)6h 后,采用機械吹打法去除卵母細胞周圍的卵丘細胞。此時觀察到2個極體的合子確定為受精,并轉移至另一個無精子的新鮮培養(yǎng)基液滴中進行過夜培養(yǎng)。未觀察到2個極體的卵子被確定為 IVF 受精失敗。在IVF受精后6h,對低受精率(<30%)和IVF 完全受精失敗周期中未出現(xiàn)第二極體的成熟卵子立即進行補救ICSI。IVF受精后20h(d1)進行受精評估,出現(xiàn)2個原核為正常受精。并于采卵后48h及72h進行胚胎形態(tài)學評價。d3細胞數(shù)7～9個,卵裂球大小均勻,碎片<20%為1～2級胚胎為優(yōu)質胚胎。移植和冷凍的胚胎為可用胚胎。

1.2.3分組去除顆粒細胞時,觀察COCs結構,根據(jù)卵丘消化程度分為完全消化和未完全消化兩組。COCs結構消失,僅卵冠周圍有數(shù)層顆粒細胞的放射冠,顆粒細胞容易剝除為完全消化組；COCs結構依然存在,卵丘未完全消化,剝除顆粒細胞較困難,有拉絲、結網(wǎng)現(xiàn)象,為未完全消化組。根據(jù)受精情況又分為IVF受精正常(IVF受精率≥30%)和補救ICSI(IVF受精率<30%)。補救ICSI組又分為部分補救ICSI(IVF受精率<30%)和全部補救ICSI(IVF完全受精失敗)。

1.3 統(tǒng)計學分析

分析采用 SPSS 19.0統(tǒng)計軟件。組間率的比較用χ2檢驗,正態(tài)分布計量資料比較采用t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 一般資料及各指標比較

共納入 187個周期,完全消化組84例,未完全消化組103例,兩組一般資料比較見表1。完全消化組MII卵數(shù)、MII卵率高于未完全消化組(P<0.05)。其余指標均無差異(P>0.05)。見表1 。

表1 兩組一般資料及相關指標比較

2.3 IVF 受精正常周期各指標比較

在所有獲得成熟卵的周期中,IVF受精正常周期163 例,其中完全消化組74例,未完全消化組89例。完全消化組MII卵數(shù)、MII卵率高于未完全消化組(P<0.05),兩組其余指標均無差異(P>0.05)。見表2。

表2 兩組IVF 受精正常周期各指標比較

3 討論

精卵結合是一個復雜過程,任何一個環(huán)節(jié)發(fā)生障礙均會導致受精失敗[4]。 IVF助孕過程中無法完全避免受精失敗的發(fā)生[5-6]。受精依賴于精子的穿透能力和卵冠丘的功能狀態(tài)[7]。卵丘由卵母細胞、顆粒細胞及其間質(黏多糖和透明質烷)組成；精子頂體含有一個復合酶系。受精時,精子發(fā)生頂體反應,釋放酶松解和破壞卵丘細胞及放射冠細胞連接,分解卵子外周的顆粒細胞外的間質和透明帶,使之與卵子接觸。其中精子頂體釋放透明質酸酶分解顆粒細胞間質是精子穿透卵丘的主要機制[8]。受精率低除了精子的自身功能因素外,卵母細胞通過對顆粒細胞及其間質的影響,可以影響到精子穿透卵丘的能力。IVF-ET時觀察到的卵丘顆粒細胞伸展或黏液化就是其間質的形成過程。異常卵母細胞使顆粒細胞發(fā)育不良,不適合精子的穿透,減弱了受精必需的精子處理過程(如頂體反應)[9]。有研究表明IVF-ET治療有增加顆粒細胞凋亡和阻礙卵母細胞成熟的風險[10]。不成熟卵母細胞其顆粒細胞延展性差,未成熟卵體外成熟培養(yǎng)時有大量因子影響卵丘顆粒細胞伸展[11]。猜測其可能影響精子的穿透,進而導致卵丘消化不完全。

本研究證實完全消化組MII 卵數(shù)、MII卵率 高于未完全消化組,說明COCs成熟度好的卵子有利于消化顆粒細胞,但完全消化組和未完全消化組IVF受精正常周期和補救 ICSI 周期(部分Re-ICSI、全部Re-ICSI)比率均無差異,故可能不能預測IVF受精情況。