• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于網(wǎng)絡藥理學的防己黃芪湯防治2型糖尿病的潛在作用機制研究

    2020-03-27 12:19:09陳璟徐貝貝徐墜成單鑫王威許惠琴呂志陽
    現(xiàn)代鹽化工 2020年1期
    關(guān)鍵詞:防己藥理學靶點

    陳璟 徐貝貝 徐墜成 單鑫 王威 許惠琴 呂志陽

    摘 ? 要:為了基于網(wǎng)絡藥理學方法研究防己黃芪湯防治2型糖尿病的潛在作用機制,采用中藥系統(tǒng)藥理學數(shù)據(jù)庫及技術(shù)平臺(TCMSP),按照口服生物利用度OB≥30%和類藥性DL≥0.18篩選處方中的活性成分及其相關(guān)靶點,通過Uniprot數(shù)據(jù)庫找出對應官方基因名稱。利用疾病靶點相關(guān)數(shù)據(jù)庫檢索與2型糖尿病相關(guān)的靶點基因。將活性成分所對應的靶點基因和2型糖尿病相關(guān)的靶點基因進行交集獲得兩者的共同基因即為防己黃芪湯治療2型糖尿病的關(guān)鍵靶點。使用Cytoscape軟件構(gòu)建中藥-活性成分-關(guān)鍵靶點網(wǎng)絡,根據(jù)度值進行篩選,尋找該方劑防治2型糖尿病的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。利用DAVID數(shù)據(jù)庫及ClueGo插件對關(guān)鍵作用靶點進行GO注釋分析和KEGG通路分析,從而探究防己黃芪湯干預2型糖尿病的生物過程及作用通路。結(jié)果顯示,篩選得到防己黃芪湯122個活性成分及242個潛在作用靶點,其中,與2型糖尿病重復的83個關(guān)鍵靶點中STAT3,AKT1,TNF,JUN,TP53,MAPK14,MAPK1,MAPK8可能通過調(diào)控AGE-RAGE信號通路、MAPK信號通路、AMPK信號通路、FoXO信號通路發(fā)揮治療作用。由此得出結(jié)論:通過網(wǎng)絡藥理學預測防己黃芪湯防治2型糖尿病的關(guān)鍵靶點及其相關(guān)信號通路,推測該方劑對2型糖尿病的潛在作用機制,大都和脂代謝的過程、氧化應激過程相關(guān),為進一步闡明防己黃芪湯對2型糖尿病的作用機制提供了科學依據(jù)。

    關(guān)鍵詞:防己黃芪湯;2型糖尿病;網(wǎng)絡藥理學;潛在靶點

    糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)為臨床上常見的一種代謝紊亂性疾病,在全球范圍內(nèi)嚴重威脅人類身體健康[1],其患者以長期高血糖為主要特征,嚴重時通常伴有如心血管疾病、腎病、眼底病變等多種并發(fā)癥。其中,2型糖尿?。═ype 2 Diabetes Mellitus,T2DM )占糖尿病患者90%以上[2],陳思蘭等發(fā)現(xiàn)其發(fā)病與胰島素抵抗(Insulin-Resistance,IR)密不可分,因胰島素抵抗導致患者胰島素分泌相對不足。西醫(yī)治療多通過控制患者飲食或使用降糖藥物來保證治療效果[3],然而長期服用容易產(chǎn)生許多副作用,降低療效。為了尋找能夠防治2型糖尿病的有效藥物,本研究將目光放到傳統(tǒng)的中醫(yī)藥上。中醫(yī)藥在防治DM方面歷史悠久,積累了大量的寶貴臨床經(jīng)驗,近年來文獻報道屢見不鮮。

    DM屬中醫(yī)消渴病范疇,中醫(yī)認為IR的發(fā)生為脾失健運、肝失疏泄、腎陽不化等臟腑功能失調(diào)所致[4]。張景岳在《景岳全書·痰飲》中說:“五臟之病,雖皆能生痰,然無不由于脾腎?!逼⒛I虛損導致機體津液代謝異常,痰濕困脾,阻滯機體組織間物質(zhì)交換,影響胰島素和葡萄糖、脂質(zhì)、蛋白等水谷精微代謝,表現(xiàn)為痰濁、血瘀,二者互相影響,共同加重IR程度。由此可見,可以通過改善IR來治療T2DM,從中醫(yī)辯證角度出發(fā),采用一些活血化瘀、理氣化痰、滋陰補腎的中藥復方,將會在治療T2DM上大有成效。據(jù)《金匱要略》記載,防己黃芪湯(FJHQT)具有補氣健脾、祛風除濕、利水消腫之功效。防己黃芪二者配伍,祛風利濕不傷表,固表止汗不留邪,白術(shù)作為臣藥健脾利濕,甘草又調(diào)和諸藥,使其相得益彰[5]。研究表明[6-9],F(xiàn)JHQT確有調(diào)血脂、降血糖、減肥的功效。賈真等[10]通過大鼠實驗發(fā)現(xiàn)防己黃芪湯可以提高高脂飼養(yǎng)大鼠的胰島素敏感性,改善脂質(zhì)代謝紊亂。目前,F(xiàn)JHQT中各單味藥的化學成分雖有報道,但鑒于中藥成分復雜而DM又是多基因、多靶點作用的疾病,對該方劑防治T2DM仍缺乏系統(tǒng)的研究。

    網(wǎng)絡藥理學通過不同層次的網(wǎng)絡構(gòu)建系統(tǒng)地揭示藥物作用靶點與疾病靶點之間的關(guān)系,從微觀層面觀察復雜藥物對多靶點疾病的干預和影響。本研究擬通過網(wǎng)絡藥理學的方法篩選FJHQT中各單味藥的活性成分及作用靶點,檢索已知的T2DM的相關(guān)靶點,利用DAVID數(shù)據(jù)庫及ClueGo分析探究防己黃芪湯干預2型糖尿病的潛在作用通路,為臨床治療T2DM提供新思路。

    1 ? ?材料與方法

    1.1 ?FJHQT處方中各單味藥活性成分的篩選

    通過查詢《中國藥典2015版》所得防己黃芪湯處方中4味藥分別是:防己、黃芪、白術(shù)、甘草。采用中藥系統(tǒng)藥理學數(shù)據(jù)庫及技術(shù)平臺(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)篩選防己、黃芪、白術(shù)、甘草4味藥中的活性成分。TCMSP包括:《中國藥典2015版》含有的400多種中藥材,800多個相關(guān)疾病的基因,3 000多個靶點基因和20 000多種活性成分,TCMSP作為可靠的中草藥信息數(shù)據(jù)平臺,為廣大學者搜集中藥復方所含成分及其相關(guān)作用靶點等相關(guān)化學信息提供了便利。研究人員可通過設置口服生物利用度(Oral Bioavailability,OB)、類藥性(Drug Likeness,DL)等ADME參數(shù)獲取自己想要的有效信息。FJHQT作為湯劑,臨床上通常以口服方式給藥,故按照口服生物利用度≥30%和類藥性≥0.18進行篩選得到FJHQT中的活性成分,記錄其相關(guān)靶點蛋白名和在其他文獻中收集到的關(guān)于FJHQT的重要成分及其相關(guān)靶點蛋白名于Excel表格中。

    1.2 ?處方中潛在作用靶點預測及構(gòu)建“藥物活性成分-潛在作用靶點”網(wǎng)絡關(guān)系

    Uniprot,全稱Universal Protein,是目前信息最豐富、資源最廣的免費蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫,使用者可通過其中的關(guān)鍵詞搜索到感興趣的蛋白名稱。由上述TCMSP搜索得到活性成分及其相關(guān)靶點蛋白名,將藥物相關(guān)靶點蛋白名通過Uniprot數(shù)據(jù)庫中的Uniprot KB搜索區(qū)找出對應的官方基因名(Gene Symbol),篩選物種為人類的靶點基因名稱。將4味藥的基因名導入到Excel表格,刪除重復項得到全方的潛在作用靶點。用Cytoscape3.7.0軟件構(gòu)建“藥物活性成分-潛在作用靶點”網(wǎng)絡圖,其中節(jié)點代表藥物化學成分和相應的作用靶點,節(jié)點的度值(Degree)表示藥物活性成分與作用靶點連線的條數(shù),通過度值篩選可以得到與藥物活性成分高度連接的蛋白,這些蛋白在網(wǎng)絡中的作用不可忽視。

    1.3 ?T2DM靶點的收集

    檢索GeneCards數(shù)據(jù)庫(http://www.genecards.org/)和人類在線孟德爾遺傳平臺(http://www.omim.org/)等與疾病靶點相關(guān)的數(shù)據(jù)庫,以“Type 2 diabetes Mellitus”為關(guān)鍵詞搜索與2型糖尿病相關(guān)的已知靶點并刪除重復項進行整合。

    1.4 ?關(guān)鍵作用靶點的獲取

    將藥物潛在作用靶點與疾病相關(guān)靶點通過omicshare平臺(https://www.omicshare.com/)繪制維恩圖,從而得到防己黃芪湯治療T2DM的關(guān)鍵作用靶點,為后續(xù)構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡圖提供依據(jù)。

    1.5 ?關(guān)鍵作用靶點的GO注釋及KEGG通路富集

    利用DAVID數(shù)據(jù)庫對關(guān)鍵作用靶點進行GO注釋分析,將篩選條件設置為細胞的組成(cellular component),分子的功能(molecular function)和生物的過程(biological process)3個篩選條件,最后再點擊Functional Annotation Table,得到GO注釋結(jié)果。利用Cytoscape3.7.0軟件中的ClueGo插件對關(guān)鍵作用靶點進行KEGG通路分析,將關(guān)鍵作用靶點輸入到GENES一欄,選擇物種為人類,再設定P<0.05,選擇KEGG通路,最后點擊start開始分析,得到防己黃芪湯干預2型糖尿病的潛在作用通路。

    2 ? ?實驗過程分析

    2.1 ?FJHQT活性成分及相關(guān)靶點信息

    利用TCMSP數(shù)據(jù)庫查詢到防己的化學成分50個,黃芪的化學成分87個,白術(shù)的化學成分55個,甘草的化學成分280個,共計472個化學成分。經(jīng)OB、DL等藥代動力學(ADME)參數(shù)篩選得到防己的活性成分3個,黃芪的活性成分20個,白術(shù)的活性成分7個,甘草的活性成分92個,共計122個活性成分,將其相關(guān)靶點蛋白名記錄于Excel表格中。

    2.2 ?FJHQT潛在作用靶點預測結(jié)果及“活性成分-潛在作用靶點”網(wǎng)絡分析

    對上述122個活性成分進行潛在作用靶點預測并進行靶點基因名稱的修正,通過TCMSP數(shù)據(jù)庫收集122個活性成分的潛在作用靶點,打開Uniprot(http://www.uniprot.org/)數(shù)據(jù)庫,選擇Uniprot KB搜索區(qū),將潛在作用靶點的蛋白名鍵入得到對應的官方基因名,剔除非人源靶點。將活性成分、相關(guān)靶點蛋白名、官方基因名3列數(shù)據(jù)統(tǒng)計于Excel表格中,刪除重復項得到1 994條對應關(guān)系。將官方基因名單獨列出去后得到FJHQT的潛在作用靶點242個。將122個活性成分及242個潛在作用靶點導入Cytoscape3.7.0 軟件進行可視化構(gòu)建“活性成分-潛在作用靶點”網(wǎng)絡,揭示藥物成分與靶點之間的關(guān)系。按度值篩選排名前20的有槲皮素(Quercetin),PTGS2,ESR1,CALM1,HSP90AB1,NOS2,AR,PPARG,山奈酚(kaempferol),PAL_GLEAN10007028,PRSS1,GSK3B,CDK2,ESR2,CCNA2,F(xiàn)10,NCOA2,SCN5A,MAPK14,CHEK1。

    2.3 ?T2DM相關(guān)靶點信息

    通過人類在線孟德爾遺傳平臺OMIM檢索到T2DM相關(guān)靶點31個,通過Genecards數(shù)據(jù)庫檢索到T2DM相關(guān)靶點408個,共計439個相關(guān)靶點。

    2.4 ?關(guān)鍵作用靶點的生物功能預測及作用通路分析

    通過DAVID數(shù)據(jù)庫對上述關(guān)鍵作用靶點進行GO注釋分析,根據(jù)錯誤分析率(FDR)<0.05篩選得到20條GO條目(見圖1),其中,大多數(shù)關(guān)于生物學的過程主要涉及:內(nèi)皮細胞凋亡過程的調(diào)控、DNA轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)、RNA聚合酶Ⅱ啟動子轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)、MHC Ⅱ類生物合成過程的調(diào)節(jié)、肽基絲氨酸磷酸化過程、脂多糖介導信號通路等。關(guān)于分子功能主要涉及細胞因子活性、RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子活性、MAP激酶活性。此外,有的條目還顯示與炎癥反應、血管生成有關(guān)。GO注釋分析結(jié)果如圖1所示。通過Cytoscape3.7.0 軟件中的ClueGo插件對關(guān)鍵靶點進行KEGG通路富集分析,其中P<0.05的通路有11條被顯著富集(見圖2),分別是:AGE-RAGE信號通路、AMPK信號通路、VEGF信號通路、T細胞受體通路、松弛素信號通路、MAPK信號通路、ErbB信號通路、胰島素信號通路、鞘脂信號通路、FoXO信號通路,表示FJHQT可能通過這些通路起到防治T2DM的作用,應予以重點關(guān)注。

    3 ? ?實驗結(jié)果分析

    現(xiàn)階段,我國糖尿病患者已經(jīng)有9 000多萬人,而其中2型糖尿病居多,2型糖尿病是一種慢性代謝功能障礙,其特征在于進行性胰島素抵抗和高血糖癥。現(xiàn)代分子學研究表明,不同信號通路及其相關(guān)蛋白、基因參與調(diào)控該疾病的發(fā)生與發(fā)展,相互作用機制復雜,單純通過使用降血糖、降血壓、改善微循環(huán)等“點對點”的藥物干預方式,很難推動糖尿病治療進展,臨床效果較差。中藥復方成分復雜,其多靶點的協(xié)同作用值得引起注意,防己黃芪湯在臨床治療消渴癥包括一些糖尿病并發(fā)癥方面的療效確切,但是中藥復方治療T2DM的作用機制尚不清晰。網(wǎng)絡藥理學突破單靶點的研究模式,從多靶點研究思路出發(fā),為探索中藥復方的療效提供新思路。本研究采用了網(wǎng)絡藥理學研究思路,初步挖掘、分析防己黃芪湯多靶點防治T2DM可能的作用機制。

    本研究采用網(wǎng)絡藥理學的研究方法對防己黃芪湯進行研究,最后得到防己黃芪湯122個入血活性成分,預測了242個潛在作用靶點。其中槲皮素(quercetin)、山奈酚(kaempferol)等活性成分可作用于多個靶點。槲皮素屬于植物類黃酮并且在體外具有有效的抗氧化特性,最近的文獻報道槲皮素可能在體內(nèi)具有抗癌和抗炎功能,與此同時,槲皮素還可以預防糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生[10],山奈酚可用作治療糖尿病腎病的潛在治療劑。在對靶點的預測過程中,發(fā)現(xiàn)CALM1、PTGS2等靶點可作用于多個潛在活性成分,這表現(xiàn)出了中藥多個成分共同作用的特征。在GO富集分析結(jié)果中,發(fā)現(xiàn)主要涉及:內(nèi)皮細胞凋亡過程的調(diào)控、DNA轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)、RNA聚合酶Ⅱ啟動子轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)、MHC Ⅱ類生物合成過程的調(diào)節(jié)、肽基絲氨酸磷酸化過程、脂多糖介導信號通路等。在KEGG通路分析結(jié)果中,發(fā)現(xiàn)預測的關(guān)鍵靶點主要集中作用在AGE-RAGE信號通路、AMPK信號通路、VEGF信號通路。這些通路主要在氧化應激、炎癥、脂質(zhì)代謝等方面具有良好的作用,并且上述通路與目前相關(guān)研究結(jié)果具有一致性,證明本研究預測出的結(jié)果具有可靠性。

    4 ? ?結(jié)語

    通過網(wǎng)絡藥理學預測防己黃芪湯防治2型糖尿病的關(guān)鍵作用靶點及其相關(guān)信號通路,推測防己黃芪湯對2型糖尿病的潛在作用機制,推測結(jié)果可能主要是:內(nèi)皮細胞凋亡過程的調(diào)控、DNA轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)、RNA聚合酶Ⅱ啟動子轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)等。關(guān)于分子功能主要涉及細胞因子活性等。此外,有的條目還顯示與炎癥反應、血管生成有關(guān),為闡明防己黃芪湯對2型糖尿病的作用機制提供了科學依據(jù),但還存在一些缺陷,主要是未對預測獲得的活性成分、關(guān)鍵靶點和有關(guān)通路進行實驗驗證。為了進一步探討其復雜的過程和作用機制,將會結(jié)合上述結(jié)果進行更深入的實驗研究。

    [參考文獻]

    [1]李 ?信,馬海燕,李魯盼,等.糖尿病的代謝組學研究進展[J].藥學學報,2019(4):1-10.

    [2]南會蘭,張 ?蘊.2型糖尿病與心血管并發(fā)癥研究新進展[J].醫(yī)學綜述,2010,16(20):3 142-3 145.

    [3]吳淑芳.中藥消渴丸用于氣陰兩虛型2型糖尿病治療療效觀察[J].糖尿病新世界,2019(6):1.

    [4]王海焱,劉銅華.中藥復方治療2型糖尿病胰島素抵抗的研究[J].西部中醫(yī)藥,2017,30(5):137-140.

    [5]周則衛(wèi).Ⅱ型糖尿病發(fā)生胰島素抵抗機理的中醫(yī)探討[J].天津中醫(yī),2002(4):38-39.

    [6]汪小莉,劉 ?曉,夏春燕,等.防己黃芪湯藥理作用及各單味藥化學成分研究進展[J].中草藥,2016,47(19):3 527-3 534.

    [7]白宣英.防己黃芪湯對鏈脲菌素誘發(fā)糖尿病鼠的降血糖作用:青風藤與粉防己的比較研究[J].國外醫(yī)學:中醫(yī)中藥分冊,2000(5):289-290.

    [8]劉園英.粉防己、漢防己甲素及防己黃芪湯對糖尿病小鼠血糖濃度的影響[C]//北京:世界中西醫(yī)結(jié)合大會,1997.

    [9]秦增祥,馬引懷.防己黃芪湯藥理與應用[J].中成藥,1998(9):37-38.

    [10]ZHAO Q C,ZHANG F,YU Z Y,et al.HDAC3 inhibition prevents blood-brain barrier permeability through Nrf2 activation in type 2 diabetes male mice[J].J. Neuroinflammation,2019(16):103.

    猜你喜歡
    防己藥理學靶點
    防己結(jié)構(gòu)中紅外光譜研究
    煤炭與化工(2023年8期)2023-10-11 04:25:28
    基于藥理學分析的護理創(chuàng)新實踐探索
    維生素D受體或是糖尿病治療的新靶點
    中老年保健(2021年3期)2021-12-03 02:32:25
    腫瘤免疫治療發(fā)現(xiàn)新潛在靶點
    論《金匱要略》木防己湯應作術(shù)防己湯
    粉防己堿抗腫瘤機制的研究進展
    中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:25:46
    藝術(shù)藥理學
    特別健康(2018年4期)2018-07-03 00:38:26
    藥理學原則在抗微生物藥給藥方案設計中的應用
    心力衰竭的分子重構(gòu)機制及其潛在的治療靶點
    氯胺酮依賴腦內(nèi)作用靶點的可視化研究
    同位素(2014年2期)2014-04-16 04:57:16
    国产亚洲精品久久久com| 欧美中文综合在线视频| а√天堂www在线а√下载| 最新中文字幕久久久久 | 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲成av人片免费观看| 波多野结衣高清作品| 国产视频一区二区在线看| 国产在线精品亚洲第一网站| 禁无遮挡网站| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 久久人人精品亚洲av| 欧美日韩精品网址| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 俺也久久电影网| 日韩三级视频一区二区三区| 男人舔女人的私密视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲第一电影网av| 日韩有码中文字幕| 制服丝袜大香蕉在线| 美女午夜性视频免费| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产人伦9x9x在线观看| 美女cb高潮喷水在线观看 | 精品久久久久久成人av| 精品久久久久久久末码| 亚洲熟妇熟女久久| 波多野结衣高清无吗| 亚洲欧美日韩东京热| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美av亚洲av综合av国产av| 午夜两性在线视频| 久久精品国产综合久久久| 99热这里只有精品一区 | 女人被狂操c到高潮| 性色avwww在线观看| 亚洲国产欧美人成| www日本黄色视频网| 亚洲成人免费电影在线观看| 在线国产一区二区在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| 后天国语完整版免费观看| 日本免费a在线| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲国产精品合色在线| 桃红色精品国产亚洲av| 国产精品av视频在线免费观看| 香蕉久久夜色| 十八禁人妻一区二区| 午夜视频精品福利| 成人鲁丝片一二三区免费| 他把我摸到了高潮在线观看| 中文字幕久久专区| 亚洲av电影在线进入| 国内精品一区二区在线观看| 午夜精品在线福利| 午夜福利18| 国产综合懂色| 嫩草影院入口| 九九热线精品视视频播放| 色综合亚洲欧美另类图片| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品久久久久久久电影 | 日韩欧美国产在线观看| 成年免费大片在线观看| 两性夫妻黄色片| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美黑人欧美精品刺激| 在线视频色国产色| 日韩欧美 国产精品| 欧美日韩综合久久久久久 | 国产v大片淫在线免费观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 麻豆av在线久日| 香蕉丝袜av| 久久久国产精品麻豆| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| av中文乱码字幕在线| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| netflix在线观看网站| 成人一区二区视频在线观看| 欧美大码av| 亚洲国产精品久久男人天堂| 99久久综合精品五月天人人| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 18禁美女被吸乳视频| or卡值多少钱| 亚洲精品色激情综合| 99re在线观看精品视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 99re在线观看精品视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 美女大奶头视频| 91九色精品人成在线观看| 麻豆国产av国片精品| 波多野结衣高清作品| 亚洲美女黄片视频| 757午夜福利合集在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美在线一区亚洲| 搡老岳熟女国产| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲欧美激情综合另类| 久久香蕉国产精品| 我的老师免费观看完整版| 久久久久久久久免费视频了| 欧美黑人巨大hd| 久久午夜综合久久蜜桃| 最新在线观看一区二区三区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 无人区码免费观看不卡| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产日本99.免费观看| 亚洲成人久久爱视频| 一本一本综合久久| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲国产精品成人综合色| 久久中文字幕一级| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产精品精品国产色婷婷| 国产三级黄色录像| 一区福利在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产爱豆传媒在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 999久久久国产精品视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产不卡一卡二| www日本黄色视频网| 午夜a级毛片| 99精品欧美一区二区三区四区| 91麻豆精品激情在线观看国产| 午夜免费观看网址| 亚洲av成人av| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲av美国av| 国产三级黄色录像| 久久久久久大精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲av第一区精品v没综合| 91av网站免费观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产精品日韩av在线免费观看| 变态另类丝袜制服| 午夜福利免费观看在线| 黄色视频,在线免费观看| 国产伦人伦偷精品视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产黄a三级三级三级人| 日韩欧美免费精品| 国产成人精品无人区| 欧美成人性av电影在线观看| 久久中文字幕人妻熟女| 国产黄色小视频在线观看| 日韩欧美免费精品| 亚洲七黄色美女视频| 精品久久久久久久末码| 俺也久久电影网| 一级作爱视频免费观看| 一进一出抽搐动态| 又爽又黄无遮挡网站| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 午夜久久久久精精品| 日本一本二区三区精品| 美女被艹到高潮喷水动态| 午夜日韩欧美国产| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 女同久久另类99精品国产91| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲专区中文字幕在线| 午夜福利高清视频| 午夜免费成人在线视频| 亚洲国产精品999在线| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| av欧美777| 波多野结衣高清作品| 最近视频中文字幕2019在线8| 51午夜福利影视在线观看| 久久九九热精品免费| 美女 人体艺术 gogo| 国产视频内射| 国产亚洲欧美98| 欧美一级毛片孕妇| 99热这里只有精品一区 | 真实男女啪啪啪动态图| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 免费在线观看日本一区| 国产伦在线观看视频一区| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 又紧又爽又黄一区二区| 老汉色∧v一级毛片| 色哟哟哟哟哟哟| 丁香欧美五月| 国产精品久久久人人做人人爽| 俺也久久电影网| 久久久久九九精品影院| 成年人黄色毛片网站| 操出白浆在线播放| 成人三级做爰电影| 久久久久国产一级毛片高清牌| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲在线观看片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 成人欧美大片| 国产精品亚洲美女久久久| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 一a级毛片在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看| a级毛片在线看网站| 给我免费播放毛片高清在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 超碰成人久久| 一进一出抽搐gif免费好疼| www日本黄色视频网| 欧美激情在线99| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品 欧美亚洲| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 欧美日韩国产亚洲二区| 精品福利观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 日韩成人在线观看一区二区三区| 免费电影在线观看免费观看| 国产一区二区激情短视频| 日本a在线网址| 成年人黄色毛片网站| 美女高潮的动态| 老司机福利观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 久久伊人香网站| 一区二区三区国产精品乱码| 婷婷亚洲欧美| av在线蜜桃| 国产不卡一卡二| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲人与动物交配视频| 在线国产一区二区在线| 嫩草影视91久久| 欧美日韩乱码在线| 欧美一级毛片孕妇| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 一本综合久久免费| 亚洲电影在线观看av| 村上凉子中文字幕在线| 久久精品国产清高在天天线| 国产精品女同一区二区软件 | 听说在线观看完整版免费高清| 18美女黄网站色大片免费观看| 国内精品久久久久久久电影| 欧美大码av| 小说图片视频综合网站| 午夜a级毛片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产视频内射| 看免费av毛片| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 五月伊人婷婷丁香| 成在线人永久免费视频| 久久午夜亚洲精品久久| 久久伊人香网站| 看黄色毛片网站| 身体一侧抽搐| 五月伊人婷婷丁香| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美3d第一页| 久久久精品大字幕| 网址你懂的国产日韩在线| 无遮挡黄片免费观看| 国产成年人精品一区二区| 两个人视频免费观看高清| 国内精品久久久久久久电影| 久久久久精品国产欧美久久久| 搞女人的毛片| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 18禁国产床啪视频网站| 我要搜黄色片| 免费观看人在逋| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲国产欧美人成| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 怎么达到女性高潮| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 1000部很黄的大片| 深夜精品福利| av女优亚洲男人天堂 | 国产精品一区二区精品视频观看| 五月伊人婷婷丁香| 黄色视频,在线免费观看| 精品无人区乱码1区二区| 搡老熟女国产l中国老女人| 日本五十路高清| 九色成人免费人妻av| a在线观看视频网站| 校园春色视频在线观看| 亚洲成av人片在线播放无| 悠悠久久av| 草草在线视频免费看| 91av网站免费观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 午夜福利免费观看在线| av片东京热男人的天堂| 国产午夜精品论理片| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久香蕉国产精品| 久久久色成人| 色尼玛亚洲综合影院| 日韩精品中文字幕看吧| av中文乱码字幕在线| 床上黄色一级片| 欧美乱妇无乱码| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 少妇熟女aⅴ在线视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 99精品欧美一区二区三区四区| 男女视频在线观看网站免费| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日本成人三级电影网站| 一a级毛片在线观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久久精品大字幕| 久久精品91蜜桃| 亚洲激情在线av| 精品久久久久久久末码| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 欧美日韩国产亚洲二区| 男女午夜视频在线观看| 亚洲无线在线观看| 亚洲成av人片免费观看| av黄色大香蕉| 国语自产精品视频在线第100页| 精品久久久久久,| 日本精品一区二区三区蜜桃| 高清毛片免费观看视频网站| 免费在线观看成人毛片| 99精品在免费线老司机午夜| 不卡一级毛片| 97超视频在线观看视频| 国产精品久久视频播放| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久久久免费精品人妻一区二区| 精品电影一区二区在线| 免费高清视频大片| 欧美成狂野欧美在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 在线观看66精品国产| 亚洲美女视频黄频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 性欧美人与动物交配| 午夜日韩欧美国产| 91字幕亚洲| 久久久久久久午夜电影| 亚洲成人久久爱视频| 成人一区二区视频在线观看| 黄色 视频免费看| 波多野结衣高清作品| 亚洲成av人片免费观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 全区人妻精品视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲国产欧美一区二区综合| 99热这里只有精品一区 | 国内精品美女久久久久久| 亚洲18禁久久av| 麻豆国产av国片精品| 欧美最黄视频在线播放免费| 日韩欧美 国产精品| 久久香蕉国产精品| 国产麻豆成人av免费视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产爱豆传媒在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 黄色片一级片一级黄色片| 国产精品亚洲美女久久久| 999久久久国产精品视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产亚洲欧美98| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久久久久人人人人人| 欧美在线黄色| 国产高清视频在线观看网站| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美成人性av电影在线观看| 成年人黄色毛片网站| 久久久国产成人精品二区| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲成av人片在线播放无| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲国产欧美人成| 性色av乱码一区二区三区2| 香蕉国产在线看| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲国产精品999在线| 这个男人来自地球电影免费观看| 中文字幕久久专区| 嫩草影院入口| 成人亚洲精品av一区二区| av天堂中文字幕网| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产伦一二天堂av在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 午夜福利免费观看在线| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 日韩精品中文字幕看吧| 99久久精品热视频| 国产成人影院久久av| 成人精品一区二区免费| 无遮挡黄片免费观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 观看免费一级毛片| 日韩欧美 国产精品| 欧美日韩乱码在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 999久久久精品免费观看国产| 成在线人永久免费视频| 亚洲avbb在线观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 99国产综合亚洲精品| 精品久久久久久久久久久久久| 日韩免费av在线播放| 国产伦人伦偷精品视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲精品一区av在线观看| 午夜福利在线观看吧| 国产午夜福利久久久久久| 国产精品久久久久久久电影 | 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美在线一区亚洲| 亚洲人成网站高清观看| 国产一区在线观看成人免费| 精品欧美国产一区二区三| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产一区二区在线av高清观看| 狂野欧美激情性xxxx| 日本黄大片高清| 岛国在线免费视频观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产一区在线观看成人免费| 欧美色视频一区免费| 少妇熟女aⅴ在线视频| 十八禁网站免费在线| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久香蕉国产精品| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲成人久久性| 久久精品综合一区二区三区| 99热这里只有精品一区 | 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产免费男女视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 中出人妻视频一区二区| 国产极品精品免费视频能看的| 免费大片18禁| 中文在线观看免费www的网站| 国产精品影院久久| 国产精品久久视频播放| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲18禁久久av| 老司机午夜福利在线观看视频| 1000部很黄的大片| 日本a在线网址| 日日夜夜操网爽| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 午夜精品久久久久久毛片777| 欧美乱码精品一区二区三区| 99热只有精品国产| 国产成人aa在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 午夜福利在线在线| 久久中文字幕一级| 老司机午夜福利在线观看视频| 12—13女人毛片做爰片一| 啪啪无遮挡十八禁网站| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久久久久久久久黄片| 亚洲avbb在线观看| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久久色成人| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月 | 国产精品永久免费网站| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久久色成人| 全区人妻精品视频| 国产精品 国内视频| 91九色精品人成在线观看| 久久久久久久久久黄片| 亚洲av电影不卡..在线观看| 日韩欧美 国产精品| 亚洲五月天丁香| 特级一级黄色大片| 亚洲国产欧美人成| 国产高清三级在线| 久久亚洲精品不卡| 成人鲁丝片一二三区免费| 欧美一区二区精品小视频在线| 麻豆av在线久日| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 床上黄色一级片| 伦理电影免费视频| 美女大奶头视频| 99热6这里只有精品| 人妻夜夜爽99麻豆av| 免费看十八禁软件| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲国产欧美人成| 日本一本二区三区精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久久久性生活片| 午夜视频精品福利| 高清毛片免费观看视频网站| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 中文字幕熟女人妻在线| 一级毛片女人18水好多| 久久天堂一区二区三区四区| 婷婷丁香在线五月| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产淫片久久久久久久久 | 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产乱人视频| 久99久视频精品免费| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 日韩av在线大香蕉| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产高清视频在线观看网站| 最新美女视频免费是黄的| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲欧美精品综合久久99| 村上凉子中文字幕在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 美女cb高潮喷水在线观看 | 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲av成人一区二区三| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲在线自拍视频| 免费电影在线观看免费观看| 久久伊人香网站| 国产欧美日韩一区二区三| 伦理电影免费视频| 久久天堂一区二区三区四区| 国产久久久一区二区三区| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产成人啪精品午夜网站| 黄色女人牲交| 九色国产91popny在线| 黄片小视频在线播放| 最新美女视频免费是黄的| 久久久久久久久久黄片| 中文在线观看免费www的网站| 在线永久观看黄色视频| 久久伊人香网站| 1024香蕉在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 床上黄色一级片| 亚洲国产精品久久男人天堂| 久久天堂一区二区三区四区| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产精品 欧美亚洲| 1024香蕉在线观看| 欧美极品一区二区三区四区| 五月伊人婷婷丁香| 色av中文字幕| 精品国产三级普通话版| 亚洲男人的天堂狠狠| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 亚洲男人的天堂狠狠| avwww免费| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | ponron亚洲| 午夜激情欧美在线| 国产精品影院久久| 国产视频内射| 午夜福利18| 欧美一级毛片孕妇| 在线观看一区二区三区| 国产激情久久老熟女| 亚洲片人在线观看| 久久伊人香网站| 免费电影在线观看免费观看| 久久人妻av系列| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲精品美女久久av网站| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久久久久久午夜电影| 亚洲国产欧美网|