• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    藥物性肝損傷伴自身免疫現(xiàn)象患者血清γ干擾素誘導(dǎo)蛋白10水平及其單核苷酸多態(tài)性

    2020-03-26 08:11:50杜曉菲黃云麗黃春洋張曉丹陳新月
    臨床肝膽病雜志 2020年3期
    關(guān)鍵詞:基線多態(tài)性基因型

    任 姍, 杜曉菲, 黃云麗, 黃春洋, 張曉丹, 單 晶, 陳新月

    首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院 肝病免疫科, 北京 100069

    由于藥物、保健品的頻繁使用及環(huán)境毒物等多種因素的影響,藥物性肝損傷(DILI)發(fā)病率呈逐年上升趨勢,部分患者病情反復(fù),起病即出現(xiàn)重癥化趨勢,是近年來急性肝衰竭的主要原因之一[1]。越來越多數(shù)據(jù)證實(shí)DILI與人類白細(xì)胞抗原(HLA)Ⅰ、Ⅱ類基因遺傳多態(tài)性相關(guān),表明適應(yīng)性免疫在DILI中發(fā)揮重要作用[2-6]。γ干擾素誘導(dǎo)蛋白-10(interferon γ-induced protein 10,IP-10)作為趨化因子(CXC)家族中一員,與其受體CXCR3相互作用,趨化及激活T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷(natural killer,NK)細(xì)胞,發(fā)揮抗感染、抑制病毒等多種生物學(xué)功能。近年來有研究[7-8]顯示IP-10參與了狼瘡腎炎、自身免疫性肝炎等多種自身免疫性疾病進(jìn)展,但在DILI中的表達(dá)少有研究。本研究通過檢測血清IP-10水平及其基因多態(tài)性,探討IP-10聯(lián)合宿主單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNP)對DILI伴自身免疫現(xiàn)象的鑒別意義,旨在為DILI的診斷、預(yù)防及治療提供新的依據(jù)和思路。

    1 資料與方法

    1.1 研究對象 選擇2016年10月至2019年6月于本院肝病免疫科診治的DILI患者168例作為研究對象,DILI診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2015年中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會《藥物性肝損傷診治指南》[9]推薦的RUCAM 量表:超過8分為高度可能;6~8分為可能性大;3~5分為可能;1~2分為不太可能,等于或小于0分除外診斷;本研究納入評分≥6分的患者。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并病毒性肝炎(包括HAV、HBV、HCV、HEV、巨細(xì)胞病毒、EB病毒)和HIV等感染;(2)合并自身免疫性、遺傳代謝性、脂肪性或酒精性肝病;(3)合并惡性腫瘤;(4)靜脈藥癮者;(5)合并風(fēng)濕性疾病、內(nèi)分泌及代謝性疾??;(6)4周內(nèi)使用過糖皮質(zhì)激素或其他免疫抑制劑者。本研究方案得到首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)(批號:LL-2018-131-K),所有患者均簽署知情同意書。

    1.2 臨床資料采集及標(biāo)本收集 收集患者臨床資料,包括一般情況、合并用藥、主要癥狀和體征、實(shí)驗(yàn)室檢查、治療方案、臨床轉(zhuǎn)歸等。所有入組患者均于治療基線留取全血、血清,于-80 ℃保存以備檢測SNP及IP-10水平。

    1.3 病例分組 DILI伴自身免疫現(xiàn)象組,即AI-DILI組,依據(jù)自身免疫性肝炎(AIH)簡化診斷標(biāo)準(zhǔn)[10-12],選取分?jǐn)?shù)4~6分的患者[包括抗核抗體(ANA)/抗平滑肌抗體(SMA)/抗肝腎微粒體抗體(抗LKM)-1陽性或IgG升高或病理提示界面炎];非AI-DILI組為分?jǐn)?shù)<4分。

    AIH簡化診斷標(biāo)準(zhǔn)參考國際自身免疫性肝炎小組( IAIHG) 2008年AIH 簡化積分系統(tǒng):自身抗體、血清 IgG 水平、肝臟組織學(xué)變和排除病毒性肝炎四個項目進(jìn)行評分,每個項目最高計2分,共計8分:6~7分為“可能”的AIH,>7分可確診AIH。

    1.4 檢測方法

    1.4.1 實(shí)驗(yàn)室檢測 血清生化學(xué)指標(biāo): ALT、AST、ALP、TBil、DBil、GGT、Alb、總蛋白(TP)采用OLMPUS-AU5400生化檢測儀;免疫學(xué)指標(biāo):血清IgG 和IgM采用美國 Beckman coulter Array 360 全自動特種蛋白分析儀檢測。自身免疫性肝病相關(guān)抗體:ANA、SMA、抗LKM、抗線粒體抗體(AMA)、抗可溶性肝抗原抗體/抗肝-胰抗體(SLA/LP)、抗SP100和抗gp210采用ELISA及免疫印跡法(試劑購自德國歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司)。

    1.4.2 IP-10及SNP檢測 血清IP-10水平檢測:采用液相芯片技術(shù)(Luminex技術(shù)),Bio-Plex 200 system(美國Bio-Rad公司)。IP-10(rs56061981位點(diǎn))SNP分型:TaqMan探針基因分型,上?;倒緳z測(羅氏LightCycler480實(shí)時熒光定量PCR儀,LCS480 1.5.1.62軟件進(jìn)行基因分型)。

    1.4.3 超聲引導(dǎo)下肝穿刺活組織檢查 超聲引導(dǎo)下肝穿刺活組織檢查患者102例:B 超引導(dǎo)下MAGNUM活檢系統(tǒng)(Bard Peripheral Vascular, Inc, 美國)經(jīng)皮穿刺取肝組織,穿刺肝組織長度>1.0 cm;10%中性福爾馬林液固定標(biāo)本及石蠟包埋。4 μm 連續(xù)切片,分別做HE、Masso三色、Gomori網(wǎng)織纖維和D-PAS染色。

    2 結(jié)果

    2.1 一般資料 168例DILI患者中男56例,女112例;年齡19~70歲,平均(47.3±12.5)歲。其中AI-DILI組72例,男22例,女50例;年齡19~69歲,平均(48.0±12.0)歲。非AI-DILI組96例,男34 例,女62例;年齡22~70 歲,平均(50.6±11.2)歲,兩組患者在年齡、性別構(gòu)成比上差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.05)。用藥情況分析:患者中應(yīng)用中草藥/中成藥及膳食補(bǔ)充劑74例(44.05%),其中應(yīng)用較多的有治療皮膚病、骨科疾病藥物及染發(fā)劑、膳食補(bǔ)充劑。應(yīng)用解熱鎮(zhèn)痛藥28例(16.67%),抗微生物藥21例(12.50%),降脂藥16例(9.52%),調(diào)節(jié)血糖藥11例(6.55%),抗腫瘤藥(化療藥及靶向藥)8例(4.76%),廣譜抗病毒藥6例(3.57%),抗癲癇藥4例(2.38%)。

    2.2 AI-DILI組與非AI-DILI組臨床指標(biāo)比較 兩組間AST及IgG水平差異均存在統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.05)(表1)。在自身抗體檢測方面:AI-DILI組自身抗體陽性有66例(91.67%),依據(jù)發(fā)生比例的高低分別是ANA、SMA、ACA、SSA/SSB、細(xì)胞骨架抗體、APCA。非AI-DILI組合并自身抗體陽性12例(12.5%),兩組之間合并自身抗體陽性的比例存在顯著差異 (χ2=103.8,P<0.05)。168例患者中有64例(AI-DILI組38例,非AI-DILI組26例)為重度肝損傷[TBil≥5×ULN(85.5 μmol/L),伴或不伴 INR≥ 1.5],其余均為輕度及中度肝損傷,均予以保肝支持治療。重度肝損傷患者應(yīng)用甲強(qiáng)龍的劑量為(0.65± 0.15)mg·kg-1·d-1,屬于中小劑量,激素應(yīng)用后首次調(diào)整劑量時間(減量或停用)為(8.0±4.1)d,其中直接停用28例,逐漸減量36例[應(yīng)用時間<1月(短療程)21例,3月內(nèi)(中療程)15例]。所有患者隨訪時間為3~17個月,62例(36.9%)患者出現(xiàn)病情反復(fù)(ALT或TBil波動),但其AIH 簡易評分均未達(dá)到 AIH 的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

    表1 AI-DILI組與非AI-DILI組血清生化學(xué)指標(biāo)及免疫指標(biāo)

    2.3 IP-10基因多態(tài)性(rs56061981)與DILI臨床轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性 IP-10基因rs56061981位點(diǎn)基因型頻率與人種關(guān)系并不顯著(依據(jù)NCBI官方SNP數(shù)據(jù)):C等位基因在非洲人群比例略低,其余如亞洲人群或歐洲人群比例較高(86.38% vs 93.33%,P=0.07)。本研究顯示,CC基因型在DILI患者中的分布頻率與一般人群[13]相當(dāng)(69.05% vs 78.89%,P=0.43),而且攜帶C等位基因也在二者間大致相同(78.57% vs 88.98%,P=0.25)(表2)。這提示IP-10基因多態(tài)性似乎并不能影響DILI的易感性以及人群的分布差異性。

    AI-DILI組的患者CC基因型頻率顯著高于非AI-DILI組(χ2=4.592,P=0.03),同時AI-DILI組攜帶C等位基因頻率顯著高于非AI-DILI組(χ2=4.41,P=0.04)(表2)。

    2.4 DILI治療過程中血清IP-10表達(dá)的變化 AI-DILI患者基線IP-10水平顯著高于非AI-DILI患者[(627.99±198.07] pg/ml vs (378.13±218.45) pg/ml,t=7.34,P<0.05](圖1a),且與基線AST水平及AIH評分呈正相關(guān)(r值分別為0.67、0.79,P值均<0.05)。

    隨著治療進(jìn)展,所有患者2周時IP-10水平逐漸下降,4周時IP-10水平顯著下降,12周及治療結(jié)束時IP-10水平相接近,整體的變化趨勢差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=6.305,P<0.05)(圖1b);分組分析顯示其變化趨勢在AI-DILI組更為明顯(F=9.42,P<0.05),與基線比較治療2周時AI-DILI組水平顯著下降[(627.99±198.07) pg/ml vs (423.14±221.65) pg/ml,t=7.62,P=0.04),繼續(xù)治療至4周IP-10水平降至(311.23±171.90)pg/ml,12周及治療結(jié)束時分別為(230.73 ±128.26)pg/ml和(208.33±68.95)pg/ml(圖1c);非AI-DILI組的變化趨勢無顯著差異(F=1.07,P=0.23)(圖1d)。

    表2 IP-10 rs56061981基因型及等位基因在不同組間的分布頻率

    注:a,2組患者IP-10水平比較;b,所有患者IP-10變化;

    2.5 基線血清IP-10的水平預(yù)測AI-DILI 基于ROC曲線進(jìn)一步分析基線IP-10水平對DILI伴自免現(xiàn)象的預(yù)測作用,結(jié)果顯示,基線IP-10預(yù)測AI-DILI的ROC曲線下面積為0.832,敏感度、特異度分別為0.846、0.867,最佳閾值為527.03 pg/ml(圖2)。

    2.6 血清IP-10水平聯(lián)合IP-10基因多態(tài)性預(yù)測AI-DILIIP-10 rs56061981位點(diǎn)CC基因型在AI-DILI組分布頻率顯著高于非AI-DILI組,故進(jìn)一步分析IP-10 CC基因型及血清IP-10變化聯(lián)合預(yù)測DILI伴自身免疫現(xiàn)象。在IP-10 CC基因型的116例患者中,基線IP-10水平<527.03 pg/ml的患者有51例(43.97%),≥527.03 pg/ml的患者65例(56.03%),而在52例CT/TT基因型患者中,<527.03 pg/ml的患者有32例(61.54%),≥527.03 pg/ml的患者20例(38.46%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.89,P=0.03)(圖3a)。而且,CC基因型患者中基線IP-10水平≥527.03 pg/ml的有80%(52/65)為AI-DILI,基線IP-10水平<527.03 pg/ml的患者有7.8%(4/51)為AI-DILI;而在CT/TT基因型患者中基線IP-10水平≥527.03 pg/ml的患者僅有50%(10/20)為AI-DILI,基線IP-10水平<527.03 pg/ml的有31.25%(6/32)為AI-DILI,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2值分別為13.28、59.80,P值分別為0.006、<0.01)(圖3b)。聯(lián)合CC基因型及基線IP-10≥527.03 pg/ml,預(yù)測AI-DILI發(fā)生的陽性預(yù)測值為92.84%,陰性預(yù)測值為86.33%。

    圖3 IP-10基因多態(tài)性(rs56061981)結(jié)合基線IP-10水平

    3 討論

    2010年Russmann等[14]研究顯示,宿主遺傳易感背景以及適應(yīng)性免疫在DILI的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要作用,提示炎性細(xì)胞因子的釋放及相互作用貫穿于整個DILI發(fā)生、發(fā)展的全過程,在免疫應(yīng)答中發(fā)揮了關(guān)鍵作用,主要包括IL、干擾素及趨化因子等。而IP-10作為CXC趨化因子家族中重要的炎癥因子,能夠特異性活化表達(dá)CXCR3的相關(guān)細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的活化,并與干擾素相互協(xié)同,在各種肝臟疾病中發(fā)揮促炎作用,如病毒性肝炎、自身免疫性肝炎以及刀豆蛋白A誘導(dǎo)的DILI[15]。而宿主基因多態(tài)性現(xiàn)象,尤其是基因啟動子區(qū)的SNP可以影響細(xì)胞因子的表達(dá),從而使宿主對抗原免疫反應(yīng)的強(qiáng)度存在一定差異。通過細(xì)胞因子發(fā)揮免疫效能是宿主免疫系統(tǒng)執(zhí)行效應(yīng)的主要方式,故選擇宿主目的基因時,宿主基因多態(tài)性的不同需要進(jìn)一步結(jié)合其下游抗病毒蛋白或者細(xì)胞因子表達(dá)差異進(jìn)行綜合分析[16-18]。

    首先,本研究顯示IP-10 SNP的確會影響IP-10血清水平表達(dá)差異:IP-10基因rs56061981位點(diǎn)CC基因型患者其基線IP-10表達(dá)顯著高于非CC基因型,這與最近研究[19-20]結(jié)果一致,IP-10啟動子區(qū)rs56061981位點(diǎn)的突變改變了核內(nèi)蛋白的親和力進(jìn)而調(diào)節(jié)IP-10的表達(dá),將增強(qiáng)IP-10的轉(zhuǎn)錄和肝臟炎癥反應(yīng),使男性慢性乙型肝炎患者干擾素治療效果提高,出現(xiàn)HBeAg及HBsAg滴度下降,將是一個新的潛在性的SNP位點(diǎn)。其次,本研究顯示IP-10基因rs56061981位點(diǎn)CC基因型在AI-DILI組的分布頻率顯著高于非AI-DILI組。第三,本研究也顯示AI-DILI組患者IP-10水平顯著高于非AI-DILI組,隨著治療的進(jìn)行,DILI患者血清IP-10水平總的變化趨勢為:2周時IP-10水平開始下降,4周時明顯低于基線水平,12周及治療結(jié)束時IP-10水平相接近;進(jìn)一步依據(jù)分組分析顯示,該變化趨勢在AI-DILI組更為顯著,而非AI-DILI組各治療時間點(diǎn)IP-10變化不具備統(tǒng)計學(xué)差異。

    基于上述相關(guān)性,將宿主IP-10基因多態(tài)性結(jié)合其細(xì)胞因子表達(dá)水平共同來預(yù)測DILI伴自身免疫現(xiàn)象的發(fā)生。CC基因型患者中基線IP-10水平≥527.03 pg/ml有80%(52/65)為AI-DILI,CC基因型聯(lián)合基線IP-10≥527.03 pg/ml預(yù)測AI-DILI的效能顯著提高。迄今為止,IP-10 SNP是否確定影響血清IP-10水平的表達(dá),二者是否與AI-DILI易感性有關(guān)鮮有報道,本研究顯示這二者與AI-DILI的發(fā)生密切相關(guān)。Xie等[21]研究也提示IP-10血清表達(dá)水平與DILI的嚴(yán)重程度顯著相關(guān),并依據(jù)該指標(biāo)建立模型對DILI嚴(yán)重程度進(jìn)行預(yù)測。另外,也有研究[22]顯示,IP-10還可用于預(yù)測急性HIV感染時CD4+T淋巴細(xì)胞下降趨勢以及疾病的進(jìn)展,而IP-10 rs56061981位點(diǎn)可作為潛在保護(hù)性SNP位點(diǎn)預(yù)測肺結(jié)核患者疾病嚴(yán)重程度,聯(lián)合IP-10 水平其預(yù)測價值更為顯著[23]。

    當(dāng)AI-DILI與AIH鑒別診斷存在困難時,可使用糖皮質(zhì)激素,觀察對激素的應(yīng)答效果,前者應(yīng)答更快,需要的劑量也較小,最為重要的是停用糖皮質(zhì)激素不會出現(xiàn)病情的反復(fù),而后者停用激素會出現(xiàn)病情反復(fù)。故在臨床表現(xiàn)及病理學(xué)上鑒別診斷存在困難時,治療后隨訪是鑒別的重要手段。本研究隨訪時間為3~17個月,但還需要長期隨訪進(jìn)行驗(yàn)證。

    綜上所述,本研究證實(shí)了IP-10在鑒別診斷DILI伴自身免疫現(xiàn)象的臨床意義,同時IP-10基因多態(tài)性將影響血清IP-10水平的表達(dá),二者聯(lián)合預(yù)測AI-DILI的效能顯著提高。除了聯(lián)合宿主基因多態(tài)性及其下游編碼的蛋白表達(dá)水平共同預(yù)測以外,筆者將在之后的AI-DILI發(fā)病機(jī)制研究中論證作為效應(yīng)細(xì)胞因子,IP-10聯(lián)合干擾素γ影響CD4+輔助性T淋巴細(xì)胞1的功能。

    猜你喜歡
    基線多態(tài)性基因型
    單核苷酸多態(tài)性與中醫(yī)證候相關(guān)性研究進(jìn)展
    適用于MAUV的變基線定位系統(tǒng)
    航天技術(shù)與甚長基線陣的結(jié)合探索
    科學(xué)(2020年5期)2020-11-26 08:19:14
    一種改進(jìn)的干涉儀測向基線設(shè)計方法
    馬鈴薯cpDNA/mtDNA多態(tài)性的多重PCR檢測
    GlobalFiler~? PCR擴(kuò)增試劑盒驗(yàn)證及其STR遺傳多態(tài)性
    西安地區(qū)育齡婦女MTHFRC677T基因型分布研究
    技術(shù)狀態(tài)管理——對基線更改的控制
    航天器工程(2014年5期)2014-03-11 16:35:50
    BAMBI基因敲除小鼠的繁育、基因型鑒定
    CYP3A4*1G基因多態(tài)性及功能的初步探討
    亚洲,欧美,日韩| 久久人人爽人人片av| 亚洲五月色婷婷综合| 婷婷成人精品国产| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久久精品免费免费高清| 90打野战视频偷拍视频| 电影成人av| 欧美精品一区二区大全| 欧美精品一区二区免费开放| 日本vs欧美在线观看视频| 两个人看的免费小视频| av国产久精品久网站免费入址| 一二三四在线观看免费中文在| 久久人人97超碰香蕉20202| 日韩视频在线欧美| 亚洲,欧美,日韩| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 制服诱惑二区| 午夜av观看不卡| 日本wwww免费看| 一本色道久久久久久精品综合| 2018国产大陆天天弄谢| 伦理电影免费视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久韩国三级中文字幕| netflix在线观看网站| 亚洲国产精品成人久久小说| 丝袜在线中文字幕| 国产精品.久久久| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久精品国产综合久久久| 久久久久久人妻| 热99久久久久精品小说推荐| 这个男人来自地球电影免费观看 | 青春草视频在线免费观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 黄片播放在线免费| 99久国产av精品国产电影| e午夜精品久久久久久久| 国产成人精品久久久久久| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 满18在线观看网站| 只有这里有精品99| 最黄视频免费看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 极品人妻少妇av视频| 欧美国产精品一级二级三级| 久久 成人 亚洲| 男人爽女人下面视频在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲图色成人| 免费看不卡的av| 黑丝袜美女国产一区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 成人国产av品久久久| 多毛熟女@视频| 多毛熟女@视频| 国产av国产精品国产| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 精品少妇内射三级| 日韩免费高清中文字幕av| 日韩 亚洲 欧美在线| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 一级爰片在线观看| 亚洲精品一二三| 女性生殖器流出的白浆| 欧美xxⅹ黑人| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品一二三区在线看| 国产伦理片在线播放av一区| 国产精品成人在线| 高清av免费在线| av卡一久久| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 免费黄网站久久成人精品| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | av电影中文网址| 欧美精品亚洲一区二区| 老汉色∧v一级毛片| 精品亚洲成a人片在线观看| 黄片小视频在线播放| 亚洲欧美精品自产自拍| 一区二区av电影网| 久久久久久久久免费视频了| 老司机深夜福利视频在线观看 | 成人亚洲精品av一区二区| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产精品1区2区在线观看.| 国产一区二区三区视频了| 色在线成人网| 亚洲视频免费观看视频| 久久久精品欧美日韩精品| 1024视频免费在线观看| 99香蕉大伊视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 国内精品久久久久精免费| 国产熟女xx| 亚洲中文字幕日韩| 国产在线观看jvid| 久久久精品欧美日韩精品| www国产在线视频色| 国产熟女xx| 亚洲伊人色综图| 一二三四社区在线视频社区8| 99国产精品一区二区蜜桃av| 后天国语完整版免费观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产乱人伦免费视频| 搡老岳熟女国产| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | cao死你这个sao货| 最新在线观看一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 国内精品久久久久精免费| 欧美激情久久久久久爽电影 | 三级毛片av免费| 国产精品永久免费网站| 精品国产国语对白av| 在线观看www视频免费| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 美女高潮到喷水免费观看| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 亚洲国产欧美一区二区综合| 成人三级做爰电影| 亚洲一区二区三区不卡视频| 日韩欧美三级三区| 99久久精品国产亚洲精品| 日韩精品中文字幕看吧| 天堂√8在线中文| 性少妇av在线| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久中文字幕人妻熟女| 九色国产91popny在线| 久久人人97超碰香蕉20202| 一夜夜www| 色综合欧美亚洲国产小说| 精品国产国语对白av| 国产一区二区三区视频了| www.自偷自拍.com| 丰满的人妻完整版| 亚洲av熟女| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 精品高清国产在线一区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 在线免费观看的www视频| 欧美激情久久久久久爽电影 | 51午夜福利影视在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 色播在线永久视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 深夜精品福利| 这个男人来自地球电影免费观看| 多毛熟女@视频| 日韩国内少妇激情av| 日本五十路高清| 精品国产乱码久久久久久男人| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 中文字幕高清在线视频| 国产亚洲精品一区二区www| 国产高清激情床上av| 午夜精品在线福利| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 色av中文字幕| 乱人伦中国视频| 久久亚洲真实| 91在线观看av| 欧美午夜高清在线| 国产97色在线日韩免费| 身体一侧抽搐| 日韩三级视频一区二区三区| 国产麻豆成人av免费视频| 久久精品国产综合久久久| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久久久久大精品| 无人区码免费观看不卡| 99国产精品99久久久久| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲精品粉嫩美女一区| bbb黄色大片| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲熟女毛片儿| 午夜福利一区二区在线看| 最近最新免费中文字幕在线| 日本在线视频免费播放| 国产亚洲av高清不卡| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 日本在线视频免费播放| 又紧又爽又黄一区二区| 免费av毛片视频| 国产色视频综合| 免费观看精品视频网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 丁香六月欧美| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 午夜福利免费观看在线| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美不卡视频在线免费观看 | 99热只有精品国产| 中出人妻视频一区二区| 一进一出抽搐gif免费好疼| 日本a在线网址| 脱女人内裤的视频| 国产一区在线观看成人免费| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 久久香蕉精品热| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| 久久国产精品影院| а√天堂www在线а√下载| 两个人看的免费小视频| av视频免费观看在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 精品国产亚洲在线| 18美女黄网站色大片免费观看| 看黄色毛片网站| 宅男免费午夜| 国产精品 欧美亚洲| www.自偷自拍.com| 男人的好看免费观看在线视频 | 一级毛片高清免费大全| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| www.熟女人妻精品国产| 亚洲自拍偷在线| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 天天添夜夜摸| 国产精品野战在线观看| 十八禁网站免费在线| 人妻久久中文字幕网| 午夜福利高清视频| tocl精华| 成人特级黄色片久久久久久久| 51午夜福利影视在线观看| 91精品国产国语对白视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲第一av免费看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲人成电影观看| 成年版毛片免费区| 成在线人永久免费视频| 91精品国产国语对白视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产国语露脸激情在线看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲九九香蕉| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产精品一区二区三区四区久久 | 国产激情欧美一区二区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 欧美另类亚洲清纯唯美| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 国产精品久久电影中文字幕| 99re在线观看精品视频| 狂野欧美激情性xxxx| 97碰自拍视频| 99久久国产精品久久久| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 人成视频在线观看免费观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 女性生殖器流出的白浆| 免费观看精品视频网站| 亚洲av成人av| 亚洲在线自拍视频| 深夜精品福利| 人人澡人人妻人| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 人人妻人人澡人人看| 在线观看www视频免费| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 最新美女视频免费是黄的| 妹子高潮喷水视频| 日本 av在线| 桃红色精品国产亚洲av| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 一区二区三区高清视频在线| 国产av精品麻豆| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲精品在线美女| or卡值多少钱| 色综合欧美亚洲国产小说| 人人澡人人妻人| 国产三级在线视频| 丝袜人妻中文字幕| 午夜日韩欧美国产| 两个人免费观看高清视频| 波多野结衣一区麻豆| 午夜福利影视在线免费观看| 久热这里只有精品99| 在线观看免费午夜福利视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 99在线人妻在线中文字幕| 久久国产精品人妻蜜桃| 18禁国产床啪视频网站| 精品第一国产精品| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精品一区二区免费欧美| 国产成年人精品一区二区| 午夜久久久久精精品| 无遮挡黄片免费观看| 一进一出抽搐动态| 自线自在国产av| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 成人特级黄色片久久久久久久| 18美女黄网站色大片免费观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 日本 欧美在线| 曰老女人黄片| 最近最新免费中文字幕在线| 国产亚洲av高清不卡| 日本 欧美在线| 成年版毛片免费区| 久久精品91无色码中文字幕| 久久国产精品影院| 大香蕉久久成人网| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产成人影院久久av| 午夜激情av网站| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲国产精品合色在线| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 色播亚洲综合网| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲精华国产精华精| 午夜激情av网站| 免费搜索国产男女视频| 麻豆成人av在线观看| 国产精品久久视频播放| 亚洲中文字幕日韩| 一区在线观看完整版| 999精品在线视频| tocl精华| 男人舔女人的私密视频| 很黄的视频免费| 久久欧美精品欧美久久欧美| 最新在线观看一区二区三区| 啦啦啦免费观看视频1| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲国产精品999在线| 久久久国产成人精品二区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 在线av久久热| 午夜福利欧美成人| 高清在线国产一区| 国产免费av片在线观看野外av| 国产激情久久老熟女| avwww免费| 国产成人啪精品午夜网站| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 啦啦啦免费观看视频1| 欧美成人免费av一区二区三区| 啦啦啦免费观看视频1| 国产亚洲欧美精品永久| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲avbb在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 9色porny在线观看| 国产一区二区激情短视频| 看片在线看免费视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 9191精品国产免费久久| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲国产精品合色在线| 视频在线观看一区二区三区| 欧美日韩黄片免| 国产av又大| 少妇粗大呻吟视频| 99久久精品国产亚洲精品| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 黄色女人牲交| 我的亚洲天堂| 色综合站精品国产| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 两个人视频免费观看高清| 曰老女人黄片| 午夜福利视频1000在线观看 | 可以免费在线观看a视频的电影网站| 免费少妇av软件| www.精华液| 91麻豆精品激情在线观看国产| 9色porny在线观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 看片在线看免费视频| 黑丝袜美女国产一区| 成人永久免费在线观看视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲成人国产一区在线观看| 丁香六月欧美| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产精品 国内视频| 亚洲欧美激情在线| 亚洲人成电影免费在线| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 高清在线国产一区| 黄色视频不卡| 搞女人的毛片| 一级,二级,三级黄色视频| 在线观看www视频免费| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲成人精品中文字幕电影| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 18禁国产床啪视频网站| 久久 成人 亚洲| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 男人的好看免费观看在线视频 | 在线观看www视频免费| 操出白浆在线播放| 搡老岳熟女国产| 高清在线国产一区| 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲专区字幕在线| 一级,二级,三级黄色视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 99久久国产精品久久久| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 可以在线观看的亚洲视频| 激情视频va一区二区三区| cao死你这个sao货| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产欧美日韩一区二区三区在线| 青草久久国产| 国产亚洲精品久久久久久毛片| tocl精华| 色在线成人网| 亚洲天堂国产精品一区在线| videosex国产| 女性被躁到高潮视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 日韩中文字幕欧美一区二区| 精品国产一区二区久久| 男女下面进入的视频免费午夜 | 欧美乱码精品一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 最新在线观看一区二区三区| 国产免费av片在线观看野外av| 免费观看精品视频网站| 国产伦人伦偷精品视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 男人舔女人下体高潮全视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 免费高清在线观看日韩| av免费在线观看网站| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲国产精品999在线| 日韩欧美国产在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲av五月六月丁香网| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 免费看a级黄色片| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲av成人av| 99国产精品一区二区三区| 亚洲人成电影观看| av中文乱码字幕在线| av中文乱码字幕在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产精品九九99| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 日韩大码丰满熟妇| 自线自在国产av| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 99精品欧美一区二区三区四区| 9191精品国产免费久久| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 国产精品 欧美亚洲| 啦啦啦 在线观看视频| 不卡av一区二区三区| a在线观看视频网站| 波多野结衣高清无吗| 美女扒开内裤让男人捅视频| 黄色视频不卡| 欧美不卡视频在线免费观看 | 高清毛片免费观看视频网站| 18禁观看日本| 日韩欧美在线二视频| 国产一区二区在线av高清观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产色视频综合| 色在线成人网| 久久久久久久久免费视频了| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产亚洲av高清不卡| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲视频免费观看视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 午夜免费激情av| 亚洲精品一区av在线观看| 成人18禁在线播放| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲专区国产一区二区| 精品一区二区三区四区五区乱码| 美女午夜性视频免费| 怎么达到女性高潮| 大型av网站在线播放| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 黄色视频不卡| 国语自产精品视频在线第100页| 女警被强在线播放| 黄色女人牲交| 在线观看舔阴道视频| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲自拍偷在线| 91老司机精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一区二区三区高清视频在线| 欧美中文综合在线视频| 91成年电影在线观看| 亚洲五月色婷婷综合| 极品人妻少妇av视频| 宅男免费午夜| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 午夜精品在线福利| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 69av精品久久久久久| 久久久久久人人人人人| 国产精品 欧美亚洲| 免费高清在线观看日韩| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产成人欧美在线观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 精品熟女少妇八av免费久了| 午夜福利一区二区在线看| 9191精品国产免费久久| 久久性视频一级片| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 麻豆一二三区av精品| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 久久影院123| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产一区二区三区视频了| 午夜福利成人在线免费观看| 国产精品九九99| 一级黄色大片毛片| 女人被狂操c到高潮| 亚洲久久久国产精品| 欧美国产精品va在线观看不卡| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产av又大| 国产主播在线观看一区二区| 咕卡用的链子| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久狼人影院| 中文字幕高清在线视频| 大香蕉久久成人网| 午夜福利欧美成人| 亚洲国产欧美网| 久久九九热精品免费| 国产一区在线观看成人免费| 看黄色毛片网站| 91国产中文字幕| 日本欧美视频一区| 热re99久久国产66热| 一边摸一边抽搐一进一小说| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲色图综合在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 波多野结衣av一区二区av| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 午夜福利高清视频| 正在播放国产对白刺激| 18禁美女被吸乳视频| 午夜视频精品福利| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 大型黄色视频在线免费观看| 久久热在线av| av网站免费在线观看视频| 国产三级在线视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 在线观看午夜福利视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久久久久久久中文| 国产av又大| 免费av毛片视频| 757午夜福利合集在线观看| 很黄的视频免费| 天堂√8在线中文|