9種殺菌劑對(duì)藍(lán)莓枝枯病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

毛雪琴，張慧琴，黃武權(quán)，王艷麗，孫國(guó)倉(cāng)*

(1.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院a植物保護(hù)與微生物研究所，b園藝研究所，浙江 杭州 310021；2.紹興市上虞區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，浙江 紹興 312300)

藍(lán)莓，學(xué)名越桔，為杜鵑花科越桔屬多年生落葉或常綠果樹(shù)，呈灌木。在栽培學(xué)上，藍(lán)莓屬于小漿果類果樹(shù)，原產(chǎn)北美洲，是地球上少有的真正的藍(lán)色食物之一。藍(lán)莓果實(shí)近圓形，單果重0.5～2.5 g，最大可達(dá)3.5～5.0 g，果肉細(xì)膩，種子極小，其果味甜酸適度，風(fēng)味獨(dú)特，具有香爽宜人的香氣。藍(lán)莓可鮮食，也可加工成果汁飲料、果酒飲品等[1]。

我國(guó)對(duì)藍(lán)莓引種栽培研究始于20世紀(jì)末[2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展，截至2015年，我國(guó)藍(lán)莓種植面積超過(guò)3萬(wàn)hm2[3]，浙江省藍(lán)莓栽培面積超過(guò)5 300 hm2，產(chǎn)量超過(guò)2萬(wàn)t，省內(nèi)種植已遍布11個(gè)地市，主產(chǎn)區(qū)以浙北的紹興、杭州、寧波以及浙中的臺(tái)州、金華為主。隨著生產(chǎn)面積的不斷擴(kuò)大，藍(lán)莓病害也日趨嚴(yán)重，尤其是藍(lán)莓枝枯病，已嚴(yán)重影響和制約藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。近年來(lái)，浙江上虞地區(qū)藍(lán)莓園內(nèi)枝枯病發(fā)生逐年加重，病害造成枝條萎蔫枯死，花朵、果實(shí)干枯脫落，常造成幾十株甚至上百株樹(shù)體死亡。本文通過(guò)調(diào)查并進(jìn)行病原菌分離，經(jīng)形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)方法鑒定，探明引起該地區(qū)藍(lán)莓枝枯病的致病菌為烏飯樹(shù)擬莖點(diǎn)霉(Phomopsisvaccinia)，并選用9種高效低毒的新型殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，以期為該病害的田間防治試驗(yàn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試病原菌

從位于浙江上虞的紹興鑫和生態(tài)農(nóng)業(yè)藍(lán)莓種植園采集藍(lán)莓枝枯病病株，并用組織分離法進(jìn)行病原菌的分離純化，獲得菌株BPV-17-21，經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，確定菌株為烏飯樹(shù)擬莖點(diǎn)霉(Phomopsisvaccinii)，將菌株BPV-17-21置于4 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 供試藥劑

5%己唑醇微乳劑(惠州市中迅化工有限公司)；70%丙森鋅可濕性粉劑(拜耳作物科學(xué)公司)；0.3%丁子香酚可溶液劑(南通神雨藥業(yè)有限公司)；3%中生菌素可濕性粉劑(深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司)；43%戊唑醇懸浮劑(拜耳作物科學(xué)公司)；80%代森錳鋅可濕性粉劑(陶氏益農(nóng)農(nóng)業(yè)科技有限公司)；3%噻霉酮水乳劑(陜西西大華特科技實(shí)業(yè)有限公司)；40%嘧霉胺懸浮劑(廣東中迅龍科股份有限公司)；50%烯酰嗎啉水分散粒劑(海利爾藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司)。

1.3 室內(nèi)毒力測(cè)定

采用菌絲生長(zhǎng)速率法[4-5]測(cè)定9種殺菌劑對(duì)菌株BPV-17-21的毒力，用無(wú)菌水將供試藥液稀釋成一系列梯度濃度：5%己唑醇微乳劑0.8、0.2、0.05、0.012 5、0.003 125 μg·mL-1；70%丙森鋅可濕性粉劑2.025、0.675、0.225、0.075、0.025 μg·mL-1；0.3%丁子香酚可溶液劑5 000、1 000、200、40、8 μg·mL-1；3%中生菌素可濕性粉劑25 000、5 000、1 000、200、40；43%戊唑醇懸浮劑0.202 5、0.067 5、0.022 5、0.007 5、0.002 5 μg·mL-1；80%代森錳鋅可濕性粉劑2.025、0.675、0.225、0.075、0.025 μg·mL-1；3%噻霉酮水乳劑1 000、400、160、64、25.6 μg·mL-1；40%嘧霉胺懸浮劑8、2、0.5、0.125、0.031 25 μg·mL-1；50%烯酰嗎啉水分散粒劑30、15、7.5、3.75、1.875 μg·mL-1。稀釋后配制含藥PDA平板。取培養(yǎng)4 d的病原菌菌落，打取直徑為6 mm的菌餅，用接種針將菌餅倒扣在含藥培養(yǎng)基中心點(diǎn)上，每皿接入1個(gè)菌餅，以加入無(wú)菌水的培養(yǎng)基為對(duì)照。每處理重復(fù)3次。接菌后將培養(yǎng)皿倒置放入28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)，5 d后采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌落直徑平均值，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)平均抑制率。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計(jì)算出各藥劑毒力回歸方程、EC50值和相關(guān)系數(shù)，根據(jù)EC50值評(píng)價(jià)殺菌劑毒力大小。

2 結(jié)果與分析

通過(guò)生長(zhǎng)速率法測(cè)定9種藥劑對(duì)藍(lán)莓枝枯病菌的毒力，各藥劑對(duì)藍(lán)莓枝枯病菌的抑制效果差異明顯(圖1)，由測(cè)定結(jié)果求得毒力回歸方程(表1)。抑制作用從大到小依次為5%己唑醇>43%戊唑醇>70%丙森鋅>80%代森錳鋅>40%嘧霉胺>50%烯酰嗎啉>0.3%丁子香酚>3%噻霉酮>3%中生菌素。其中，己唑醇的抑制作用最強(qiáng)，EC50值為0.0166 μg·mL-1；其次是戊唑醇、丙森鋅和代森錳鋅，EC50值分別為0.076 1、0.086 6和0.105 3 μg·mL-1；嘧霉胺的抑制作用再次之，EC50值為0.546 6 μg·mL-1；烯酰嗎啉、丁子香酚和噻霉酮的抑制作用較弱，EC50值分別為13.382 1 μg·mL-1、39.351 7 μg·mL-1和55.132 1 μg·mL-1；中生菌素的抑制效果最差，EC50值為179.293 8 μg·mL-1。

A—5%己唑醇；B—43%戊唑醇；C—70%丙森鋅;D—80%代森錳鋅；E—40%嘧霉胺；F—50%烯酰嗎啉；G—0.3%丁子香酚；H—3%噻霉酮；I—3%中生菌素；J—無(wú)菌水對(duì)照。圖1 9種藥劑對(duì)藍(lán)莓枝枯病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果

表1 9種藥劑對(duì)藍(lán)莓枝枯病菌的毒力

3 小結(jié)與討論

室內(nèi)毒力測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果表明，9種藥劑對(duì)藍(lán)莓枝枯病菌菌絲生長(zhǎng)均有不同程度的抑制作用，其中5%己唑醇的抑制作用最強(qiáng)，EC50值僅為0.016 6 μg·mL-1，可優(yōu)先考慮用于田間防效試驗(yàn)；43%戊唑醇、70%丙森鋅、80%代森錳鋅和40%嘧霉胺的抑制作用也較好，EC50值在0.07～0.6 μg·mL-1之間，可以進(jìn)一步用于田間防效試驗(yàn)；50%烯酰嗎啉、0.3%丁子香酚、3%噻霉酮和3%中生菌素的毒力相對(duì)較弱，EC50值大于10 μg·mL-1。己唑醇

和戊唑醇都屬三唑類殺菌劑，是甾醇脫甲基化抑制劑，對(duì)真菌尤其是擔(dān)子菌門和子囊菌門引起的病害有廣譜的保護(hù)和治療作用；丙森鋅和代森錳鋅都是廣譜、高效的保護(hù)性殺菌劑；嘧霉胺是苯氨基嘧啶類殺菌劑，抑制病菌侵染酶的分泌從而阻止病菌侵染，并殺死病菌。以上3類殺菌劑的作用原理不同，可以在田間防效試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，考慮三類藥劑的輪流施用，以達(dá)成高效防治病害，并有效防止抗藥性的產(chǎn)生。

本研究?jī)H就9種殺菌劑對(duì)烏飯樹(shù)擬莖點(diǎn)霉菌的室內(nèi)毒力進(jìn)行了分析，并未開(kāi)展藍(lán)莓枝枯病防治的田間試驗(yàn)，因氣候和環(huán)境因子對(duì)藥劑藥效的發(fā)揮具有較大影響，其田間防治效果還有待進(jìn)一步研究。