甜瓜、茄子及棉花3種作物葉片中呋蟲胺的超高效液相-串聯(lián)質譜儀檢測方法

李清華，尹明明，陳福良，李文明*

（1.河南農業(yè)大學 植物保護學院，鄭州 450000；2.中國農業(yè)科學院 植物保護研究所 農業(yè)部作物有害生物綜合治理重點實驗室，北京 100193）

呋蟲胺(dinotefuran)屬于第三代新煙堿類殺蟲劑，具有觸殺、胃毒、根部強內吸性、殺蟲譜廣和防效高等特點[1]，被廣泛用于防治小麥、水稻、棉花和蔬菜等作物的蚜蟲、葉蟬和飛虱等害蟲，對鞘翅目、雙翅目和鱗翅目害蟲有較高防效。呋蟲胺廣泛應用于各種作物，因此對其進行安全性評價至關重要。常見呋蟲胺殘留檢測方法有液相色譜(LC)、高效液相色譜(HPLC)、液相色譜-質譜(LC-MS)、液相色譜-串聯(lián)質譜(LC-MS/MS)、高效液相色譜-串聯(lián)質譜(HPLC-MS/MS)和超高效液相色譜-串聯(lián)質譜(UPLC-MS/MS)等方法。其中超高效液相色譜-串聯(lián)質譜儀(UPLC-MS/MS)作為殘留檢測的儀器，已用于檢測棉花[2]、黃瓜[3]、豇豆[4]、水稻[5]和甘藍[6]等作物中的呋蟲胺殘留。對棉花[2]中呋蟲胺的檢測已有對棉花植株、棉籽和土壤檢測的報道，未見對棉花葉片樣品進行殘留檢測分析，也未見有關甜瓜和茄子中呋蟲胺殘留檢測方法的研究報道。

因此，本文采用改進的QuEChERS方法，建立了超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質譜聯(lián)用儀檢測呋蟲胺在甜瓜、茄子及棉花葉片中殘留分析方法，旨在為進一步研究呋蟲胺在上述3種作物葉片中的劑量分布與田間藥效相關性奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質譜聯(lián)用儀(ACQUITY UPLC-TQD)，美國Waters公司；BSA224S-CW電子天平，德國Sartorius公司；Vottex QL-861渦旋儀，江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司；Milli-Q超純水儀，美國Milli-pore公司。

100%呋蟲胺標樣，日本三井公司；乙腈(色譜純)，美國Fisher Scientific公司；乙腈(分析純)，國藥集團化學試劑有限公司；甲酸(分析純)，重慶川東化工有限公司；NaCl、無水MgSO4(均為分析純)，國藥集團化學試劑有限公司；PSA、C18，天津Agela公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準溶液配制

標準儲備溶液：準確稱取0.010 0 g呋蟲胺標樣于100 mL容量瓶，用乙腈定容得到100 mg/L呋蟲胺標準儲備溶液，置于4℃冰箱保存。

溶劑標準溶液：吸取一定量的標準儲備液，分別用乙腈稀釋至0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/L，作為一系列梯度標準工作溶液。

基質標準溶液：將呋蟲胺標準溶液分別用基質空白提取液稀釋，得到與標準工作溶液相同濃度的一系列基質標準溶液。

1.2.2 樣品提取與凈化

準確稱取粉碎后的葉片樣品5.0 g于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，振蕩提取10 min，加入1 g NaCl和4 g無水MgSO4，振蕩5 min，4 000 r/min離心5 min；移取1.5 mL上清液于盛有50 mg PSA、50 mg C18和150 mg無水MgSO4的2 mL離心管中，渦旋2 min，5 000 r/min離心5 min，過0.22 μm濾膜至2 mL進樣瓶，待UPLC-MS/MS測。

1.2.3 儀器條件

液相色譜條件：色譜柱Acquity UPLC?BEH C181.7 μm(2.1×50 mm Column，Waters公司)；柱溫：50℃；流速：0.28 mL/min；進樣體積：3 μL；流動相為乙腈和0.2%甲酸水溶液；梯度洗脫：初始為10%乙腈+90%0.2%甲酸水溶液，1 min為65%乙腈+35%0.2%甲酸水溶液，3.50 min為10%乙腈+90%0.2%甲酸水溶液。

質譜條件：電噴霧正離子源ESI+；毛細管電壓3.0 KV；錐孔電壓52 V；離子源溫度150℃；脫溶劑溫度300℃；脫溶劑氣流量500 L/h；錐孔氣流量50 L/h；表1多重反應監(jiān)測(MRM)。圖1為0.005 mg/L呋蟲胺標樣液相色譜圖，相對保留時間為1.73 min，保留時間較短，能較大程度節(jié)省檢測時間。

表1 呋蟲胺UPLC-MS/MS檢測條件參數

1.2.4添加回收試驗

分別在空白甜瓜葉片、茄子葉片和棉花葉片樣品中添加一定濃度的呋蟲胺標準溶液。在每一樣品中分別添加質量濃度為0.01、0.1、1.0 mg/kg的呋蟲胺，每個添加濃度重復5次，混勻靜置30 min，采用1.2.2章節(jié)所述樣品提取和凈化方法處理，1.2.3章節(jié)所述方法檢測。

2 結果與分析

2.1 標準曲線、線性關系與基質效應

按1.2.3章節(jié)所述方法對呋蟲胺標準工作溶液進行測定，以進樣濃度為橫坐標(x)，峰面積為縱坐標(Y)，繪制標準工作曲線見圖2。在0.005～2.0 mg/L時，呋蟲胺標準溶液線性回歸方程Y=81 070x+2 527.2，相關系數為R=0.999 2。結果表明，呋蟲胺在0.005～2.0 mg/L范圍內具有良好的線性關系。

基質效應(ME)=基質標準曲線斜率/溶劑標準曲線斜率，當ME＞1.1時，表示存在基質增強效應；ME＜0.9時，表示基質效應減弱；0.9＜ME＜1.1時，基質效應可以忽略[7]。呋蟲胺在各基質中線性回歸方程見表2。本試驗中，ME(甜瓜葉片)=1.17；ME(茄子葉片)=0.86；ME(棉花葉片)=0.97。因此，棉花葉片對呋蟲胺的基質效應可以忽略，在進一步試驗中，對甜瓜和茄子葉片中呋蟲胺的檢測需引入基質匹配外標法進行校正。

圖2 呋蟲胺標準曲線

表2 方法的線性范圍及相關性

2.2 方法的準確度與精密度

表3為呋蟲胺的添加回收率與相對標準偏差。由表3可知在0.01～1.0 mg/kg添加濃度范圍內，甜瓜葉片中的呋蟲胺平均回收率為81%～91%，相對標準偏差為5.55%～7.30%；在茄子葉片樣品中的平均回收率為78%～97%，相對標準偏差為4.17%～5.72%；在棉花葉片中的平均回收率為92%～99%，相對標準偏差為1.41%～6.75%。以最低添加濃度為定量限，呋蟲胺在3種基質中定量限(LOQ)均為0.01 mg/kg。以上結果均滿足葉片中對呋蟲胺吸收劑量的檢測。圖3-5為0.01 mg/kg呋蟲胺在3種基質中的添加回收色譜圖。

表3 添加回收率與相對標準偏差

圖3 0.01 mg/kg呋蟲胺-甜瓜葉片添加回收色譜圖

圖4 0.01 mg/kg呋蟲胺-茄子葉片添加回收色譜圖

圖5 0.01 mg/kg呋蟲胺-棉花葉片添加回收色譜圖

3 結 論

本文建立了甜瓜、茄子和棉花3種作物葉片中呋蟲胺的超高效液相-串聯(lián)質譜儀(UPLC-MS/MS)殘留檢測方法。試驗結果表明，在0.005～2.0 mg/L濃度范圍內，呋蟲胺峰面積與濃度線性關系良好。在0.01～1.0 mg/kg添加濃度范圍內，3種作物葉片中呋蟲胺的平均回收率為78%～99%，相對標準偏差為1.41%～7.30%，定量限(LOQ)為0.01 mg/kg，均符合殘留檢測要求。該方法快速高效，準確度高，重復性好，適用于對甜瓜、茄子及棉花3種作物葉片中呋蟲胺殘留量的檢測。對葉片中呋蟲胺殘留量的檢測，為呋蟲胺在葉片中的劑量分布與田間藥效的相關性研究奠定基礎。