伴丘疹性損害的先天性無毛癥一例HR基因突變檢測

劉偉英 高貴云 鄭璐瑤 李 明

1湖南航天醫(yī)院皮膚科，長沙，410205；2上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院皮膚科，上海，200092

先天性無毛癥是一組罕見的遺傳性皮膚病，具有較強的臨床和遺傳異質(zhì)性，其臨床表現(xiàn)為頭皮或身體其他部位的毛發(fā)缺失或完全脫光，伴或不伴有身體其他系統(tǒng)的損害，根據(jù)表型可分為綜合征型和非綜合征型。先天性少毛癥的遺傳模式常呈常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳以及性連鎖遺傳。伴丘疹性損害的先天性無毛癥(atrichia with papular lesions, APL)的遺傳模式為常染色體隱性遺傳，其致病基因是HR基因[1]。APL患者出生時毛發(fā)正常，出生后不久頭皮毛發(fā)完全脫失且不可逆，大概2歲時，患者開始出現(xiàn)多發(fā)的毛囊丘疹，出現(xiàn)在面部、頭皮、肢端等，某些患者還可見色素減退斑。本研究中，我們對一例APL患兒進行了HR基因的突變檢測，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 患兒，女，8歲。足月順產(chǎn)，出生時毛發(fā)與胎脂粘連于頭皮，洗澡后頭發(fā)、眉毛、睫毛大部分脫落，持續(xù)加重，頭發(fā)脫落后不生長，眉毛、睫毛可再生長但不牢固，長至約1 cm后脫落。1歲時患兒頭發(fā)脫光，近幾個月頭皮出現(xiàn)散在近膚色丘疹。父母均正常，無兄弟姐妹，家族中其他成員無類似表現(xiàn)。體檢：患兒血尿糞常規(guī)、肝功能、免疫功能、微量元素測定均無明顯異常，智力正常。皮膚科檢查：頭發(fā)、眉毛、睫毛全部脫失(圖1a、1b)，頭皮可見散在近膚色毛囊丘疹(圖1c)，無掌跖角化，無指(趾)甲異常。

1.2 外周血基因組DNA抽取 征得知情同意后，抽取患兒及其父母共3人的外周靜脈血各2 mL。同時采集了100名正常對照的外周血。應(yīng)用QIA ampDNA Blood Minikit(德國QIAGEN公司)試劑盒提取基因組DNA。

1.3 PCR擴增和測序 采用Primer 5.0軟件對HR基因的19個外顯子設(shè)計特異性引物，進行常規(guī)PCR擴增，PCR擴增產(chǎn)物純化后使用ABI 3730測序儀進行Sanger測序，測序結(jié)果使用Chromas軟件進行分析，并通過與HR基因cDNA參考序列(NM_005144.4)比較來描述突變。

2 結(jié)果

DNA直接測序結(jié)果顯示HR基因存在復(fù)合雜合突變，分別在第10外顯子發(fā)現(xiàn)移碼突變c.2270delC(圖2a)，導(dǎo)致第757位氨基酸提前終止，變?yōu)闊o義氨基酸。在第15外顯子內(nèi)發(fā)現(xiàn)錯義突變c.3038T>C(圖2b)，導(dǎo)致1013位氨基酸由脯氨酸突變?yōu)榱涟彼帷；純旱膬蓚€突變分別遺傳于其父親和母親。以上2個突變在100名正常對照中均未檢測到(圖2c、2d)，提示它們?yōu)橹虏∽儺惗菃魏塑账岫鄳B(tài)，查閱國內(nèi)外文獻均屬首次報道，在Ensemble、NCBI等數(shù)據(jù)庫均未查到該突變。

1a、1b：患兒頭發(fā)和眉毛脫失；1c：頭皮可見近膚色的毛囊丘疹

圖1臨床圖片

2a：示c.2270delC移碼突變；2b：示c.3038 T>C錯義突變；2c：正常對照序列；2d：正常對照序列

3 討論

伴丘疹性損害的先天性無毛癥患者臨床上可表現(xiàn)為出生時局部或全部的毛發(fā)缺失或者出生時毛發(fā)正常，在出生后的前幾個月脫落，患者還會出現(xiàn)擴散的多發(fā)性角化毛囊性丘疹，好發(fā)于頭皮、面部和四肢?；颊邿o其他外胚層發(fā)育的缺陷，如指甲、汗腺或牙齒等，某些患者軀干部可見色素減退斑。APL的遺傳模式通常為常染色體隱性遺傳。本文報道的患兒為散發(fā)病例，出生后不久毛發(fā)均脫落，同時伴有丘疹損害，為典型的常染色體隱性遺傳APL。

APL通常需要與先天性普禿(alopecia universalis congenita，AUC)進行鑒別診斷，兩種疾病均為常染色體隱性遺傳，且病因都與無毛基因的突變有關(guān)，值得注意的是，AUC患者表現(xiàn)的毛發(fā)脫失和APL幾乎一致，但前者皮膚是正常的，而APL患者會出現(xiàn)擴散的多角化毛囊性丘疹。仔細詢問家族史，根據(jù)典型的臨床表現(xiàn)不難作出診斷。

1954年，Damste等[2]首次報道了APL，1998年Ahmad等[3]在一個以色列-阿拉伯裔的家系中將該病的致病基因定位于染色體8p21[4]，并發(fā)現(xiàn)HR基因為本病的致病基因，該基因含有19個外顯子，只表達在皮膚和大腦，其表達產(chǎn)物是無毛蛋白，分子量為130kDa，含1189個氨基酸，該蛋白功能的缺陷會導(dǎo)致毛發(fā)生長周期的不穩(wěn)定，其可能在第一個毛發(fā)生長周期起作用，由于此蛋白的缺失，毛囊的分化不會被誘導(dǎo)，休止期毛囊不會重新進入生長期，新的毛發(fā)也就無法再生長，進而導(dǎo)致毛發(fā)的脫落。無毛蛋白功能缺失還可導(dǎo)致毛囊結(jié)構(gòu)的不成熟，從而引起多發(fā)性的擴散性毛囊丘疹。

通過對文獻及數(shù)據(jù)庫的檢索，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了30余種不同的HR基因突變，包括不同的突變類型，如錯義突變[5]、無義突變、缺失突變[6]和剪切位點突變[7,8]等。其中國外報道近親結(jié)婚的家系，APL的HR基因的突變均為純合突變。目前已發(fā)現(xiàn)的該基因的突變位點通常分散在整個HR基因上，還未發(fā)現(xiàn)熱點突變區(qū)域。本文報道的患兒家系否認近親結(jié)婚史，患兒攜帶復(fù)合雜合突變，分別為移碼突變c.2270delC和錯義突變c.3038T>C，在國內(nèi)外都屬首次報道。c.2270delC突變導(dǎo)致基因編碼框移碼，即p.S757Ffs*144，致使無毛蛋白截短；c.3038T>C引起患者無毛蛋白的第1013位的脯氨酸由亮氨酸替代，即p.P1013L，我們通過Polyphen-2軟件(http://genetics.bwh.harvard.edu/pph2/)對其進行功能預(yù)測，結(jié)果顯示該突變很可能是有損害的。這些突變可能導(dǎo)致無毛蛋白的功能異常，導(dǎo)致毛發(fā)周期不穩(wěn)定以及毛囊結(jié)構(gòu)不成熟，最終表現(xiàn)為毛發(fā)的脫失以及近膚色的毛囊丘疹。

我們應(yīng)用HR基因突變檢測在1例APL患兒中發(fā)現(xiàn)了2種新的HR基因突變c.2270delC和c.3038T>C，增加了中國漢族人群中HR基因的突變譜，為今后進行產(chǎn)前診斷及遺傳咨詢奠定了基礎(chǔ)。