“丹莓1號(hào)”草莓脫毒組培快繁技術(shù)研究

王 馨 蓋慶巖 焦 驕 付玉杰 劉 婧 王紫瑩

(東北林業(yè)大學(xué)森林植物生態(tài)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱 150040)

草莓(Fragaria×ananassaDuch.)是薔薇科(Rosaceae)草莓屬(Fragaria)多年生草本植物，在世界上大部分國(guó)家和地區(qū)均有分布[1]。草莓果實(shí)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高，富含維生素C、維生素A、胡蘿卜素、花青素等活性物質(zhì)，具有保護(hù)視力、抗衰老、預(yù)防心腦血管疾病、提高免疫力、增強(qiáng)胃腸道蠕動(dòng)等諸多保健功能，故有“水果皇后”之美譽(yù)[2]。此外，據(jù)美國(guó)農(nóng)業(yè)研究中心研究發(fā)現(xiàn)，在8種能夠降低癌死亡率的水果中，草莓居于首位[3]。因此，草莓的種植栽培蘊(yùn)藏著巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

近些年來(lái)，我國(guó)草莓產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，種植面積和產(chǎn)量已躍居世界首位[4]。依據(jù)地理位置和自然條件，可將我國(guó)的草莓產(chǎn)地劃分為3大主產(chǎn)區(qū)，即北方產(chǎn)區(qū)、中部產(chǎn)區(qū)和南方產(chǎn)區(qū)[2]。近些年來(lái)，東北地區(qū)草莓種植產(chǎn)業(yè)發(fā)展也較為迅速，例如大連，丹東等地已有較大規(guī)模的草莓種植基地。目前，相關(guān)科研機(jī)構(gòu)已培育出適宜東北氣候生長(zhǎng)的草莓品種，如“丹莓1號(hào)”“九九”“章姬”“豐香”“碩豐”“明晶”“星都1號(hào)”等品種草莓。其中“九九”草莓最為有名，在丹東地區(qū)廣泛栽培種植，年產(chǎn)量已達(dá)20萬(wàn)噸，使丹東成為我國(guó)最大的草莓基地，被稱(chēng)為“草莓之鄉(xiāng)”。

東北位于溫帶季風(fēng)氣候區(qū)，四季分明，秋冬季持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)且寒冷干燥，春夏季雖暖熱多雨但持續(xù)時(shí)間較短。這種氣候條件使得很多作物無(wú)法在東北地區(qū)更好的生長(zhǎng)，即便能夠生長(zhǎng)也僅一年一熟，產(chǎn)量較低。草莓是一種喜光、喜水，對(duì)溫度有一定要求的作物。受東北地區(qū)氣候條件限制，草莓有效生長(zhǎng)期短，難以利用傳統(tǒng)匍匐莖繁殖的手段獲得大規(guī)模種苗，且即便利用這種傳統(tǒng)方式獲得種苗，也因連作和長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)繁殖而導(dǎo)致植株體內(nèi)積累各種病毒，造成種苗優(yōu)勢(shì)退化，生長(zhǎng)速度慢，抗逆、抗病蟲(chóng)害能力減弱，果實(shí)產(chǎn)量和品質(zhì)嚴(yán)重下降，進(jìn)而降低其經(jīng)濟(jì)價(jià)值，給農(nóng)民增產(chǎn)增收造成極大影響[4]。為了滿(mǎn)足市場(chǎng)需要，進(jìn)一步提高草莓的生產(chǎn)規(guī)模及品質(zhì)，亟需尋求一種可有效解決東北地區(qū)優(yōu)良草莓品種繁育困難的技術(shù)手段。

近些年來(lái)，植物組培快繁技術(shù)在優(yōu)良作物品種和瀕危植物規(guī)?；庇矫鎽?yīng)用廣泛，該技術(shù)基于植物細(xì)胞具有全能性的這一特點(diǎn)，通過(guò)無(wú)菌組培技術(shù)，在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的遺傳性質(zhì)均一的完整植株。該技術(shù)具有不受季節(jié)限制、培養(yǎng)周期短、易于規(guī)模化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，尤其在解決植物脫毒方面具有顯著的優(yōu)勢(shì)。目前使用植物莖尖組織脫毒培養(yǎng)技術(shù)獲取無(wú)病毒苗的方法已在很多作物繁育方面得到了廣泛應(yīng)用，如馬鈴薯[5]、甘薯[6]、香石竹[7]、菊花[8]等，在全國(guó)不少地區(qū)已經(jīng)建立了植物脫病毒苗生產(chǎn)中心及基地。

植物莖尖組織脫毒培養(yǎng)技術(shù)不僅可以快速繁殖出大量?jī)?yōu)質(zhì)的草莓種苗，更有利于優(yōu)良品種的提純和更新，減少病毒感染進(jìn)而提高草莓的產(chǎn)量和品質(zhì)，是促進(jìn)草莓產(chǎn)業(yè)良性健康發(fā)展的有效途徑[9]。

“丹莓1號(hào)”草莓適應(yīng)東北地區(qū)的氣候條件，耐寒，抗逆、抗病蟲(chóng)害能力強(qiáng)，且目前還未有關(guān)于該品種草莓的脫毒組培快繁技術(shù)研究。本文選擇以“丹莓1號(hào)”草莓的莖尖作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，探究其最佳的芽誘導(dǎo)、增殖、生根培養(yǎng)所需的激素種類(lèi)和濃度，確定最佳移栽基質(zhì)，以期為“丹莓1號(hào)”草莓品種脫毒苗的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源

供試草莓品種為“丹莓1號(hào)”，由遼寧草莓科學(xué)技術(shù)研究院提供。該品種生長(zhǎng)特性、果實(shí)品質(zhì)、平均畝產(chǎn)、種植管理等資料，詳見(jiàn)http://www.lndgcm.com/mshtml/2015-4/343.html。

1.2 材料的消毒處理

剪取長(zhǎng)約2 cm的草莓匍匐莖尖，用自來(lái)水持續(xù)沖洗6 h，之后在超凈工作臺(tái)中用75%酒精消毒30 s，無(wú)菌水沖洗3次，再用0.1%氯化汞滅菌15 min，無(wú)菌水沖洗3次，剝?nèi)デo尖外面的幼葉，取出生長(zhǎng)點(diǎn)，待接種。

1.3 培養(yǎng)基的配制

以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加不同種類(lèi)和不同濃度的植物生長(zhǎng)激素(NAA、2,4-D、6-BA和IBA)配制培養(yǎng)基。具體如下：誘導(dǎo)培養(yǎng)基[添加固定濃度1.0 g·L-16-BA和不同濃度的NAA(0.05～0.50 mg·L-1)或2,4-D(0.05～0.50 mg·L-1)組合]、增殖培養(yǎng)基[添加固定濃度1.0 g·L-16-BA和不同濃度的NAA(0.1～0.5 mg·L-1)或2,4-D(0.1～0.5 mg·L-1)組合]和生根培養(yǎng)基[添加不同濃度的IBA(0.1～0.4 mg·L-1)]，每種培養(yǎng)基中均加入蔗糖30 g·L-1，瓊脂8 g·L-1，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH5.80±0.05，121℃高溫滅菌20 min。

1.4 莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)

切取0.2 mm消毒后的莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)，接種到添加固定濃度6-BA(1.0 mg·L-1)和不同濃度生長(zhǎng)素(0.05～0.20 mg·L-1的NAA或0.05～0.20 mg·L-1的2,4-D)的MS培養(yǎng)基上，置于溫度25±2℃、光照強(qiáng)度2 000 lux、光周期16 h·d-1的環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)。每個(gè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基接種莖尖數(shù)1個(gè)，重復(fù)6個(gè)樣品。

1.5 增殖繼代培養(yǎng)

將莖尖誘導(dǎo)出的叢生不定芽分割成3～4株小的芽叢，轉(zhuǎn)接到添加固定濃度6-BA(1.0 mg·L-1)和不同濃度生長(zhǎng)素(0.1～0.5 mg·L-1的NAA或0.1～0.5 mg·L-1的2,4-D)的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度、光照強(qiáng)度和光周期等其他培養(yǎng)條件如1.4中所述，每隔25～30 d繼代1次。

1.6 生根培養(yǎng)

挑選高度2～3 cm，長(zhǎng)勢(shì)較好的無(wú)根苗，將其轉(zhuǎn)接到添加不同濃度IBA(0.1～0.5 mg·L-1)的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度、光照強(qiáng)度和光周期等其他培養(yǎng)條件如1.4中所述。

1.7 馴化及移栽處理

將根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)茂盛的生根苗從培養(yǎng)瓶中取出，去除根部多余的培養(yǎng)基，將其栽入裝有提前滅菌的移栽基質(zhì)[由苗圃土、蛭石、珍珠巖三者混合制備而成，本研究分別考察了上述材料以3種不同比例(1∶2∶2、1∶2∶1和0∶2∶1)混合而成的基質(zhì)]的32孔育苗盆中，覆蓋保鮮膜以防水分散失，5 d后去掉保鮮膜，室內(nèi)馴化10 d后將其移栽入白色方盆中適應(yīng)環(huán)境，最后移栽至室外大田中。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

誘導(dǎo)率=誘導(dǎo)出不定芽的外植體數(shù)/接種的總外植體數(shù)×100%

(1)

增殖系數(shù)=增殖的不定芽數(shù)量/接種的不定芽數(shù)量

(2)

生根率=生根試管苗數(shù)/接種試管苗數(shù)×100%

(3)

移栽成活率=移栽成活的植株數(shù)/移栽植株的總數(shù)×100%

首先將高純錫樣品加工至儀器分析要求的尺寸；用車(chē)床刨光處理樣品分析面使其待測(cè)面光滑平整(能完全遮擋住樣品盒中激發(fā)孔并保證無(wú)縫隙露出)；用硝酸和超純水配制出5%稀硝酸，將待測(cè)樣品進(jìn)行泡洗后再用超純水反復(fù)清洗，之后在干凈環(huán)境用普通氬氣將其吹干。

(4)

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用Microsoft Office Excel 2010程序處理，并用其制表；運(yùn)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異性顯著分析是通過(guò)單變量方差分析(ANOVO)結(jié)合鄧肯檢驗(yàn)在P<0.05的顯著水平上實(shí)現(xiàn)的。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度NAA和2,4-D對(duì)草莓莖尖不定芽誘導(dǎo)的影響

草莓莖尖在添加固定濃度6-BA(1.0 mg·L-1)的MS培養(yǎng)基中，其誘導(dǎo)率隨著NAA的濃度從0.05 mg·L-1增加到0.2 mg·L-1逐漸從69%升高到82%，然后隨著NAA的濃度從0.2 mg·L-1增加到0.5 mg·L-1，其誘導(dǎo)率從82%降低至60%(圖1a)。草莓莖尖誘導(dǎo)率隨著2,4-D的濃度從0.05 mg·L-1增加到0.1 mg·L-1逐漸從81%升高到92%，然后隨著2,4-D的濃度從0.1 mg·L-1增加到0.5 mg·L-1，其誘導(dǎo)率從92%降低至62%(圖1b)。根據(jù)不定芽的最高誘導(dǎo)率，在含有1.0 mg·L-16-BA的MS培養(yǎng)基中添加2,4-D對(duì)不定芽的誘導(dǎo)效果要明顯優(yōu)于NAA。因此，本研究選取MS+1.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-12,4-D作為“丹莓1號(hào)”草莓誘導(dǎo)莖尖分化不定芽的最佳培養(yǎng)基。我們將草莓莖尖外植體接種在該培養(yǎng)基上(圖4:A)培養(yǎng)40 d，可成功誘導(dǎo)莖尖分化出不定芽(圖4:B)。

2.2 不同濃度NAA和2,4-D對(duì)于草莓不定芽增殖的影響

將不同濃度的NAA或2,4-D與1.0 mg·L-1的6-BA結(jié)合進(jìn)行草莓不定芽的增殖，增殖效果最佳的是在培養(yǎng)基中添加0.3 mg·L-1的NAA，其增值系數(shù)可達(dá)22(圖2)。因此，本研究選取MS+1 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1NAA為最佳的“丹莓1號(hào)”草莓不定芽增殖培養(yǎng)基。將草莓莖尖誘導(dǎo)出的不定芽轉(zhuǎn)移到該培養(yǎng)基上培養(yǎng)20 d(圖4:C)和30 d(圖4:D)，發(fā)現(xiàn)不定芽增殖效果良好，出現(xiàn)了明顯的叢生芽。

圖2 不同濃度NAA(a)和2,4-D(b)對(duì)“丹莓1號(hào)”草莓不定芽增殖的影響(培養(yǎng)30 d)Fig.2 Effects of different concentrations of NAA(a) and 2,4-D(b) on the proliferation of “Dan Mei 1” strawberry adventitious buds(culture for 30 d)

2.3 不同IBA濃度對(duì)于組培苗生根的影響

隨著IBA濃度升高，草莓不定芽生根率呈總體上升的趨勢(shì)，最適濃度為0.4 mg·L-1，最高生根率可達(dá)90%，當(dāng)NAA濃度進(jìn)一步增加至0.5 mg·L-1，草莓不定芽生根率出現(xiàn)了下降趨勢(shì)(圖3)。因此，MS+0.4 mg·L-1IBA是誘導(dǎo)“丹莓1號(hào)”草莓組培苗生根的最佳培養(yǎng)基。我們將培養(yǎng)了30 d后的草莓叢生芽剝離成單一無(wú)根苗，并將其轉(zhuǎn)移到最佳生根培養(yǎng)基中(圖4:E)，培養(yǎng)30 d后可得生長(zhǎng)狀態(tài)良好的生根組培苗(圖4:F)。

圖3 不同IBA濃度對(duì)于“丹莓1號(hào)”草莓不定芽生根的影響Fig.3 Effects of different concentrations of IBA on rootage of “Dan Mei 1” strawberry adventitious buds

2.4 不同移栽基質(zhì)對(duì)于生根苗移栽成活率的影響

我們將長(zhǎng)勢(shì)較好的“丹莓1號(hào)”草莓組培苗從培養(yǎng)基中取出，將其轉(zhuǎn)移到含有不同比例混合的移栽基質(zhì)中，考察其成活率情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，在苗圃土∶蛭石∶珍珠巖=1∶2∶2,移栽成活率是84%，在苗圃土∶蛭石∶珍珠巖=1∶2∶1,移栽成活率是91%，在苗圃土∶蛭石∶珍珠巖=0∶2∶1，移栽成活率是78%。因此，我們選定移栽成活率最高的基質(zhì)(苗圃土∶蛭石∶珍珠巖=1∶2∶1)為最佳的草莓組培苗移栽基質(zhì)。同時(shí)，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，生長(zhǎng)于消毒處理過(guò)的移栽基質(zhì)中的草莓，其生長(zhǎng)狀態(tài)要優(yōu)于生長(zhǎng)于未經(jīng)消毒處理的移栽基質(zhì)中的草莓，成活率也顯著增高(圖4:G)。待適應(yīng)土壤環(huán)境后，我們將植株從穴盤(pán)中轉(zhuǎn)至室外大田中進(jìn)行栽培，我們發(fā)現(xiàn)經(jīng)莖尖脫毒后的草莓長(zhǎng)勢(shì)良好，抗病蟲(chóng)害、抗逆能力顯著增強(qiáng)(圖4:H～I(xiàn))。

圖4 “丹莓1號(hào)”草莓脫毒組培快繁過(guò)程 A.接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的莖尖；B.莖尖經(jīng)誘導(dǎo)分化成的不定芽(培養(yǎng)40 d)；C.轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)20 d的不定芽；D.轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上的培養(yǎng)30 d的不定芽；E.接種到生根培養(yǎng)基上的單一不定芽；F.生根組培苗；G.室內(nèi)煉苗；H～I(xiàn).移載至室外大田的“丹莓1號(hào)”脫毒草莓苗Fig.4 Rapid propagation of “Dan Mei 1” virus-free strawberry using tissue culture technology A.The inoculation of shoot tip on induction medium; B.The differentiation of shoot tip into adventitious buds(culture for 40 d); C.The culture of adventitious buds on proliferation medium for 20 d; D.The culture of adventitious buds on proliferation medium for 30 d; E.The inoculation of a single adventitious bud on rootage medium; F.The rooted plantlet; G.The indoor acclimatization of plantlet; H-I.The field culture of “Dan Mei 1” virus-free strawberry

表1 不同移栽基質(zhì)對(duì)“丹莓1號(hào)”草莓組培苗移栽成活率的影響

Table 1 Effects of different transplanting substrates on the survival rate of “Dan Mei 1” strawberry plantlets

處理Treatment基質(zhì)配比Substrate ratio苗圃土Nursery soil蛭石Vermiculite珍珠巖Perlite移栽成活率survival rateA12284%±3%B12191%±2%C02178%±5%

3 討論

在植物離體組織培養(yǎng)過(guò)程中，脫分化和再分化是兩個(gè)至關(guān)重要的過(guò)程。脫分化是指將已分化細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)后轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過(guò)程，而再分化是將已經(jīng)脫分化的細(xì)胞再經(jīng)過(guò)一定條件的誘導(dǎo)后，經(jīng)過(guò)愈傷組織或胚狀體再分化出芽和根，最后形成完整植株的過(guò)程。組培快繁其實(shí)就是研究植物離體組織的脫分化和再分化過(guò)程。眾所周知，影響植物脫分化和再分化最重要的因素就是植物激素，它分為生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素。對(duì)于誘導(dǎo)外植體成芽，促進(jìn)不定芽增殖，誘發(fā)不定芽生根，這些階段所需生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的種類(lèi)、濃度和配比是不同的[10]，在本實(shí)驗(yàn)中，我們選用在MS基本培養(yǎng)基中添加不同類(lèi)型、不同濃度和不同配比的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素進(jìn)行草莓莖尖誘導(dǎo)不定芽、不定芽增殖及其生根的研究。根據(jù)以往的研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)，1.0 mg·L-1的細(xì)胞分裂素6-BA對(duì)于植物不定芽的誘導(dǎo)及增殖具有較好的影響。我們前期的預(yù)實(shí)驗(yàn)，也證明該濃度的6-BA有利于“丹莓1號(hào)”草莓莖尖不定芽的誘導(dǎo)和增殖?；诖?，本實(shí)驗(yàn)選擇了使用1.0 mg·L-1的6-BA結(jié)合不同濃度的NAA和2,4-D探究不同植物生長(zhǎng)素對(duì)于“丹莓1號(hào)”草莓莖尖不定芽的誘導(dǎo)及增殖的影響。

莖尖分化成不定芽后，需要對(duì)不定芽進(jìn)行增殖培養(yǎng)以進(jìn)一步擴(kuò)大不定芽數(shù)量和規(guī)模。在組織培養(yǎng)過(guò)程中，不定芽的增殖系數(shù)對(duì)組織培養(yǎng)快繁起著制約作用[15]。本研究發(fā)現(xiàn)相比較2,4-D，NAA對(duì)“丹莓1號(hào)”草莓莖尖不定芽增殖效果最佳。此外，隨著NAA濃度的上升，不定芽增殖系數(shù)呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，這一現(xiàn)象與前人研究結(jié)果較為一致。翟婷婷等研究發(fā)現(xiàn)，隨著NAA濃度的升高，“紅顏”草莓不定芽的增殖系數(shù)也呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，這說(shuō)明適宜濃度的NAA對(duì)于草莓不定芽的增殖有較好的效果，而高濃度的NAA則不利于草莓不定芽的增殖[16]。陳林晶等在對(duì)麗格海棠(Begonia×elatior)組織培養(yǎng)技術(shù)的研究發(fā)現(xiàn)，在6-BA濃度不變條件下，不定芽增殖率的大小隨著NAA濃度的升高也呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)[17]。陳菊等在對(duì)6-BA與NAA濃度配比對(duì)何首烏不定芽增殖的實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，在相同濃度6-BA條件下，不同濃度NAA對(duì)不定芽的增殖的促進(jìn)作用依次為0.5 mg·L-1>0.2 mg·L-1>1.0 mg·L-1，NAA 0.5 mg·L-1為不定芽增殖最佳濃度，較低濃度NAA不利于不定芽的增殖不假，但較高濃度NAA對(duì)不定芽增殖也起到了抑制作用[18]。

不定芽成功增殖后，我們需要對(duì)不定芽進(jìn)行生根培養(yǎng)，只有生根的不定芽才是完整的植株，才能進(jìn)行后續(xù)的煉苗和移栽。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)IBA對(duì)草莓組培苗生根具有顯著的促進(jìn)作用[19]。本研究發(fā)現(xiàn)0.4 mg·L-1IBA對(duì)“丹莓1”草莓組培苗誘導(dǎo)生根效果最好。相關(guān)研究表明，IBA濃度在0.01～1.0 mg·L-1范圍時(shí)，有利于植物組培苗生根,高于或低于該區(qū)間濃度，均不利于植物體生根[20]。此外，林萍等研究發(fā)現(xiàn)，0.4 mg·L-1IBA有利于“章姬”草莓組培苗生根[21]，這和本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果一致。

組培苗的移栽馴化，對(duì)于其后期產(chǎn)業(yè)化實(shí)際應(yīng)用至關(guān)重要。本項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)于苗圃土∶蛭石∶珍珠巖=1∶2∶1混合的移栽基質(zhì)中的草莓成活率最高，且其在莖、根、葉片量以及株高等方面，展示出的生長(zhǎng)效果都是最好的。這與晁慧娟等對(duì)“甜查理”草莓移栽馴化的研究[22]結(jié)果類(lèi)似。

4 結(jié)論

脫毒組培快繁技術(shù)是保證優(yōu)良草莓品種種苗優(yōu)勢(shì)，維持其抗逆、抗病蟲(chóng)害能力，減少草莓病蟲(chóng)害發(fā)生，提高草莓產(chǎn)量與質(zhì)量的一種合理有效的方法，而且該技術(shù)周期短，成本低，便于自動(dòng)化和工廠(chǎng)化生產(chǎn)應(yīng)用。不同品種草莓組培快繁過(guò)程中所需植物激素類(lèi)型與濃度是不一樣的，這可能與草莓的基因型、所選外植體類(lèi)型、植物體生長(zhǎng)狀態(tài)等都有關(guān)系。東北地區(qū)氣候條件特殊，對(duì)于草莓這種不耐寒的植物來(lái)說(shuō)，有效生長(zhǎng)周期太短，傳統(tǒng)營(yíng)養(yǎng)繁殖方式難以獲得規(guī)?；N苗，即便能夠獲得種苗，也因病毒積累而造成草莓種苗優(yōu)勢(shì)退化、果實(shí)產(chǎn)量和品質(zhì)下降等。因此，本研究選擇用適宜在東北地區(qū)栽培的優(yōu)良品種“丹莓1號(hào)”草莓的莖尖作為外植體，確定了其組培快繁過(guò)程中涉及到的各種培養(yǎng)基，包括最佳不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+1 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-12,4-D；最佳不定芽增殖培養(yǎng)基MS+1 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1NAA；最佳不定芽生根培養(yǎng)基MS+0.4 mg·L-1IBA以及組培苗移栽馴化最佳基質(zhì)苗圃土∶蛭石∶珍珠巖=1∶2∶1。本項(xiàng)研究所建立的“丹莓1號(hào)”草莓莖尖脫毒組培快繁技術(shù)可為東北地區(qū)該優(yōu)良品種草莓的規(guī)模化繁育提供技術(shù)支撐。