《鹽酸小檗堿脂質(zhì)體制備》實(shí)驗(yàn)的制備方法綜述*

鄭峙澐，單 爽，曹子琴，王 茜，馬格非，彭 燦，儲(chǔ)曉琴， 桂雙英，尹登科，何 寧

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012)

鹽酸小檗堿屬于異喹啉類生物堿，是從黃連等植物中提取出來的。它作為一種抗菌藥療效確切，已被廣泛用于腸胃炎、細(xì)菌性痢疾等消化道疾病的治療，對治療心力衰竭、高血壓、高血脂也有較好的療效[1]。研究證實(shí)，鹽酸小檗堿可對多種腫瘤發(fā)揮抑制作用，但其體內(nèi)抑瘤作用較體外差，原因可能是鹽酸小檗堿在腸道很難被吸收，體內(nèi)抑瘤濃度也較低[2]。因此，如何使鹽酸小檗堿在體內(nèi)發(fā)揮有效的抑瘤作用成為首要問題。脂質(zhì)體是一種新型制劑技術(shù)，結(jié)構(gòu)與細(xì)胞膜相似。它是由脂質(zhì)材料(例如磷脂)分散在水性介質(zhì)中形成的封閉囊泡，具有靶向性和緩釋作用，適合于生物體內(nèi)降解，同時(shí)可減少用藥劑量、降低毒副作用，故脂質(zhì)體的應(yīng)用已越來越廣泛[3]。目前，鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的制備方法主要有薄膜分散法、逆向蒸發(fā)法、溶劑注入法、pH梯度法、硫酸銨梯度法、薄膜分散-pH梯度法、超臨界CO2法等等，每種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，本文主要通過對國內(nèi)外關(guān)于鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的制備方法進(jìn)行綜述，比較不同方法的制備工藝和優(yōu)缺點(diǎn)，以期為藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供參考。

1 薄膜分散法

薄膜分散法是目前的脂質(zhì)體制備工藝中應(yīng)用最為廣泛的方法之一。在制備過程中首先需要將大豆磷脂(SPC)和膽固醇(Chol)按比例混合溶解在適量的乙醇或其他有機(jī)溶劑中，制得均勻的混合溶液，再將該溶液減壓蒸發(fā)除去乙醇，形成脂質(zhì)薄膜；最后加入鹽酸小檗堿緩沖液不斷攪拌，即可制得。在實(shí)驗(yàn)過程中，需注意將水化溫度調(diào)至相變溫度之上以增加膜的通透性，促使藥物分子易于透過磷脂膜而進(jìn)入脂質(zhì)體。此外，該法所制得的脂質(zhì)體為大多層脂質(zhì)體，粒徑較大且不均一，需要使用French擠壓法、過膜分散法等技術(shù)對粒徑進(jìn)行修飾。薄膜分散法作為應(yīng)用最早的脂質(zhì)體制備方法，操作步驟簡單，脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)經(jīng)典，尤其適用于學(xué)生實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行操作；而且，該方法是逆向蒸發(fā)法、pH梯度法等其他脂質(zhì)體制備方法的基礎(chǔ)，只有掌握了薄膜分散法的實(shí)驗(yàn)原理及制備工藝才能更好的理解并掌握其他制備方法。但是，采用該法制備也具有一定的缺陷，即所制得的脂質(zhì)體包封率較低，載藥量也較小，不適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

2 逆向蒸發(fā)法

逆相蒸發(fā)法是一種將脂類材料溶于有機(jī)溶劑(如乙醇、二氯甲烷)中，然后將其與含藥緩沖液混合乳化，最后蒸去有機(jī)溶劑從而制得所需脂質(zhì)體的方法。在制備過程中先按薄膜分散法制得脂質(zhì)薄膜，加入適量乙醚溶解脂質(zhì)膜，再加入鹽酸小檗堿緩沖液形成兩相系統(tǒng)，超聲形成穩(wěn)定的W/O型乳化劑，然后減壓蒸去乙醚，制得鹽酸小檗堿脂質(zhì)體。在此實(shí)驗(yàn)中需要用到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、超聲波清洗器等儀器，學(xué)生應(yīng)熟練掌握所需儀器的使用原理及方法，以減少實(shí)驗(yàn)誤差，提高成功率。如旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的使用原理是保持裝置內(nèi)真空并恒溫加熱，同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)瓶，使其內(nèi)壁形成薄膜，從而加快蒸發(fā)。同時(shí)需注意在減壓蒸發(fā)除溶劑的過程中，裝置內(nèi)易產(chǎn)生大量氣泡，因此，必須保持適宜的真空度以免脂質(zhì)丟失。與薄膜分散法相比，該法所得脂質(zhì)體的載藥量和包封率均較高，但此法也具有一定的缺陷，即制備過程中需要大量使用有機(jī)溶劑，極易造成有機(jī)溶劑殘留[4]。

3 溶劑注入法

溶劑注入法在脂質(zhì)體的制備過程中也較為常用，其中應(yīng)用最為廣泛的是乙醇注入法和乙醚注入法。乙醇注入法是將脂類材料混合溶于乙醇中，再于60 ℃左右溫度下邊攪拌邊將混合溶液(溶液若不澄清，需濾去雜質(zhì)后再進(jìn)行操作)滴入鹽酸小檗堿緩沖液中，蒸去有機(jī)溶劑乙醇，繼續(xù)攪拌1～2 h，將所得脂質(zhì)體依次通過0.8、0.45、0.22 μm微孔濾膜，即得。乙醇注入法是將乙醇換成乙醚，其余同乙醇注入法。在制備過程中，同樣需注意儀器的使用問題，合理操作，才能制得高質(zhì)量脂質(zhì)體。溶劑注入法的優(yōu)點(diǎn)在于所制得脂質(zhì)體形狀更為完整，且粒徑小于1 μm，適合于制備注射液；缺點(diǎn)是制得脂質(zhì)體粒徑大小不均一[5]。

4 pH梯度法

pH梯度法屬于主動(dòng)載藥，在目前的脂質(zhì)體制備工藝中應(yīng)用較為廣泛，適用于制備兩親性藥物脂質(zhì)體[6]。實(shí)驗(yàn)室制備過程為：稱取處方量SPC和Chol溶于適量乙醚中，加入枸櫞酸緩沖液繼續(xù)攪拌，乳化，揮盡乙醚，形成乳狀液，得空白脂質(zhì)體，將空白脂質(zhì)體經(jīng)微孔濾膜整粒。再按處方量將空白脂質(zhì)體、鹽酸小檗堿緩沖液、NaHCO3溶液于振搖下依次加入西林瓶中，混勻，蓋塞，水浴(70 ℃)孵化20 min后，立刻將溫度降至室溫，即得。在采用此法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，學(xué)生需理解NaHCO3溶液再脂質(zhì)體制備中發(fā)揮的主要作用，即調(diào)節(jié)脂質(zhì)體外部pH值，使其保持弱堿性，而脂質(zhì)體內(nèi)部為弱酸性，從而形成跨膜pH梯度，鹽酸小檗堿在膜外呈分子型，膜內(nèi)質(zhì)子化，促使其易于順梯度進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)且不易外漏。此外，在制備過程中需確保加藥順序不能顛倒，且需邊加邊振搖，否則無法獲得合格的脂質(zhì)體。該制備方法的優(yōu)勢在于包封率高、滲透??；缺陷在于產(chǎn)品質(zhì)量受脂質(zhì)體粒徑、磷脂種類、藥物與脂質(zhì)體的混合順序等因素影響較大，且重現(xiàn)性也較差[7]。

5 硫酸銨梯度法

硫酸銨梯度法是一種常用的脂質(zhì)體制備方法，它可在脂質(zhì)體膜兩側(cè)形成跨膜梯度并促使外部藥物自發(fā)進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)[8]。該方法一般適用于包載弱堿性藥物，而鹽酸小檗堿屬于強(qiáng)酸弱堿鹽，因此可采用此法制備鹽酸小檗堿脂質(zhì)體。制備過程[9]為：精密稱量處方量的SPC和Chol混合，加入叔丁醇并加溫至45 ℃使之溶解，再加入一定量的硫酸銨溶液超聲至形成穩(wěn)定的W/O型乳化劑，后減壓蒸去有機(jī)溶劑，再次加入一定量硫酸銨溶液蒸發(fā)制得空白脂質(zhì)體(脂質(zhì)體內(nèi)部為硫酸銨)，用5%葡萄糖溶液透析后，將其依次通過0.45、0.2、0.1 μm的微孔濾膜，然后加入鹽酸小檗堿緩沖液水浴孵化，即可制得。硫酸銨水溶液近中性，該方法相較于pH梯度法的優(yōu)勢在于可減少磷脂分子的水解，從而確保脂質(zhì)體的質(zhì)量和安全性；但缺陷在于所制得脂質(zhì)體的包封率較低。在此實(shí)驗(yàn)中，學(xué)生除需掌握旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器和微孔濾膜過濾器的原理及使用方法外，還需了解采用5%葡萄糖溶液透析的緣由，即除去膜外部的硫酸銨，從而使膜內(nèi)外形成硫酸根離子梯度，促使藥物自發(fā)順梯度進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)。

6 薄膜分散-pH梯度法

薄膜分散法為經(jīng)典的脂質(zhì)體制備方法，將其與pH梯度法結(jié)合可有效改善制得脂質(zhì)體包封率低的缺陷，提高生物利用度。制備過程[10]如下：稱取處方量SPC、Chol與VE混合，溶于適量無水乙醇中，水浴加熱溶解，減壓蒸發(fā)，制成薄膜。加入一定量檸檬酸緩沖液，水化得空白脂質(zhì)體。再將其經(jīng)0.8、0.45、0.22 μm微孔濾膜整粒后與鹽酸小檗堿溶液混合。用NaHCO3調(diào)節(jié)外水相pH，水浴孵化，即得。在此制備方法中，需要學(xué)生熟練掌握兩種方法的制備流程及操作要點(diǎn)，對該操作進(jìn)行可行性分析，以期將兩種方法合理運(yùn)用，從而制備出高質(zhì)量脂質(zhì)體。該工藝將兩種制備方法結(jié)合在一起，既強(qiáng)化了各自的優(yōu)勢，又補(bǔ)足了各自的短板，使所制得的脂質(zhì)體擁有較高包封率的同時(shí)，制備工藝簡便易行、重復(fù)性也較好；但此工藝存在一個(gè)缺陷，即有機(jī)溶劑使用量大，因此不宜用于工業(yè)化生產(chǎn)[11]。該方法也為我們提供了一個(gè)新的脂質(zhì)體制備思路，無論是在脂質(zhì)體的制備還是在其他實(shí)驗(yàn)中，學(xué)生應(yīng)學(xué)會(huì)觸類旁通，靈活運(yùn)用所學(xué)知識，在前人的研究基礎(chǔ)上繼續(xù)探索，找尋更優(yōu)的實(shí)驗(yàn)途徑，制備高質(zhì)量產(chǎn)物。

7 超臨界CO2法

超臨界法制備脂質(zhì)體是一種在制備過程中將氯仿、乙醚等有機(jī)溶劑用超臨界流體替代用以制備脂質(zhì)體的新型制備方法[12]。超臨界流體(SCF)即溫度及壓力均超過其臨界狀態(tài)的流體。與傳統(tǒng)流體相比，它具有氣體與液體的雙重性質(zhì)和優(yōu)勢，密度和溶解能力與液體溶劑相近，黏度與氣體相近，擴(kuò)散系數(shù)介于液體和氣體之間，使SCF具有很大的可操作性，其中超臨界CO2因具有較低的臨界溫度和臨界壓力，同時(shí)兼具環(huán)保、無毒、廉價(jià)、安全等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛使用[13]。采用該方法制備時(shí)需先稱取一定配比(3:1)的SPC與Chol于無水乙醇中溶解，再將該混合溶液與鹽酸小檗堿緩沖液于超聲下混勻，再將其置于超臨界設(shè)備中，通入CO2并升壓，使其達(dá)到超臨界狀態(tài)，孵育后恒速泄壓，即得產(chǎn)物[14]。該方法可顯著提高鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的包封率，增大載藥量，同時(shí)可最大程度降低有機(jī)溶劑使用量，增加生物安全性[15]。在此實(shí)驗(yàn)過程中需用到超臨界流體設(shè)備、恒溫磁力攪拌器及電子天平等儀器，掌握這些儀器的操作方法及要點(diǎn)有助于我們更好的進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，提高實(shí)驗(yàn)成功率。此外，該方法作為一種新型的脂質(zhì)體制備方法，需要學(xué)生對該方法進(jìn)行更加深入的了解，掌握更多相關(guān)知識，以期為今后的學(xué)習(xí)和研究提供參考。

8 結(jié) 語

鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的制備方法較多，每種方法各有優(yōu)劣，在其原理、操作性、包封率、安全性等方面也有所不同，制得的脂質(zhì)體質(zhì)量存在較大差異，因此在實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x用合適的制備方法。此外，掌握鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的制備方法還可對其他脂質(zhì)體的制備提供參考。我校在本科藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，結(jié)合實(shí)驗(yàn)教學(xué)的學(xué)時(shí)安排，脂質(zhì)體制備選用了經(jīng)典的薄膜分散法，該法操作步驟簡單，通過該實(shí)驗(yàn)的開展，即能鍛煉學(xué)生實(shí)驗(yàn)動(dòng)手能力，又能通過實(shí)驗(yàn)對脂質(zhì)體的理論知識進(jìn)一步鞏固。