家禽細(xì)菌性疾病——概況

王晶晶 譯自

唐彩琰 審

細(xì)菌是造成孵化場眾多衛(wèi)生問題以及引發(fā)種雞多種重要疾病的主要原因。在討論具體細(xì)節(jié)之前，我們先概括性了解細(xì)菌的基本情況。

細(xì)菌是在各種環(huán)境中繁衍生息的微小單細(xì)胞生物。這些生物一般生活在土壤、水以及人類和動(dòng)物的消化道中，有時(shí)也生活在一些特殊的環(huán)境中，例如新西蘭和美國加利福尼亞州的間歇泉和溫泉。細(xì)菌有許多不同的類型，沒有一種細(xì)菌能夠適應(yīng)所有的棲息地，隨著時(shí)間推移，細(xì)菌不斷進(jìn)化并定植在不同的特定棲息地。

人類與細(xì)菌的關(guān)系很復(fù)雜。有時(shí)細(xì)菌是有益的，例如化糞池中、抗生素生產(chǎn)中、酸奶生產(chǎn)中的細(xì)菌；有時(shí)它們又可能對(duì)人類造成危害，如腐爛過程中和變質(zhì)食物中的細(xì)菌會(huì)引發(fā)破傷風(fēng)和某些肺炎等疾病。細(xì)菌也可能是某些抗生素耐藥性基因的攜帶者。

細(xì)菌可視為微小動(dòng)物，具備大型動(dòng)物的所有生物學(xué)功能，包括消化、呼吸、繁殖、加工、運(yùn)動(dòng)和廢物處理等。

1 原核生物

細(xì)菌屬于原核生物。原核生物是沒有細(xì)胞核的單細(xì)胞生物，其DNA要么以扭曲的線狀團(tuán)塊形式自由漂浮，要么存在于質(zhì)粒的單獨(dú)環(huán)狀片段中。細(xì)菌細(xì)胞中的核糖體能利用編碼信息將氨基酸組裝成蛋白質(zhì)。

細(xì)菌周圍通常有兩個(gè)保護(hù)層，即細(xì)胞壁和細(xì)胞膜。有些細(xì)菌沒有細(xì)胞壁，如支原體。支原體與種雞的一些重要疾病有關(guān)。

一些細(xì)菌有第三層膜，也就是最外層膜，稱為莢膜。許多細(xì)菌表面都有不同長短的鞭狀附件，長的稱為鞭毛，較短的稱為菌毛。這些結(jié)構(gòu)可以幫助細(xì)菌運(yùn)動(dòng)(通常在水膜中)以及附著在物體表面。

細(xì)胞壁在革蘭染色法中起關(guān)鍵作用。革蘭染色法根據(jù)細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)來區(qū)分細(xì)菌。細(xì)菌被染成紫色的為革蘭陽性菌，被乙醇脫色后復(fù)染成紅色的為革蘭陰性菌。

由于工具簡陋，早期科學(xué)家在細(xì)菌研究方面受到一定限制。實(shí)際上他們只有一種工具，即光學(xué)顯微鏡，因此他們只能觀察細(xì)菌的形狀。最初觀察到的許多細(xì)菌都是根據(jù)它們的形狀命名的。這些名稱包括“球菌”(用于在顯微鏡下看起來像小球體的細(xì)菌)和“桿菌”(用于在顯微鏡下看起來像棒狀的細(xì)菌)。這些詞可以在邏輯上與“葡萄狀”和“鏈狀”等詞組合使用。

2 檢測

我們可以用各種檢測手段來確定孵化場或種雞場中細(xì)菌的存在情況，并給出細(xì)菌的數(shù)量。在孵化場檢測微生物，是為了確定肉眼可見清潔是否也是微生物級(jí)別的清潔。從邏輯上可以推斷，如果某些部位有明顯的污點(diǎn)或污塊，那么它肯定也污染了微生物。因此，在檢測微生物之前，有必要先行查看，找出臟污的部位或確認(rèn)所有部位為肉眼可見清潔。

2.1 確定目標(biāo)

在開始檢測微生物之前，重要的是要先確定檢測的目標(biāo)。這會(huì)嚴(yán)重影響采集樣本的類型和數(shù)量，以及所需拭子或其他采樣包的類型和數(shù)量，同時(shí)也會(huì)影響檢測時(shí)間。在徹底完成清潔之前，沒有必要取樣來評(píng)估清潔的有效性。另外，檢測的內(nèi)容也很重要。如果要評(píng)估孵化場的總體清潔度，可以用拭子進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)，但如果要評(píng)估沙門菌或曲霉菌的污染狀況，最好使用孵化器中的絨毛樣本。

2.2 選擇實(shí)驗(yàn)室

首先需要確定完成檢測工作的實(shí)驗(yàn)室。為此，需要明確選擇標(biāo)準(zhǔn)，這些標(biāo)準(zhǔn)可能包括：

● 實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)和所能完成的特定檢測；

● 完成所要求檢測的經(jīng)驗(yàn)或能力；

● 知曉孵化場相關(guān)知識(shí)，具備相關(guān)工作經(jīng)驗(yàn)；

● 確定報(bào)告接收時(shí)間和方式；

● 進(jìn)行法定檢測以及貿(mào)易或出口檢測時(shí)，政府對(duì)該實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的認(rèn)可度；

● 孵化場所在審定機(jī)構(gòu)對(duì)該實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的接受程度。

明確取樣人員(孵化場工作人員、實(shí)驗(yàn)室工作人員、公司的質(zhì)量檢查員或獸醫(yī)團(tuán)隊(duì)成員)。無論交由誰來完成這項(xiàng)工作，有兩點(diǎn)很重要。首先，他們需要工具來完成這項(xiàng)工作；其次，他們需要接受培訓(xùn)。就工具而言，重要的是要檢查工具或設(shè)備是否齊全，以及額外準(zhǔn)備一個(gè)或兩個(gè)備用零件，防止出現(xiàn)意外情況。

2.3 需要了解的事項(xiàng)

首先要了解檢測場所的清潔程度，可使用活菌總數(shù)這個(gè)參數(shù)。其次，要了解糞便指示物以及數(shù)量。這些指示物可以顯示糞便是否存在其他細(xì)菌和病毒，例如沙門菌、彎曲桿菌、新城疫病毒和呼腸孤病毒等。糞便指示物也可以顯示是否存在非禽類糞便，例如來自大鼠、小鼠、蜥蜴、昆蟲、狗、貓和人的糞便。典型的糞便指示物是大腸菌群、腸桿菌和糞便鏈球菌。第三，要了解家禽中重要細(xì)菌的特點(diǎn)，例如沙門菌、葡萄球菌等。

3 細(xì)菌檢測

3.1 培養(yǎng)

細(xì)菌培養(yǎng)的目的是使細(xì)菌生長繁殖并產(chǎn)生足夠數(shù)量的純細(xì)菌以用于進(jìn)一步檢測。為此，我們?yōu)榧?xì)菌提供了理想的生長條件——營養(yǎng)和水分供應(yīng)，合適溫度和逆境保護(hù)。對(duì)于某些細(xì)菌，還需要提供不同的環(huán)境，例如厭氧或微需氧環(huán)境。細(xì)菌通常在需氧條件下生長。

細(xì)菌在培養(yǎng)板底部的瓊脂層上生長。瓊脂含有細(xì)菌生長所需的營養(yǎng)和水分。將懷疑含有細(xì)菌的樣本涂在瓊脂層表面，然后將培養(yǎng)板放在指定溫度的培養(yǎng)箱中孵育24 h或更長時(shí)間。細(xì)菌處于理想生長條件時(shí)會(huì)迅速生長和繁殖。當(dāng)肉眼可以看到它時(shí)，稱其為菌落。

3.2 傳代培養(yǎng)

培養(yǎng)板上獲得的培養(yǎng)物通常含有不同的菌落(細(xì)菌)。我們需要將其進(jìn)一步純化，可以選擇一個(gè)典型的菌落進(jìn)行傳代培養(yǎng)。方法是從培養(yǎng)板上挑一個(gè)菌落，將其轉(zhuǎn)移到另一個(gè)培養(yǎng)板上劃線培養(yǎng)。劃線培養(yǎng)是一種在培養(yǎng)板上劃開來稀釋細(xì)菌的方法。它可以在條帶中產(chǎn)生單個(gè)純菌落，這些純菌落可用于進(jìn)一步研究。

3.3 細(xì)菌計(jì)數(shù)

許多情況下我們需要知道細(xì)菌的數(shù)量。為此，我們?nèi)∫阎獢?shù)量的樣本，將其放入已知體積的無菌稀釋液中。如果將1.0 g樣本放入9.0 mL稀釋液中，然后取1.0 mL所得溶液涂于培養(yǎng)板上，其每產(chǎn)生1個(gè)菌落就相當(dāng)于被測樣本中有10個(gè)細(xì)菌。因此，如果我們?cè)谂囵B(yǎng)板上得到4個(gè)或21個(gè)菌落，那么樣本中的細(xì)菌數(shù)量就是40個(gè)或210個(gè)。如果取1.0 mL該溶液加入另外的9.0 mL稀釋液中，那么就得到了稀釋100倍的溶液，細(xì)菌計(jì)數(shù)將分別為400個(gè)或2 100個(gè)。重復(fù)該步驟，直到獲得數(shù)百萬或數(shù)十億的細(xì)菌計(jì)數(shù)。

3.4 微生物檢測

微生物檢測主要用于種雞場和孵化場，用來確定是否存在細(xì)菌和(或)真菌。這一過程通常需要檢測兩個(gè)項(xiàng)目。首先，對(duì)存在的所有微生物進(jìn)行常規(guī)篩查，作為微生物清潔度的一般性指標(biāo)。這對(duì)于評(píng)估清潔程序的有效性很有用。其次，篩選一種特定的微生物，例如沙門菌或煙曲霉)作為排查問題的一部分(如煙曲霉可以用來檢測1日齡雛雞或種雞群的健康狀況。

在詳細(xì)介紹之前，我們先了解有關(guān)衛(wèi)生檢測的一些常規(guī)問題。這可用于確定肉眼可見清潔是否污染了微生物。例如，如果我們已經(jīng)看到待檢測的區(qū)域很臟，那么花錢檢測微生物將沒有意義。這突出了肉眼評(píng)估的重要性。

3.5 肉眼評(píng)估

肉眼評(píng)估是將你看到的內(nèi)容寫進(jìn)報(bào)告中。這需要一種系統(tǒng)的方法確保將所有看到的內(nèi)容都包括在內(nèi)。目前明智的做法是評(píng)估時(shí)隨身攜帶一臺(tái)數(shù)碼相機(jī)，將所見的一切拍下來。這些照片在編輯評(píng)估報(bào)告或與孵化場和種雞場管理層或工作人員反饋意見時(shí)非常有用。

可以給所檢測的孵化場的每個(gè)項(xiàng)目打一個(gè)分?jǐn)?shù)，這些分?jǐn)?shù)可以用來做趨勢分析。此外，也可以將這些分?jǐn)?shù)加起來，創(chuàng)建一個(gè)衛(wèi)生指數(shù)，從而給出孵化場的整體衛(wèi)生狀況。衛(wèi)生指數(shù)也可以用于趨勢分析。

3.6 微生物評(píng)估

在微生物評(píng)估中，我們需要定性和定量分析存在的細(xì)菌。這些評(píng)估分為兩種類型。首先，對(duì)存在的細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行評(píng)估，例如，評(píng)估清潔方案或消毒劑的有效性；其次，確定是否存在特定微生物，例如沙門菌或煙曲霉，從而確定種雞場或孵化場的污染狀況。

微生物檢測的要求包括：確定檢測目的；確定檢測實(shí)驗(yàn)室；確定需檢測的微生物；確定報(bào)告接收人；確定樣本采集人；確保檢測所需的設(shè)備、拭子、容器、記號(hào)筆齊全；確保所有人都知曉即將檢測；確定樣本采集、處理和儲(chǔ)存方式，以及如何運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室；確定后續(xù)工作負(fù)責(zé)人。

3.7 微生物檢測

微生物檢測，即用微生物方法來確定肉眼清潔就是微生物清潔。這涉及兩個(gè)關(guān)鍵階段：樣本采集和實(shí)驗(yàn)室檢測。我們會(huì)檢測以下內(nèi)容：

● 與特定問題相關(guān)的重要細(xì)菌，例如沙門菌、假單胞菌和曲霉菌等。

● 如果檢測到通常只在糞便中出現(xiàn)的微生物，那么表明樣本污染了糞便。這些細(xì)菌包括大腸桿菌、大腸菌群、糞便鏈球菌和腸桿菌。

● 活菌總數(shù)是指將所有細(xì)菌(有益菌和有害菌)合在一起的總數(shù)。這是常規(guī)清潔和清潔效果的良好指標(biāo)。

● 表示特定人員或產(chǎn)品問題的細(xì)菌，例如金黃色葡萄球菌。

你需要知道細(xì)菌最有可能潛藏的位置。我們遵循的理念是找出問題的根源才能糾正它們并推動(dòng)孵化場的標(biāo)準(zhǔn)向前發(fā)展。通過檢測我們知道設(shè)施設(shè)備表面很干凈，沒有細(xì)菌。

在考慮具體的采樣方式之前，我們需要了解樣本采集的一些常規(guī)要點(diǎn)。首先，用于采集樣本的任何工具都必須是無菌的。如果我們把拭子弄臟了，例如掉在地板上，那么必須扔掉它。其次，每個(gè)拭子必須清楚地標(biāo)出擦拭部位，并且每個(gè)樣本都必須標(biāo)明類型和來源，例如“絨毛，孵化器，23號(hào)”。

一種簡單的方法是對(duì)每個(gè)拭子和樣本進(jìn)行唯一編號(hào)，然后在提交表上列出這些編號(hào)，并詳細(xì)說明每個(gè)樣本是什么。

目前主要使用兩種擦拭技術(shù)——帶有木桿的拭子和紗布拭子。如果我們要統(tǒng)計(jì)細(xì)菌的數(shù)量，可以以每個(gè)拭子或每平方厘米為單位報(bào)告結(jié)果。

計(jì)數(shù)時(shí)確保所檢測的區(qū)域是平坦的，擦拭的區(qū)域通常為9 cm2或16 cm2，可用一個(gè)含有9 cm2或16 cm2孔的金屬模板確定。采樣前最好用火焰對(duì)模板消毒，然后將模板放在要采樣的區(qū)域上。用濕拭子在待測區(qū)域上平行于正方形的每一邊擦拭5次，總共20次。