NEDD9在胰腺癌中的研究現(xiàn)狀及進(jìn)展

和少杰，孫君軍，劉偉峰，楊延輝，褚智杰，楊成，楊天保，阮龍輝

（河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院/河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院 肝膽外科，河南 洛陽(yáng) 471000）

在過(guò)去的幾十年里，醫(yī)療技術(shù)的飛速進(jìn)步和化療藥物的更新?lián)Q代提高了胰腺癌患者的整體生存率。然而，胰腺癌患者的長(zhǎng)期生存率仍然低下。胰腺癌預(yù)后差與其自身的一些特點(diǎn)密切相關(guān)：（1）胰腺癌的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移方式多樣化，包括血管、淋巴及神經(jīng)浸潤(rùn)等多種途徑。其中，神經(jīng)浸潤(rùn)性轉(zhuǎn)移是胰腺癌有別于其他消化道腫瘤的一大特點(diǎn)，并且是部分胰腺癌患者在病程早期的首要轉(zhuǎn)移方式；（2）患者的神經(jīng)性疼痛癥狀會(huì)隨著胰腺癌疾病的發(fā)展而逐漸加重，尤其在疾病晚期，患者往往痛苦不堪；（3）除手術(shù)治療外，現(xiàn)有的胰腺癌治療方法，如放化療甚至免疫治療等均未能達(dá)到預(yù)期的治療效果[1]。神經(jīng)浸潤(rùn)作為胰腺癌的一種特殊轉(zhuǎn)移方式，其發(fā)生率可達(dá)90%甚至更高，即使在胰腺癌早期亦可檢測(cè)到神經(jīng)浸潤(rùn)的存在[2]。也正是胰腺癌這些特點(diǎn)導(dǎo)致其5年生存率不足8%，位居所有惡性腫瘤致死原因第4位，且發(fā)病率仍然在逐年上升[3]。目前，外科手術(shù)仍然被認(rèn)為是治療胰腺癌的主要手段。然而，由于胰腺癌的早期診斷難度大及頻繁發(fā)生的局部或者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，最終只有少數(shù)患者可以接受根治手術(shù)治療。因此，尋找特異性抑制或預(yù)防胰腺癌侵襲或轉(zhuǎn)移的治療方法，并改善胰腺癌患者的預(yù)后變得尤為重要。本文對(duì)胰腺癌中神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)下調(diào)蛋白9（NEDD9）的相關(guān)研究現(xiàn)狀及進(jìn)展綜述如下。

1 NEDD9的簡(jiǎn)介

NEDD9全稱(chēng)為神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)下調(diào)蛋白9（neural precursor cell eepressed developmentally down-regulated 9），也稱(chēng)作HEF1（human enhancer of filamentation 1）或Cas-L，是一種細(xì)胞骨架蛋白分子，它所編碼的蛋白質(zhì)包含843個(gè)氨基酸，由SH3結(jié)構(gòu)域，底物結(jié)構(gòu)域（SD），富含絲氨酸區(qū)域（SRR）和保守的C（末）端局灶黏連靶點(diǎn)（FAT）結(jié)構(gòu)域組成。其N(xiāo)端的SH3結(jié)構(gòu)域能夠與其他蛋白質(zhì)的特定序列相互作用，由3-65位氨基酸編碼；其底物結(jié)構(gòu)域（SD）由110-356位氨基酸編碼，而NEDD9含有29個(gè)酪氨酸殘基，其中13個(gè)存在于SD內(nèi)的SH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合位點(diǎn)中，SD結(jié)構(gòu)域也是NEDD9參與眾多信號(hào)通路的重要效應(yīng)區(qū)域；富含絲氨酸區(qū)域（SRR）由357-560位氨基酸編碼；末端的FAT結(jié)構(gòu)域由561-834位氨基酸編碼，其結(jié)構(gòu)與其作用機(jī)制目前尚未完全闡明。

正常細(xì)胞之間依靠黏著斑的連接維持其穩(wěn)定性與緊密性，細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)依靠細(xì)胞膜動(dòng)力學(xué)及黏著斑的復(fù)雜調(diào)控來(lái)實(shí)現(xiàn)。NEDD9可作用于細(xì)胞的黏著斑，能夠連接黏著斑激酶和非受體酪氨酸激酶，進(jìn)而調(diào)節(jié)多種細(xì)胞傳導(dǎo)通路，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的黏附、遷移和侵襲。不僅如此，細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的調(diào)控也受NEDD9的影響。當(dāng)細(xì)胞高表達(dá)NEDD9時(shí)，可導(dǎo)致有絲分裂的失敗，原因是高表達(dá)的NEDD9會(huì)引發(fā)中心體和紡錘體數(shù)量的增加，干擾細(xì)胞正常分裂的進(jìn)程[4]，但NEDD9在細(xì)胞周期中的確切機(jī)制仍未完全闡明。隨著人們對(duì)NEDD9研究的不斷深入，NEDD9參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的一些信號(hào)通路也逐漸顯露出來(lái)，如FAK和Src信號(hào)通路等，這些信號(hào)通路大多是由NEDD9通過(guò)酪氨酸磷酸化途徑激活的。除此之外，多項(xiàng)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)NEDD9在多種惡性腫瘤如口腔鱗狀細(xì)胞癌[5]、肝癌[6]、胃癌[7]、乳腺癌[8-9]、黑色素瘤[10]、宮頸癌[11]、頭頸部細(xì)胞癌[12]、肺癌[13-14]、胰腺癌[15]中均有高表達(dá)。綜上我們可以得知，NEDD9參與細(xì)胞的黏附、遷移、浸潤(rùn)、細(xì)胞周期的調(diào)控，且與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。

2 NEDD9與胰腺癌的轉(zhuǎn)移

腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的確切機(jī)制尚不清楚，雖然已經(jīng)有了許多基礎(chǔ)和臨床研究，也取得了一些令人欣喜的成果，但仍然沒(méi)有取得突破性的進(jìn)展，癌癥患者死亡原因絕大多數(shù)仍然是腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。因此，腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移是21世紀(jì)生命科學(xué)需要迫切解決的問(wèn)題。就胰腺癌來(lái)講，胰腺癌的復(fù)發(fā)涉及腫瘤本身的生物學(xué)特性，包括腫瘤的大小，生長(zhǎng)部位，微環(huán)境的變化以及是否涉及神經(jīng)浸潤(rùn)等因素。除此之外，患者免疫功能的個(gè)體化差異，手術(shù)方式，創(chuàng)傷的大小，圍手術(shù)期的患者全身狀況，尤其是血糖的控制管理等諸多因素都會(huì)對(duì)胰腺癌產(chǎn)生影響。如不從根本上研究胰腺癌的發(fā)病機(jī)理與轉(zhuǎn)移機(jī)制，并探尋出抑制或逆轉(zhuǎn)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有效的治療措施，胰腺癌的整體療效及預(yù)后將難以進(jìn)一步提高。

胰腺癌，尤其是胰腺導(dǎo)管細(xì)胞癌，是一種病死率高、5年生存率低于5%的惡性腫瘤[16]。其早期癥狀比較隱匿，預(yù)后較差。在大多數(shù)情況下，一旦確診，癌癥已進(jìn)入晚期，并往往伴有影像學(xué)難以發(fā)現(xiàn)的微小轉(zhuǎn)移灶，這使得手術(shù)切除治療胰腺癌的效果大打折扣，且術(shù)后患者的預(yù)后更加得不到保障。事實(shí)上，臨床數(shù)據(jù)顯示，伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的胰腺癌患者病死率高達(dá)90%[17-18]。研究表明，F(xiàn)AK（黏著斑激酶）-Src-PI3K/Akt信號(hào)通路在胰腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，而NEDD9在此信號(hào)通路中扮演著重要角色[19]。FAK是一種胞質(zhì)非受體蛋白酪氨酸激酶，從廣義上來(lái)講，也屬于蛋白酪氨酸激酶類(lèi)（PTKs）家族中的一員，是整合蛋白介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的重要成員，可自身磷酸化。目前人類(lèi)已知的FAK含有可以被磷酸化的酪氨酸殘基共有6個(gè)，分別為T(mén)yr397、Tyr407、Tyr576、Tyr577、Tyr861和Tyr925，其中Tyr397為主要的磷酸化部位[20]。過(guò)表達(dá)的NEDD9能通過(guò)磷酸化Tyr397激活FAK，進(jìn)而與Src的SH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合并形成復(fù)合體，進(jìn)一步激活下游信號(hào)通路。Sima等[11]利用siRNA制備轉(zhuǎn)染技術(shù)和免疫蛋白印跡技術(shù)，發(fā)現(xiàn)對(duì)比正常宮頸組織，NEDD9在宮頸癌細(xì)胞中大量表達(dá)，過(guò)表達(dá)的NEDD9可使FAK、Src酪氨酸磷酸化，促進(jìn)了宮頸癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，從而驗(yàn)證了此信號(hào)通路。FAK除參與以上信號(hào)通路外，其Tyr397還能夠通過(guò)PI3K的SH2結(jié)構(gòu)域直接與之結(jié)合，活化PI3K，活化的PI3K激活A(yù)kt，一方面通過(guò)TSC2-mTOR-S6K途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、基因表達(dá)，另一方面PI3K還可以參與Rac-JNK通路，調(diào)節(jié)基因表達(dá)[21-22]。鑒于這些信號(hào)通路在胰腺癌中的重要性，許多研究者針對(duì)此做了大量的實(shí)驗(yàn)，在嘗試進(jìn)一步揭示胰腺癌的發(fā)病機(jī)理的同時(shí)，并尋找可靠的靶向藥物治療胰腺癌。國(guó)外有學(xué)者研究表明[23]，干擾素γ和抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物可通過(guò)抑制Src/FAK信號(hào)通路，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡、抑制血管生成，并具有抗氧化和抗腫瘤增殖活性，顯著抑制胰腺癌的浸潤(rùn)和侵襲。國(guó)內(nèi)外相繼有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[24-25]，作為一種從中草藥黃芩中提煉的有效成分——黃芩素，可以通過(guò)阻斷12-脂氧合酶通路和激活線粒體依賴(lài)性凋亡兩種途徑，共同促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的凋亡。通過(guò)進(jìn)一步的體外細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)，Zhou RT等[26]發(fā)現(xiàn)，黃芩素不僅能夠抑制Akt/ERK信號(hào)通路的活化，同時(shí)可以降低NEDD9在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)。為了進(jìn)一步研究NEDD9與Akt/ERK信號(hào)通路的關(guān)系，研究者通過(guò)合成NEDD9 siRNA，利用基因敲除技術(shù)抑制NEDD9在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)后，可有效抑制Akt在蘇氨酸308號(hào)位點(diǎn)（T-308）上的磷酸化水平和ERK的磷酸化水平，這也進(jìn)一步驗(yàn)證了Akt/ERK是NEDD9作用的下游信號(hào)通路。而黃芩素正是通過(guò)降低NEDD9在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)，降低Akt/ERK信號(hào)通路的活化水平，從而抑制胰腺癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。國(guó)外學(xué)者[15]利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)了經(jīng)病理檢查確診為胰腺癌患者的血清NEDD9水平，發(fā)現(xiàn)其血清NEDD9水平明顯高于對(duì)照組，NEDD9的表達(dá)與胰腺癌患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度密切相關(guān)，但是血清NEDD9水平對(duì)胰腺癌患者的無(wú)進(jìn)展生存率（PFS）和總生存率（OS）無(wú)顯著影響，提示NEDD9尚不能成為影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。國(guó)內(nèi)吳鐵龍等[27]利用免疫組化技術(shù)檢測(cè)胰腺癌及癌旁組織中NEDD9的表達(dá)情況，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)NEDD9在胰腺癌組織中的表達(dá)含量明顯高于癌旁組織，胰腺癌組織中NEDD9的表達(dá)與患者TNM分期、分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。有研究通過(guò)對(duì)胰腺癌組織中Cys-LTR-1 mRNA的測(cè)定和檢測(cè)胰腺癌組織中NEDD9的表達(dá)含量，發(fā)現(xiàn)兩者在胰腺癌組織中的表達(dá)都高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[28]，進(jìn)一步驗(yàn)證了NEDD9在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中的重要性，但并未探討兩者在胰腺癌中的具體作用機(jī)制。

3 NEDD9與胰腺癌的治療

胰腺癌作為消化道最致命的惡性腫瘤，對(duì)人類(lèi)生存的惡劣影響毋庸置疑，故盡快尋找到針對(duì)胰腺癌更有效的治療方法顯得日益重要。中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)體外培養(yǎng)胰腺導(dǎo)管細(xì)胞癌，利用microRNA-145（miR-145）轉(zhuǎn)染癌細(xì)胞后，NEDD9 mRNA的表達(dá)降低了51%，NEDD9蛋白的表達(dá)降低了52.21%[29]。miR-145在胰腺癌中的表達(dá)與NEDD9呈負(fù)相關(guān)，同時(shí)應(yīng)用熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)發(fā)現(xiàn)miR-145可靶向減少NEDD9的表達(dá)，提示miR-145通過(guò)靶向抑制NEDD9的表達(dá)進(jìn)一步抑制胰腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。這提示我們，miR-145或許可成為未來(lái)治療胰腺癌的一種新穎的治療方法。黃芩素抑制胰腺癌的作用機(jī)制除上述以外，它還可通過(guò)抑制PI3K/Akt和MEK/ERK信號(hào)的活化，能有效地抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，并導(dǎo)致大量癌細(xì)胞的凋亡[30]。此外，黃芩素通過(guò)降低NEDD9依賴(lài)型PDK1的表達(dá)而抑制Akt在T-308上的磷酸化，這是黃芩素使Akt和ERK信號(hào)通路失活的一個(gè)重要原因[31]。事實(shí)上，黃芩素僅對(duì)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)具有特殊的抑制作用，而對(duì)人體正常細(xì)胞的毒性微乎其微[32]，這提示我們，未來(lái)黃芩素或許可作為一種潛在的治療藥物給胰腺癌患者帶來(lái)福音。越來(lái)越多的證據(jù)表明，NEDD9過(guò)表達(dá)是許多腫瘤的共同特征，并直接影響腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。尤其對(duì)胰腺癌而言，NEDD9參與多種信號(hào)通路促進(jìn)胰腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，研究NEDD9有助于推動(dòng)胰腺癌的早期篩查和靶向治療，同時(shí)為胰腺癌未來(lái)的研究提供一定的思路和方向。

4 結(jié)語(yǔ)

截止目前，針對(duì)胰腺癌的治療，盡管在手術(shù)、化療或是免疫療法上都有所突破，但取得的療效仍不足以對(duì)抗胰腺癌逐年上升的發(fā)生率與病死率。NEDD9在胰腺癌組織中高表達(dá)，不僅參與胰腺癌的發(fā)生，還與胰腺癌的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散有關(guān)。胰腺癌的發(fā)生機(jī)制無(wú)疑是復(fù)雜的，目前雖然有許多關(guān)于NEDD9的研究，其參與腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中涉及多種信號(hào)通路，富有特征性，但是其分子機(jī)制及信號(hào)通路仍未完全闡明，所以仍然需要更廣泛的實(shí)驗(yàn)去研究NEDD9在胰腺癌中更加具體化的作用機(jī)制，最終將研究結(jié)果轉(zhuǎn)化為對(duì)胰腺癌的有效治療和改善患者的預(yù)后上。