一起規(guī)?；半u場(chǎng)非典型性新城疫的綜合診斷與防治

呂奇鵬，楊孝樸

（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，甘肅 蘭州 730070）

1 材料

1.1 發(fā)病雞場(chǎng)

青海省大通縣某規(guī)?；半u場(chǎng)共有雞舍8棟，其中1號(hào)、2號(hào)雞舍為育成雞舍，3號(hào)至8號(hào)為產(chǎn)蛋雞舍，采用5層階梯式籠養(yǎng)，自動(dòng)上料、飲水，人工撿蛋，每棟產(chǎn)蛋雞舍存欄產(chǎn)蛋雞10 000 只。2018年6月2日下午5點(diǎn)，3號(hào)雞舍飼養(yǎng)員反應(yīng)，該棟雞舍的雞群采食量明顯減少，約為 650 kg，產(chǎn)蛋率也由前段時(shí)間的 82.7% 下降為 60.2%，死亡雞 12 只，其余雞舍均正常。

1.2 樣品采集

采集病死雞的脾、肺、肝臟和腸管等病變組織樣品10份，編號(hào)為A1-A10。其中A1、A2為脾臟的病變組織，A3、A4為肺臟的病變組織，A5、A6為肝臟的病變組織，A7、A8為腎臟的病變組織，A9、A10為腸管的病變組織。

采集3號(hào)雞舍發(fā)病雞泄殖腔試子樣品5份，編號(hào)為B1-B5。

采集3號(hào)雞舍發(fā)病雞新鮮糞便樣品5份，編號(hào)為B6-B10。

1.3 主要儀器

超凈工作臺(tái)、立式壓力蒸汽滅菌鍋、電子分析天平、電子恒溫箱、移液槍、96孔微型反應(yīng)板、生物顯微鏡、數(shù)顯恒溫水浴鍋、切片機(jī)、展片機(jī)、烘片機(jī)等。

1.4 主要試劑

SPF雞胚和SPF雛雞；新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、新城疫抗原；禽流感H5、H7、H9抗原；制作切片和染色常用的試劑；配置pH7.2 PBS、雞紅細(xì)胞懸液（1%）、固定液、抗原液和青鏈霉素液等。

2 方法

2.1 臨床診斷

2.1.1 臨床癥狀觀察 分為群體觀察和個(gè)體觀察。群體觀察主要觀察雞群的精神狀態(tài)、采食量和飲水量，糞便顏色和形態(tài)，產(chǎn)蛋量，并聽雞群的呼吸聲。個(gè)體觀察主要觀察精神、呼吸系統(tǒng)和糞便。

2.1.2 流行病學(xué)調(diào)查 主要詢問(wèn)了該養(yǎng)殖場(chǎng)的新城疫的免疫情況，近幾年新城疫發(fā)病情況，并了解本地區(qū)其他養(yǎng)雞場(chǎng)新城疫的發(fā)病狀況。

2.2 病理診斷

2.2.1 病理解剖 對(duì)死亡的雞進(jìn)行解剖，主要觀察消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)以及心血管系統(tǒng)的病理變化。

2.2.2 病理組織學(xué)觀察 分別從具有典型剖解變化的病死雞內(nèi)臟切取適當(dāng)大小的肺（A3）、肝（A6）、腎（A7）和腸管（A10）組織塊，經(jīng)固定、脫水、透明、浸蠟和包埋處理后切片，采用 HE 染色，光學(xué)顯微鏡下 400 倍觀察組織變化，并拍照。同時(shí)取正常健康雞相同部位組織塊，同法制作組織切片，進(jìn)行對(duì)照觀察[1]。

2.3 病原學(xué)診斷

2.3.1 病毒培養(yǎng) 按操作流程進(jìn)行樣品處理，雞胚接種及病毒收獲。收集36～96 h內(nèi)死亡的雞胚和活胚尿囊液。

2.3.2 病毒鑒定及毒力測(cè)定 某些病毒能夠與雞的紅細(xì)胞發(fā)生凝集現(xiàn)象，即紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（HA）；這種紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象可于病毒懸液中加入特異免疫血清所抑制，即血凝抑制試驗(yàn)（HI），可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)血清對(duì)分離的病毒進(jìn)行鑒定[2]。另外進(jìn)行雞胚最小致死量平均死亡時(shí)間（MDT）的測(cè)定[3]和腦內(nèi)致病指數(shù)（ICPI）的測(cè)定[4]。利用MDT將新城疫病毒株分為強(qiáng)毒力型、中等毒力型、溫和型三種：強(qiáng)毒力型的 MDT≤60 h，中等毒力型的MDT 在61～90 h；溫和型的MDT＞90 h。每只雞8 d內(nèi)觀察數(shù)值的平均數(shù)即為ICPI，最強(qiáng)毒力病毒的ICPC接近最大值2.0，溫和型毒株的ICPC值接近于0。

2.4 防治

2.4.1 藥物干預(yù) 對(duì)于發(fā)病的3號(hào)雞舍，采用先藥物干預(yù)再緊急免疫接種的處置方法。由于疫情發(fā)現(xiàn)及時(shí)，雖然產(chǎn)蛋率和采食量明顯下降，但死亡率并未明顯增高，為減少雞場(chǎng)的損失，針對(duì)實(shí)際情況，對(duì)發(fā)病的3號(hào)雞舍采取先用藥物干預(yù)，再用疫苗緊急接種。藥物干預(yù)方法為：（1）清瘟敗毒散拌料：每1 kg清瘟敗毒散拌料250 kg，連續(xù)飼喂 3 d；（2）飲水中加入毒抗（主要成分為黃芪多糖）：每100 g毒抗兌水250 kg，連用3 d。

2.4.2 緊急預(yù)防 未發(fā)病的其他雞舍先用雞新城疫Ⅳ系弱毒疫苗4倍量飲水免疫接種，24 h 后再用藥物預(yù)防。藥物及用法為：按1 kg清瘟敗毒散拌料500 kg，100 g毒抗兌水500 kg，連用3 d。 發(fā)病雞舍（3號(hào)雞舍）先用2.4.1方法處治后，停藥1 d，再用雞新城疫Ⅳ系弱毒疫苗4倍量飲水免疫接種，24 h內(nèi)的死亡率小于 0.05% 時(shí)，再用藥物進(jìn)行預(yù)防。藥物及用法同上。

3 結(jié)果

3.1 臨床診斷

3.1.1 臨床癥狀 經(jīng)群體檢查發(fā)現(xiàn)，3號(hào)雞舍內(nèi)雞群整體精神萎靡，垂頭縮頸，眼半閉，張嘴呼吸，能聽到“咯咯”的喘鳴聲，個(gè)別雞只站立不穩(wěn)，頭頸向一側(cè)扭轉(zhuǎn)，糞便稀薄，呈黃綠色或黃白色，有的雞只可以見到蛋清樣的糞便。將雞倒提時(shí)有大量酸臭的液體從口內(nèi)流出。

3.1.2 流行學(xué)調(diào)查 通過(guò)詢問(wèn)了解到該養(yǎng)雞場(chǎng)近三年來(lái)發(fā)生過(guò) 4 次類似疾病，其中有 2 次被診斷為新城疫；周邊3個(gè)規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)近年來(lái)也發(fā)生過(guò) 2次新城疫疫情?？傊?，根據(jù)病雞臨床癥狀和該雞場(chǎng)近三年疫病發(fā)生情況及周邊雞場(chǎng)存在散發(fā)新城疫的實(shí)際，初步懷疑為雞新城疫。

3.2 病理診斷

3.2.1 剖檢病理變化 對(duì)死亡的蛋雞進(jìn)行解剖，發(fā)現(xiàn)病變主要集中在消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)以及心血管系統(tǒng)。消化系統(tǒng)主要表現(xiàn)為腺胃腫脹，乳頭出血，肌胃角質(zhì)膜下出血，腸道淋巴濾泡有棗核狀的出血，盲腸扁桃體嚴(yán)重腫脹、出血和壞死，泄殖腔積氣積液。呼吸系統(tǒng)可見氣管內(nèi)有大量黏液，并伴有出血。生殖系統(tǒng)主要表現(xiàn)為卵泡變形，卵黃變稀，卵黃囊嚴(yán)重充血，其中3只雞的卵黃破裂，形成卵黃性腹膜炎，輸卵管病變不明顯。另外，心外膜及冠狀脂肪上可見針尖大小的點(diǎn)狀出血。

3.2.2 病理組織學(xué)變化 腎臟，腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生不同程度的變性，上皮細(xì)胞脫落至腎小管管腔，導(dǎo)致部分腎小管組織結(jié)構(gòu)不清，管腔發(fā)生不同程度的堵塞。肺臟，肺泡壁毛細(xì)血管發(fā)生充血，肺泡壁增厚，少量肺泡上皮細(xì)胞脫落，散落在肺泡腔中。同時(shí)，部分肺泡腔中有少量的紅細(xì)胞。肝臟，肝臟組織機(jī)構(gòu)不清，中央靜脈有血液成分，肝索紊亂，竇狀隙變窄，肝細(xì)胞發(fā)生空泡樣變性和壞死，肝細(xì)胞核消失，少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。腸道黏膜充血，腸上皮細(xì)胞有不同程度變性、脫落，腸管變薄，少量炎性細(xì)胞。綜上所述，根據(jù)臨床癥狀和病理變化，再結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查，初步診斷為一起疑似非典型性雞新城疫病例。

3.3 病原學(xué)診斷

3.3.1 病毒分離培養(yǎng) 雞胚在接種樣品后40～90 h，全部死亡，雞胚尿囊液清亮，頭部嚴(yán)重出血。對(duì)收集的尿囊液進(jìn)行細(xì)菌檢測(cè)，無(wú)細(xì)菌。

3.3.2 血凝試驗(yàn)（HA） 對(duì)采集的20份樣品進(jìn)行血凝試驗(yàn)，均可以凝集1%的雞紅細(xì)胞，血凝效價(jià)分別為25～28，病死雞組織樣品的血凝效價(jià)總體高于發(fā)病雞舍活雞泄殖腔試子和糞便樣品的血凝效價(jià)。

3.3.3 血凝抑制試驗(yàn)（HI） 根據(jù)血凝試驗(yàn)結(jié)果制備4HUA病毒液，用新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清和禽流感H5、H7、H9標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清分別對(duì)這20份樣品進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)。20份樣品都能被新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清抑制，不能被禽流感H5、H7、H9標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清抑制。

3.3.4 雞新城疫病毒毒力測(cè)定結(jié)果 對(duì)確定的20份新城疫病毒樣品進(jìn)行MDT和ICPI檢測(cè)。MDT檢測(cè)結(jié)果均在61～96 h，ICPI檢測(cè)結(jié)果均在0.4～1.1。參照新城疫病毒毒力強(qiáng)弱的判定標(biāo)準(zhǔn)， 20份新城疫病毒有17份屬于中等毒力，3份屬于溫和型。通過(guò)分離病毒和進(jìn)行血凝試驗(yàn)（HA）及血凝抑制試驗(yàn)（HI），確診為一起非典型性雞新城疫。

3.4 非典型新城疫的防治

發(fā)病雞舍采取相關(guān)措施后采食量逐天增加，產(chǎn)蛋率逐天上升。通過(guò)藥物干預(yù)，病雞的精神狀況和糞便顏色也基本恢復(fù)正常。停藥1 d后，緊急接種新城疫Ⅳ系疫苗，疫苗接種后第三天，雞死亡2只，采食量達(dá)到1 250 kg，產(chǎn)蛋率達(dá)到 84.6%。未發(fā)病雞舍采取先緊急接種Ⅳ系疫苗，24 h后藥物預(yù)防，未發(fā)現(xiàn)新的新城疫疫情。

4 討論

對(duì)于近年來(lái)常發(fā)生的非典型性新城疫如何快速的診斷，根據(jù)不同的發(fā)病情況采取及時(shí)合理的治療措施是當(dāng)前基層一線獸醫(yī)必須掌握的基本技能；新城疫的預(yù)防僅靠疫苗免疫不夠，必須要采取更加綜合的防控措施控制新城疫的發(fā)生，減少損失；發(fā)生非典型性新城疫時(shí)，關(guān)鍵要平衡風(fēng)險(xiǎn)，采取緊急免疫措施，并及時(shí)進(jìn)行藥物預(yù)防，還應(yīng)注意防止細(xì)菌性疾病的繼發(fā)感染。