免疫熒光法在小兒上呼吸道感染微生物快速檢驗中的應用效果

孫續(xù)祿

達州職業(yè)技術學院影像檢驗系，四川 達州 635000

上呼吸道感感染是常見的兒科疾病，一般在兒童群體較為多發(fā)，該疾病發(fā)病率高，且病情反復，如未能及時治療可能會引發(fā)小兒哮喘，對患兒的生長發(fā)育和健康成長帶來嚴重的影響，因此實施快速檢驗對診療起到重要的作用。相關資料顯示，由病毒引起的小兒上呼吸道感感染患兒占95%，其中呼吸道合胞病毒最為常見，還有副流感病毒、人鼻病毒等。傳統(tǒng)病毒分離鑒定操作具有一定復雜性，在臨床應用中存在一定的難度。選取我院小兒上呼吸道感染患兒100例，研究免疫熒光法快速檢驗的臨床效果，報告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例時段及對象：2017年10月-2018年10月，我院小兒上呼吸道感染患兒100例，其中男女患兒比例57:43；年齡值域區(qū)間2個月-10歲，均齡（4.25±0.32）歲；體重11-40kg，平均體重（16.1±3.7）kg；其中咽部感染62例、鼻部感染38例。

納入標準：①參照《中華人民共和國傳染疾病防治法》，符合相關診斷標準，入選患者均經(jīng)臨床診斷確診；②經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批備案；③患者家屬知曉同意研究并簽署書面協(xié)議。排除標準：①血液系統(tǒng)疾病者；②凝血機制異常者；③其他慢性疾?。虎芘R床資料不全者；⑤配合度、依從性較差者。⑥心肝腎等重要臟器功能嚴重損傷者；⑦精神嚴重異常者。

1.2 方法

1.2.1 設備及試劑 選擇我院熒光顯微鏡、呼吸道病毒抗原檢測試劑盒及單克隆熒光標記抗體，包括副流感病毒（PIV）、1、2、3，流感病毒（FIu）A、B，合胞病毒（RSA），腺病毒（ADV）、肺炎支原體（MP)試劑盒[1]。

1.2.2 采集標本及制片 將小兒微細型鼻咽植絨拭子置入患兒鼻腔中，深度適宜約6-8cm，旋轉2圈后取出，使用生理鹽水塑料試管保存。將標本中細胞采取漩渦振蕩器進行震蕩，取出植絨拭子，進行離心操作處理（轉速2520r/min，時間5-10min），吸出上層清液，若剩余沉淀較多，則繼續(xù)洗滌離心處理，去除粘液，搖勻后滴加細胞懸濁液25ul，將玻璃片放置在烤箱中進行干燥處理（保證溫度約35攝氏度），并應用冷丙酮進行固定[2]。

1.2.3 檢測 將20ul熒光抗體滴在樣孔細胞上，在保濕箱中孵育，并采取洗滌液進行反復沖洗，干燥后將取1滴置于玻璃樣孔中并封閉，采取熒光顯微鏡進行觀察，被標記過的病毒克隆抗體結合抗原后，其復合物中陽性細胞呈現(xiàn)為綠色熒光，而未感染細胞無熒光[3]。

1.3 觀察指標 將顯微鏡皮倍數(shù)調整為200倍，存在大于2個熒光細胞則判定為陽性。

1.4 統(tǒng)計學分析 分別使用均數(shù)（Mean±SD）和例（n）、百分率（%）錄入計量資料和計數(shù)資料，所得數(shù)據(jù)錄入SPSS25.0軟件中進行T值和χ2檢驗，P<0.05為統(tǒng)計值有學差異。

2 結果

2.1 病毒類型 100例患兒經(jīng)檢測共檢出病毒抗原陽性88例，檢出率為88%，其中合胞病毒63.64%（56例）、副流感病毒3.41%（3例）、流感病毒A 12.5%（11例）、流感病例B 3.41%（3例）、腺病毒14.77（13例）、混合型2.28%（2例）。

2.2 年齡分布 病毒抗原陽性88例患兒，其中年齡1-6個月分布占比42.06%最高，其次為6-12個月占比26.14%、大于12月最小。

3 討論

上呼吸道感染具有疾病傳播快、感染性高的特征，特別是兒童因免疫能力低、抵抗力差，入院后發(fā)生交叉感染的風險較大，因此在早期開展微生物快速檢驗對臨床隔離及制定方案的制定具有顯著的價值。

本次研究結果表明：100例患兒經(jīng)檢測共檢出病毒抗原陽性88例，檢出率為88%。其中病毒類型合胞病毒、副流感病毒、流感病毒A、B、流感病毒、腺病毒、混合型分別占比63.64%、3.41%、12.5%、3.41%、14.77%、2.28%。針對上呼吸道感染患兒，臨床診斷的方法較多，如病毒分離培養(yǎng)，該檢測手段所需時間長，條件要求高，無法廣泛普及，在臨床個應用中存在一定的局限性。免疫熒光法具有快速、操作便捷的優(yōu)勢，尤其是針對兒童樣本取材較為方面，且準確性高，從而為臨床病原學分析提供可靠的實驗室信息[4]。在本次研究中病毒抗原陽性多分分布于1-6個月的兒童群體，與患兒體內來母體抗體逐漸減少，且自身免疫球蛋白稀少密切相關。

綜上所述，免疫熒光法對小兒上呼吸道感染患兒檢驗價值較高，可明確病毒類型，從而為臨床診療工作的開展提供有效信息，可推薦廣泛應用并推廣。