ARID1a和錯(cuò)配修復(fù)蛋白HMLH1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)及意義

肖紅燕，虎明明，樊學(xué)敏

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)生在子宮內(nèi)膜的一組上皮惡性腫瘤，好發(fā)于絕經(jīng)期、絕經(jīng)后女性中[1]。隨著生活水平的提高及外用保健品的服用，使得子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生率逐漸升高，已成為僅次于宮頸癌的第二類女性生殖道腫瘤[2]。目前，臨床上對(duì)于子宮內(nèi)膜癌病因及發(fā)生機(jī)制尚未明確。ARID1a又被稱為BRG1相關(guān)因子250a(BAF250a)，是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，可以調(diào)節(jié)染色體的重塑功能[3]。約6%腫瘤中存在ARID1a突變，能直接參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[4]。研究表明[5]：人類錯(cuò)配修復(fù)基因1(HMLH1)及其編碼蛋白質(zhì)是DNA錯(cuò)配修復(fù)(MMR)系統(tǒng)的重要成員之一，常協(xié)同在堿基錯(cuò)配修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮解旋及切開錯(cuò)配堿基作用，可誘發(fā)腫瘤的發(fā)生。本研究以子宮內(nèi)膜癌作為研究對(duì)象，探討ARID1a和HMLH1蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2017年6月-2019年7月子宮內(nèi)膜癌患者94例，所有患者均行手術(shù)治療，取病灶組織與癌旁組織(≥3 cm，包括正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜非典型增生)。患者年齡19～63歲，平均(46.89±5.71)歲；病程1～6個(gè)月，平均病程(3.29±0.64)個(gè)月；腫瘤直徑1～6 cm，平均(3.49±0.61)cm；分化類型：低分化21例，中分化50例，高分化23例；腫瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期63例，Ⅲ-Ⅳ期31例；肌層浸潤(rùn)深度：僅侵及黏膜層39例，侵犯子宮肌層<1/2 28例，侵犯子宮肌層>1/2 27 例；腫瘤部位：宮角32例，宮底29例，宮腔21例，宮頸12例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有轉(zhuǎn)移30例，無(wú)轉(zhuǎn)移64例。

1.2 檢測(cè)方法：采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定不同病灶組織中ARID1a與HMLH1蛋白陽(yáng)性率。一抗ARID1a兔抗人多克隆抗體購(gòu)自ABCAM公司，HMLH1兔抗人多克隆抗體購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。二抗為 Envision法免疫組化檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自DAKO公司。實(shí)驗(yàn)分別設(shè)置陰性與陽(yáng)性對(duì)照，檢測(cè)組織中ARID1a和HMLH1表達(dá)情況。判斷標(biāo)準(zhǔn)：ARID1a與HMLH1均核著色。免疫組化完畢后，在制備的切片中找出陽(yáng)性細(xì)胞，顯微鏡下觀察結(jié)構(gòu)完整、清晰且定位較為明確的細(xì)胞；細(xì)胞核內(nèi)呈棕黃色，且顏色明顯高于背景[6]，判讀為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中ARID1a與HMLH1蛋白陽(yáng)性率比較：ARID1a在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)率分別為80.85%、78.72%、40.34%表達(dá)率逐漸降低，缺失率逐漸升高，子宮內(nèi)膜癌灶組織與癌旁組織(正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜非典型增生)表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；正常子宮內(nèi)膜與非典型增生子宮內(nèi)膜差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HMLH1在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜非典型增生、子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)率分別為94.68%、89.36%、68.09%，表達(dá)率逐漸降低，缺失率逐漸升高，癌灶與癌旁差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；正常子宮內(nèi)膜組織與子宮內(nèi)膜非典型增生HMLH1陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1與圖1-圖4(目錄后)。

表1 不同組織中ARID1a與HMLH1蛋白陽(yáng)性率[n(%)]

2.2 ARID1a、HMLH1蛋白與臨床病理特征的關(guān)系:子宮內(nèi)膜癌組織中ARID1a蛋白與分化類型相關(guān)，分化越低，ARID1a蛋白表達(dá)越低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移ARID1a蛋白表達(dá)降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腫瘤分期越高，ARID1a蛋白表達(dá)越低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、肌層浸潤(rùn)深度差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。子宮內(nèi)膜癌中HMLH1表達(dá)與分化類型相關(guān)，分化越低，HMLH1蛋白表達(dá)越低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腫瘤分期越高，HMLH1蛋白表達(dá)越低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、肌層浸潤(rùn)深度差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 ARID1a、HMLH1蛋白與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是女性三大惡性生殖腫瘤之一，其組織學(xué)類型可分為Ⅰ型與Ⅱ型兩種，而后者又包括：漿液性乳頭狀腺癌、透明細(xì)胞癌等[7]。本研究主要研究的是Ⅰ型散發(fā)性子宮內(nèi)膜腺癌。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素過(guò)程，多與雌激素水平、年齡、遺傳因素有關(guān)[8]。ARID1a基因在人體中分布較廣，多位于1號(hào)染色體1p36.11區(qū)，編碼酵母菌SWII的人類同源體，屬于染色質(zhì)重塑(SWI/SNF)復(fù)合物的整合成員[9]。而SWI/SNF復(fù)合體能發(fā)揮抑制或提高轉(zhuǎn)錄的作用，在基因的調(diào)節(jié)中具有重要作用。SWI/SNF復(fù)合體存在于諸多細(xì)胞中，能直接參與細(xì)胞的發(fā)生、分化、增殖[10]。ARID1a基因編碼的蛋白BAF250是SWI/SNF復(fù)合體附屬亞基，能保證基因的專屬性。既往研究表明[11]ARID1a基因活性與組織特異性的基因表達(dá)、生長(zhǎng)發(fā)育及性激素反應(yīng)有關(guān)，該基因缺失則能引起生殖細(xì)胞停止發(fā)育，影響胚胎干細(xì)胞的潛能，抑制其更新。同時(shí)，ARID1a基因在部分腫瘤表達(dá)中缺失，且在子宮內(nèi)膜癌中發(fā)生頻率較高[12]。本研究中，正常組織與子宮內(nèi)膜非典型增生ARID1a蛋白陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，子宮內(nèi)膜癌病灶組織中ARID1a蛋白陽(yáng)性率明顯低于非典型增生組織(P<0.05)；與子宮內(nèi)膜樣腺癌分化類型相關(guān)，分化越低，ARID1a表達(dá)越低，缺失率越高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說(shuō)明ARID1a表達(dá)缺失在早期子宮內(nèi)膜樣腺癌就發(fā)生了，而且隨著惡性程度的增加，缺失率越高。此外，本研究還顯示淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移及腫瘤分期越高，ARID1a表達(dá)率越低，缺失越高，由此推測(cè)ARID1a表達(dá)的子宮內(nèi)膜樣腺癌預(yù)后可能要好于缺失的子宮內(nèi)膜樣腺癌，但這只是一個(gè)推測(cè)，還需要后續(xù)大樣本的病例預(yù)后研究證實(shí)。

MMR系統(tǒng)最早于大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)，主要依靠MutH、MutL等基因編碼酶分子、矯正堿基發(fā)生的錯(cuò)配，能修復(fù)DNA復(fù)制期間發(fā)生的堿基錯(cuò)配，維持基因組的穩(wěn)定[13]。研究表明，HMLH1蛋白在特異性識(shí)別、修復(fù)DNA復(fù)制過(guò)程中，能引起堿基錯(cuò)配，清除錯(cuò)誤的不配對(duì)堿基，降低自身堿基。同時(shí)，HMLH1蛋白亦可防止基因突變，維持基因功能的穩(wěn)定性[14]。本研究中，子宮內(nèi)膜癌病灶組織中HMLH1蛋白陽(yáng)性率低于癌旁組織(P<0.05)；癌旁組織中正常組織與子宮內(nèi)膜非典型增生HMLH1蛋白陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與子宮內(nèi)膜樣腺癌分化類型相關(guān)，分化越低，HMLH1表達(dá)越低，缺失率越高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這與大多數(shù)文獻(xiàn)研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果還顯示HMLH1表達(dá)與腫瘤分期成負(fù)相關(guān)，腫瘤分期越高，表達(dá)越低。這與Pasanen[15]研究結(jié)果不一致，可能是病例數(shù)量及選取的病例類型存在差異而導(dǎo)致的，這還需要后續(xù)擴(kuò)大樣本數(shù)量進(jìn)行證實(shí)。

綜上所述，ARID1a及HMLH1蛋白均可以在子宮內(nèi)膜癌中缺失表達(dá)，且隨著分化程度降低，表達(dá)率逐漸下降，同時(shí)檢測(cè)兩個(gè)蛋白表達(dá)對(duì)診斷子宮內(nèi)膜樣腺癌有一定的診斷意義。推測(cè)兩者在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展中可能存在相關(guān)性，但具體關(guān)系還不能明確，還需要大量的病例及分子機(jī)制的研究證實(shí)。