種雞舍采用臭氧水消毒的適宜使用方法研究

段坤 王述柏 初歡歡 張倩 秦志華 周傳鳳

摘要?[目的]研究臭氧水在種雞舍的消毒效果及使用方法。[方法]對空舍期雞舍使用20 mg/L的臭氧水分別消毒15、30、60 min，檢測消毒前后菌落數(shù)的變化情況;使用臭氧水浸泡水線消毒30 min，觀察臭氧水對水線內(nèi)細菌的殺滅率;每天使用10 mg/L的臭氧水帶雞消毒30 min，連續(xù)處理7 d，檢測處理前、后雞舍內(nèi)菌落總數(shù)、氨氣、硫化氫含量及種雞生產(chǎn)性能。[結果]空舍期雞舍使用20 mg/L的臭氧消毒30和60 min，細菌殺滅率在98%以上，與消毒15 min和甲醛消毒法差異顯著（P<0.05）;臭氧水對水線消毒30 min，總細菌殺滅率達99.04%，大腸桿菌未檢出;臭氧水帶雞消毒對種雞的生產(chǎn)性能無不良影響（P>0.05），能明顯減少舍內(nèi)的菌落總數(shù)，降低空氣中氨和硫化氫的含量（P>0.05）。[結論]空舍期種雞舍和水線使用20 mg/L的臭氧水消毒30 min可以有效殺滅微生物，使用10 mg/L臭氧水每天帶雞噴霧消毒30 min可以有效減少雞舍內(nèi)菌落總數(shù)和有害氣體的產(chǎn)生。

關鍵詞?種雞;臭氧水;消毒

中圖分類號?S831.4文獻標識碼?A

文章編號?0517-6611（2020）02-0109-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.02.029

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Study on the Suitable Method for Ozone Water Disinfection of Breeding Chicken House

DUAN Kun1，WANG Shu-bai2，CHU Huan-huan1 et al（1.Yantai Land Husbandry Co.， Ltd.， Yantai，Shandong265100;2.College of Animal Science and Technology，Qingdao Agricultural University，Qingdao， Shandong266109）

Abstract?[Objective]To study the disinfection effect and ozone water disinfection method of breeding chicken house.[Method]The quantities changes of bacterial colonies in chicken house in the period of empty houses were detected before and after disinfection by using 20 mg/L ozone water for 15， 30 and 60 min， respectively.The inactivation rate of bacteria in drinking water pipe was detected after being disinfected by ozone water for 30min.The breeding chicken in house were disinfected with 10 mg/L ozone water for 30min every day for 7 days.Then the quantities of bacterial colonies， ammonia gas， hydrogen sulfide content were detected before and after this treatment， and the production performance of breeding chicken were also detected.[Result]The inactivation rates of bacteria in the period of empty houses disinfected by 20 mg/L ozone water for 30 and 60min respectively were more than 98%， which had significant difference with that in 15min treatment group and formaldehyde disinfection group （P<0.05）. The overall bactericidal rate in drinking water pipe disinfected by ozone water for 30min was 99.04%， in which E.coliwas not detected.The disinfection on breeding chicken in house had no badinfluences on the production performance of breeding chicken （P>0.05），but the quantities of bacterial colonies in chicken house obviously decreased， and the contents of ammonia gas and hydrogen sulfide in the atmosphere reduced （P>0.05）.[Conclusion]The disinfection with 20 mg/L ozone water for 30min in breeding chicken house and drinking water pipe in the period of empty houses could effectively kill the microorganisms， and the spraying disinfection with 10 mg/L ozone water for 30min daily could effectively reduce the total number of colonies and harmful gases in the chicken house.

Key words?Breeding chicken;Ozone water;Disinfection

有效消毒是保障畜禽健康生產(chǎn)的重要生物安全措施。臭氧（又名活性氧）具有強氧化性， 一定濃度下可迅速殺滅水和空氣中的細菌、病毒、原蟲等微生物體，常態(tài)下1%水溶液殺死大腸桿菌的速度是氯的 600～3 000倍，對空氣中的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌具有良好的殺滅作用[1];對附著于物體表面的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺滅率分別為99.70%和99.90%[2];對雞新城疫病毒有明顯的滅活作用[3];可有效殺滅各種細菌的繁殖體和芽孢，并可破壞肉毒桿菌毒素[4]。臭氧溶液可全部殺死黃曲霉、黑曲霉及酵母等，被稱為“高效環(huán)保清潔劑”[5]。臭氧具有獨特的氣體流動性和化學性質(zhì)，且具有無殘留、無消毒死角等優(yōu)點[6]，被廣泛用于工業(yè)、醫(yī)療、農(nóng)業(yè)以及食品加工業(yè)等。近年來，臭氧在養(yǎng)殖領域也逐漸開始應用，如種蛋的消毒、飲用水消毒等。近年來家禽養(yǎng)殖場的消毒大多采用季銨鹽和甲醛-高錳酸鉀消毒法，甲醛消毒具有刺激性強，易導致家禽的皮膚、眼部和呼吸道等器官黏膜的損傷，同時也可能引起工作人員中毒[7];美國環(huán)境保護局制定的《有毒物質(zhì)控制法》規(guī)定，臭氧可替代甲醛作為種蛋孵化的消毒劑[8]。目前，臭氧在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的應用已引起廣泛關注，但在種雞養(yǎng)殖過程中如何合理使用臭氧消毒及其消毒效果的研究則鮮見報道。筆者研究了采用臭氧水在種雞舍空舍期、水線、種雞飼養(yǎng)期帶雞消毒的消毒效果及其適宜使用方法，旨在為其在家禽養(yǎng)殖過程中推廣應用提供參考依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?試驗動物?31周齡的健康AA+種母雞200只。

1.2?試驗材料

1.2.1?試劑。平板計數(shù)瓊脂、LST肉湯、EC肉湯、EMB瓊脂、生理鹽水。

1.2.2?設備。

臭氧水發(fā)生器（由青島歐帝歐環(huán)?？萍及l(fā)展有限公司提供），羥基氧化液最高濃度為20 mg/L，設備的輸送介質(zhì)為自來水，進水量2 m3/h;恒溫培養(yǎng)箱;氨氣檢測儀（GAXT-A/NH3）;硫化氫檢測儀（GAXT-H）。

1.3?試驗設計

1.3.1?空舍期雞舍消毒。

1.3.1.1?分組及處理。對清洗后的2棟雞舍（長50 m，寬13.5 m，高4.5 m）進行消毒，1號雞舍為試驗組，采用臭氧水噴霧消毒：將設備接上水電，開機，待設備運行10 min后將制取的高濃度羥基氧化液（20 mg/L）接入噴霧設備中，對雞舍地面、墻壁、門窗、用具及舍內(nèi)空間等全區(qū)域噴灑消毒，于消毒開始后15、30和60 min后分別取樣，消毒時舍內(nèi)溫度控制在（25±2）℃;2號雞舍為對照組，采用甲醛-高錳酸鉀熏蒸消毒方式，使用45 mL/m3甲醛+20 g/m3 KMnO4對雞舍密閉熏蒸消毒48 h，室內(nèi)溫度25 ℃以上，48 h后采樣。

1.3.1.2?樣品采集、檢測指標與方法。①空氣沉降菌檢測。分別于消毒前、消毒后各時間點，在雞舍內(nèi)采用五點采樣法采樣，在雞舍內(nèi)中央的中點、雞舍內(nèi)四角對角線與2條料線交叉位置的4個點采樣。采樣點距離地面60 cm高，每點放置瓊脂平板各1套，打開皿蓋，10 min后蓋好皿蓋回收。樣品放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 h，計數(shù)菌落數(shù)（CFU/皿），取5點平均值。 ②環(huán)境表面菌檢測。分別于消毒前、消毒后各時間點，在雞舍內(nèi)東南西北四面墻的墻壁、墻角、雞籠的左側上層、中間中層、右側下層、2條水線的中間位置、料盤、風窗口共15處，采集棉拭子涂抹樣（取樣面積為5 cm×5 cm）進行細菌培養(yǎng)，計數(shù)菌落數(shù)。每處理結果取15個點的平均值。

1.3.2?對種雞舍水線的消毒。

雞舍熄燈后，關閉氯泵，用新鮮配制的臭氧水連續(xù)浸泡水線30 min，臭氧水濃度為20 mg/L。使臭氧水自然分解，分別在浸泡開始前和浸泡30 min后采樣，檢測水線水中菌落總數(shù)和大腸桿菌數(shù)量。菌落總數(shù)與大腸桿菌數(shù)量，分別采用平板計數(shù)法和MPN法檢測[9]。

1.3.3?帶雞消毒。

1.3.3.1?分組與處理。將200只種母雞隨機分成2組，每個組設5個重復，每個重復20只。飼養(yǎng)觀察7 d，期間調(diào)整雞只，使2組的產(chǎn)蛋率等生產(chǎn)性能指標無顯著差異。Ⅰ 組為試驗組，采用臭氧水消毒，試驗組在早晨第一次喂料時通過霧線進行臭氧水噴霧消毒，按每1 min噴霧12 s、停48 s的方式連續(xù)噴霧消毒0.5 h，臭氧水濃度為10 mg/L。Ⅱ 組為對照組，只噴灑水霧不加消毒劑，噴霧方式與試驗組相同。噴霧每天進行1次，連續(xù)7 d。2組雞飼養(yǎng)于同一棟雞舍，采用3層籠養(yǎng)，飼料和飼養(yǎng)管理措施相同。

1.3.3.2?檢測指標與方法。①雞籠菌落數(shù)量檢測。于第1天消毒前、后分別按左側上、中、下，中間上、中、下和右側上、中、下，共9點取雞籠涂抹樣，取樣面積5 cm×5 cm。樣品用生理鹽水稀釋后采用平板計數(shù)法進行培養(yǎng)檢測，計數(shù)菌落數(shù)，結果取各點平均值。

②空氣中氨氣和硫化氫含量的檢測。消毒前后分別取雞籠上、中、下層中間位置的3個點，使用氨氣檢測儀和硫化氫檢測儀檢測空氣NH3和H2S的含量。

③種雞精神狀態(tài)和生產(chǎn)性能的檢測。試驗期間每天分別于消毒過程中以及消毒后2、8、12、24 h，觀察種雞群精神狀態(tài)和行為是否有異常變化，記錄每日死淘數(shù)和產(chǎn)蛋數(shù)量。

1.4?數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計與分析，使用Duancan氏法進行組間多重比較，結果以“平均值±標準差”表示。

2?結果與分析

2.1?臭氧水對空舍期雞舍的消毒效果

不同消毒方法對雞舍內(nèi)沉降菌殺滅情況見表1。由表1可知，雞舍消毒前，試驗組與對照組空氣沉降菌數(shù)量無顯著差異（P>0.05）。采用臭氧水消毒30 min組和60 min處理組的空氣沉降菌數(shù)量極顯著低于臭氧水消毒15 min組和福爾馬林消毒（對照）組（P<0.01），處理60 min組略高于30 min組（P>0.05），處理15 min組與福爾馬林消毒組差異不顯著（P>0.05）。臭氧水消毒30 min 組和60 min處理組細菌殺滅率均顯著高于臭氧水消毒15 min組和福爾馬林消毒組（P<0.05），但臭氧水消毒15 min組與福爾馬林消毒組間差異不顯著（P>0.05）。

不同消毒方法對雞舍物體表面細菌的殺滅情況見表2。由表2可知，雞舍消毒前，試驗組與對照組環(huán)境表面菌落數(shù)量無顯著差異（P>0.05）。采用臭氧水消毒30 min組和60 min處理組的環(huán)境表面菌落數(shù)量極顯著低于臭氧水消毒15 min組與福爾馬林消毒（對照）組（P<0.01），處理60 min組略高于處理30 min組（P>0.05），處理15 min組和福爾馬林消毒組差異不顯著（P>0.05）。臭氧水消毒30 min組和處理60 min處理組細菌殺滅率均顯著高于臭氧水消毒15 min組和福爾馬林消毒組（P<0.05），但臭氧水消毒15 min組與福爾馬林消毒組間差異不顯著（P>0.05）。

2.2?臭氧水對雞舍水線的消毒效果

消毒前水中菌落總數(shù)為1.02×104 CFU/mL，大腸桿菌近似數(shù)為150 MPN/L;消毒后菌落總數(shù)為98 CFU/mL（菌落殺滅率為99.04%），大腸桿菌近似數(shù)為0 MPN/L。

2.3?臭氧水帶雞消毒效果

2.3.1?帶雞消毒的殺菌效果。使用10 mg/L臭氧水帶雞消毒的殺菌效果見表3。由表3可知，臭氧水帶雞消毒舍內(nèi)菌落數(shù)大幅度減少，細菌殺滅率達90.35%;消毒后雞舍內(nèi)氨氣和硫化氫的含量較消毒前分別減少84.15%和81.22%。

2.3.2?種雞耐臭氧能力。

試驗期間，試驗組和對照組雞群每日精神狀態(tài)、采食、飲水等行為均無任何異常變化，每日產(chǎn)蛋情況見表4。由表4可知，試驗期間試驗組產(chǎn)蛋總數(shù)586枚，次品蛋總數(shù)共9枚，產(chǎn)蛋率為83.71%;對照組產(chǎn)蛋總數(shù)583枚，次品蛋總數(shù)共10枚，產(chǎn)蛋率為83.28%。試驗組與對照組日均產(chǎn)蛋率和蛋合格率均無顯著差異（P>0.05）。

3?討論

3.1?臭氧水對空舍期雞舍的消毒效果

朱桂華等[10]利用臭氧對醫(yī)院檢驗單進行消毒，發(fā)現(xiàn)臭氧濃度0.434 mg/L，消毒熏蒸30 min，未檢出細菌，表明臭氧對空氣細菌和物體表面細菌均具有良好的殺滅效果。該試驗結果顯示，種雞舍空舍期采用20 mg/L的臭氧水噴霧消毒30和60 min對雞舍內(nèi)沉降菌及物體表面細菌殺滅率達98%以上，顯著優(yōu)于福爾馬林熏蒸消毒處理。臭氧消毒機理主要是通過其強氧化作用破壞微生物細胞壁膜表面成分來滅活微生物，穿透細胞膜而破壞脂蛋白和脂多糖，改變細胞之間的通透性，導致細胞溶解、死亡[11]，臭氧的氧化作用可直接破壞組織細胞的RNA與DNA物質(zhì)，滅活病毒，所以臭氧水的消毒殺菌速度極快，消毒后臭氧可自然分解為氧氣。臭氧水消毒具有無毒、無殘留的優(yōu)點，可替代甲醛消毒方法應用于家禽養(yǎng)殖。

3.2?臭氧水對雞舍水線的消毒效果

秦瓏等[12]研究表明，1.26 mg/L臭氧水作用15 min可以很好地殺滅水中大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，但殺滅芽孢桿菌需要更久的時間?！吨腥A人民共和國國家標準 生活飲用水衛(wèi)生標準》中規(guī)定飲用水菌落總數(shù)小于100 CFU/mL，大腸桿菌不得檢出。該試驗中采用20 mg/L的臭氧水處理30 min，水線內(nèi)飲用水中菌落總數(shù)為98 CFU/mL，大腸桿菌近似數(shù)為0 MPN/L，表明臭氧處理后水質(zhì)符合飲用水衛(wèi)生微生物標準，可有效避免水中的致病菌危害種雞健康。

3.3?臭氧水帶雞消毒效果

邢秀珍等[13]研究表明臭氧消毒對雛雞和成雞健康均未見明顯不良影響。沈林園等[6]研究發(fā)現(xiàn)通過臭氧水處理飲用水后飼喂的雞，發(fā)病現(xiàn)象明顯減少，藥物投入減少，死淘率降低，提高了經(jīng)濟效益。該試驗中的帶雞消毒處理是在喂料時進行的，依據(jù)是喂料時雞啄料易起粉塵，通過噴霧有降低空氣粉塵的作用，噴霧循環(huán)周期設置成每分鐘開12 s、停48 s的方式，可以有效避免連續(xù)噴霧形成水滴，引起雞感冒著涼。試驗中臭氧水連續(xù)處理7 d，種雞活動、采食量及產(chǎn)蛋率與對照組相比均無明顯變化，解剖觀察發(fā)現(xiàn)試驗雞的各組織器官均無病理變化，表明種雞可耐受臭氧水的消毒處理方式，臭氧水在種雞養(yǎng)殖生產(chǎn)中應用是安全的。

3.4?臭氧水用于雞舍內(nèi)改善空氣質(zhì)量

家禽糞便中未消化的蛋白質(zhì)等有機物，在微生物作用下生成氨氣及硫化氫等氣體，具有刺激性臭味，可以直接危害家禽的呼吸道，導致食欲下降， 生產(chǎn)性能降低、免疫機能下降及導致呼吸中樞麻痹等。氨氣可感濃度為 5.3 mg/kg，水溶性強，正常禽舍氨氣的濃度應不高于 25 mg/kg，當氨氣濃度高于25 mg/kg時會對雞造成多種危害。趙麗榮[14]研究表明，當雞舍內(nèi)氨氣濃度高于78.3 mg/kg 時，產(chǎn)蛋率下降 43.1%。硫化氫濃度不應超過10 mg/kg。研究表明，用臭氧泡制臭氧水供給禽類飲用可改變禽腸道微生態(tài)環(huán)境，減少以宿主營養(yǎng)為生的細菌數(shù)量，減少宿主營養(yǎng)消耗，還使有益菌分泌的淀粉酶活性增強，提高了禽類尤其是幼禽對飼料營養(yǎng)的利用率，促使禽類健康生長，臭氧水還能有效預防雛雞白痢等腸道疾病[15]。臭氧去除異味性能極好，依靠其強氧化性能可快速分解具有臭味成分的NH3、H2S等[16]。該試驗結果表明，每日對雞群采用臭氧消毒處理30 min，可以有效減少NH3和H2S的產(chǎn)生量;NH3和H2S濃度低于可感知濃度，表明臭氧水消毒可以改善雞舍內(nèi)空氣質(zhì)量。

4?結論

種雞空舍期使用20 mg/L臭氧水噴霧處理30 min，可以有效殺滅舍內(nèi)細菌，可代替甲醛熏蒸消毒方式;采用20 mg/L的臭氧水浸泡水線消毒30 min，水中微生物含量可達到國家飲用水衛(wèi)生微生物標準;使用10 mg/L的臭氧水帶雞噴霧消毒30 min/d，可作為日常管理中的疾病預防和改善舍內(nèi)空氣質(zhì)量的良好處理方式。

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