過氧乙酸氧化法檢測尿碘水平的方法探討

羅秀霞，上官美榮，劉富菊，李瓊英，韓學娉，李 夢，葉志中△

(1.深圳市福田區(qū)風濕病專科醫(yī)院風濕病實驗室，廣東深圳 518040；2.深圳市賽爾生物技術有限公司，廣東深圳 518055)

碘是人體各系統特別是甲狀腺激素合成和神經系統發(fā)育必不可少的微量元素，有“智力元素”之稱，主要來源于食物(80%～90%)和飲水(10%～20%)[1-2]。碘缺乏和過量均可能導致甲狀腺疾病，對人體構成一系列損害[3]，特別是孕婦缺碘可能會導致胎兒或嬰幼兒不可逆轉的智力低下和精神運動障礙[4]。為此，中國在1994年實行了“全民食鹽加碘”的綜合防治策略，建立了比較完善的監(jiān)測體系。碘主要通過腎臟和消化道排出，人體約90%的碘是經腎臟排出，在個體代謝穩(wěn)定的情況下，腎臟碘排出量基本可以反映出人體碘攝入量[5]。所以，尿碘水平目前已經成為衡量人群碘營養(yǎng)狀況的重要指標，廣泛應用于醫(yī)院臨床診治、醫(yī)療保健和疾病防治等方面[6]。

目前，尿碘檢測方法主要有電感耦合等離子體-質譜法、中子消化法、分光光度法、氣相色譜法等。中國現行的用于檢測尿碘的標準方法是原衛(wèi)生部在2016年新頒布的砷鈰催化分光光度法(國標法)[7]，此方法具有重復性好、抗干擾能力強、靈敏度高等優(yōu)點，但是此法中的三氧化二砷有劇毒，且手工步驟較多，操作復雜，存在一定的局限性和危險性。本文采用的過氧乙酸氧化法是一種快速定量檢測尿液碘的方法，該方法采用活性炭純化尿液，除去干擾物質[8]；此方法操作簡單、快速，大大減少實驗的人力、物力，試劑中不含有毒物質，避免了有毒物質的污染，測量結果準確、可靠，具有很高的臨床應用價值。本文選擇了80份尿液標本，分別用過氧乙酸氧化法與國標法對標本進行檢測，進一步證明過氧乙酸氧化法結果可靠、準確，現報道如下。

1 材料與方法

1.1尿樣標本來源 尿樣標本為深圳市福田區(qū)風濕病?？漆t(yī)院提供的隨機成人標本80份(含孕婦)，收集中段尿，分成2份，每份不少于10 mL，用一次性密封容器保存。其中一份用過氧乙酸氧化法進行定量測定，一份用國標法測定。

1.2儀器與試劑 酶標分析儀購自中國上?？迫A實驗系統有限公司，型號ST-360；旋渦混合器、振蕩器均購自中國江蘇康健醫(yī)療用品有限公司，型號分別為XH-B、KJ-201A；移液器購自中國北京大龍興創(chuàng)實驗儀器有限公司；秒表購自中國北京天根生化科技有限公司；超級恒溫水浴箱購自英國Prima儀器有限公司；恒溫尿碘消解儀購自中國上海凌初環(huán)保儀器有限公司，型號HD120-T26；可見分光光度計購自中國上海精密科學儀器有限公司，型號7230G。試劑、標準品、參考品、尿碘測定試劑盒購自中國深圳市賽爾生物技術有限公司)；凍干人尿中碘成分分析標準物質購自國家碘缺乏病參照實驗室，型號GBW 09110r；高水平碘標準液、中水平碘標準液、低水平碘標準液均購自中國深圳市賽爾生物技術有限公司。

1.3方法

1.3.1測定方法 過氧乙酸氧化法：先后取5 mL標本稀釋液和1 mL尿液標本加入到尿液處理滴瓶中純化尿液，收集純化后尿液于試管中，取150 μL純化后尿液加到微孔板中，然后分別加入顯色劑50 μL，氧化劑50 μL，震蕩混勻，避光反應后用酶標儀單波長450 nm測其吸光度值(A值)，計算標本中碘的水平。

國標法：取各尿樣標本0.25 mL置于試管中，分別加入1 mL 1 mol/L過硫酸銨溶液，混勻后置于100 ℃的恒溫尿碘消解儀中消化60 min，冷卻至室溫后加入2.5 mL 0.025 mol/L亞砷酸溶液，混勻后放置15 min，間隔20 s或30 s加入0.30 mL 0.025 mol/L硫酸鈰銨溶液反應，上分光光度計測量。

1.3.2線性范圍 取用國家標準物質凍干人尿中碘成分分析標準物質(GBW 09110r)標定的高水平碘標準液，標定值為300 μg/L，做系列稀釋，分別稀釋成300、270、240、210、180、150、120、90、60、30、15、7.5、5、3.75 μg/L。以高水平碘標準液的水平為橫坐標，其相對應的A值為縱坐標，進行線性分析。

1.3.3精密性 取用國家標準物質凍干人尿中碘成分分析標準物質(GBW 09110r)標定的高水平碘標準液、中水平碘標準液和低水平碘標準液，高、中、低值分別為300、150、100 μg/L，各重復測定10次，計算精密性。

1.3.4準確度 (1)尿碘國家標準物質的測定：將國家標準物質凍干人尿中碘成分分析標準物質(GBW 09110r、GBW 09109k、GBW 09108o)作為待測標本，重復測定6次，計算相對偏倚。(2)加標回收試驗：取經測定水平為141.8 μg/L的成人尿樣作為本底，分別加入水平分別為50、100、150 μg/L的碘標準液，計算回收率。

1.3.5特異性(干擾實驗) 取國家標準物質凍干人尿中碘成分分析標準物質(GBW 09110r)，加水復原后，分成4份，分別加入20 mmol/L的維生素C、0.1 mol/L的NaCl、0.1 mol/L的NaBr和100 μmol/L的膽紅素，每份標本重復測定6次，取測試水平結果均值，計算其相對偏倚。

1.3.6過氧乙酸氧化法與國標法比較 選取80份尿液標本分別用過氧乙酸氧化法與國標法對同一個樣品進行測定，并對數據進行統計分析。

1.4統計學處理 本實驗采用Excel2007錄入結果，用SPSS19.0軟件進行配對t檢驗統計分析。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1線性范圍 將高水平碘標準液(300 μg/L)，按照一定的比例進行系列稀釋，制備14個不同碘水平的標本，各個水平重復測6次，以碘離子水平與相對應的A均值進行線性回歸分析。線性范圍在5～300 μg/L，線性相關系數r>0.990，符合檢驗要求。

2.2精密性 用過氧乙酸氧化法定量測定高水平(300 μg/L)、中水平(150 μg/L)、低水平(100 μg/L) 3個水平碘標準溶液，分別重復測定10次。高水平、中水平、低水平3個水平變異系數(CV)值分別為1.5%、2.4%和2.2%。CV值均低于5%，表明過氧乙酸氧化法的精密性很好，符合生物標本分析要求。見表1。

表1 碘標準液精密性分析(A值)

2.3尿碘國家標準物質測定 用過氧乙酸氧化法定量測定凍干人尿中碘成分分析標準物質，重復測定6次高、中、低3個水平的相對偏倚B分別為3.9%、2.0%、0.1%。相對偏倚均低于5%，表明過氧乙酸氧化法的準確度良好，測定結果符合要求。見表2。

表2 凍干人尿中碘成分分析標準物質準確度結果分析

2.4加標回收試驗 取健康成人尿樣，分別加入50、100、150 μg/L的碘標準液，每個加標樣品需重復測定6次，經計算回收率在96.49%～101.25%，平均回收率為98.88%，表明此方法測定尿碘的回收率良好，符合測定要求。見表3、4。

表3 加標回收試驗結果(μg/L)

表4 加標回收試驗回收率計算結果(%)

2.5特異性 根據尿液中成分，考察了維生素C、NaCl、NaBr和膽紅素等對實驗的干擾。維生素C、NaCl、NaBr和膽紅素測得的結果與標準值的相對偏倚分別為2.5%、1.8%、1.5%、2.3%，表明過氧乙酸氧化法中的尿液處理滴瓶(純化裝置)可以吸附這些干擾物質，消除了這些干擾物質對于過氧乙酸氧化法的測定結果的影響。見表5。

表5 干擾試驗測定結果

2.6過氧乙酸氧化法與國標法比較 在相同的實驗條件下，分別用兩種方法對80份標本中碘水平進行檢測，對結果進行統計學分析，結果表明兩種方法之間差異無統計學意義(t=0.027，P=0.980)。

3 討 論

碘是合成甲狀腺激素必需的微量元素，其生物學作用是通過在甲狀腺內合成甲狀腺激素來實現的，甲狀腺激素的主要功能是促進機體的新陳代謝以及青少年和胎兒的發(fā)育與成長，尤其他對智力發(fā)育和神經系統的影響更為重要。有大量研究表明，碘攝入過量，尤其是食用過多碘鹽時，會導致甲狀腺炎和甲狀腺功能減退等癥[9-10]。因此，利用尿碘水平來評價人群碘攝入情況，對于檢測和治療碘引起的甲狀腺疾病具有重要意義。

目前中國尿碘檢測多采用行業(yè)標準WS/T 107-2016推薦的方法進行，但該法操作復雜，而過氧乙酸氧化法具有多種優(yōu)勢，該法是在1998年歐洲內分泌學會推薦，因此，建立基于過氧乙酸氧化法的尿碘檢測常規(guī)方法十分必要。

在本研究中，筆者建立了一種快速、準確的檢測尿碘的方法，各項性能指標均能達到臨床檢測要求，其中，線性范圍5～300 μg/L，在此范圍內標準曲線線性r>0.990；CV值和相對偏倚均低于6%；加標回收率在96.49%～101.25%；維生素C、NaCl、NaBr和膽紅素對尿碘標準物質的干擾的相對偏倚均低于5%，說明過氧乙酸氧化法中的純化裝置可以消除這些干擾物質對于過氧乙酸氧化法測定結果的影響；采用80份尿液標本分別用此法和國標法進行平行測定結果分析，結果比較差異無統計學意義(P>0.05)，進一步說明過氧乙酸氧化法的準確度較高。

綜上所述，過氧乙酸氧化法具有操作簡單、重復性好、準確度高、特異性好、可批量操作，無需昂貴儀器和設備等的優(yōu)點，適用于尿液中碘水平的測定，是一種值得推廣的快速檢測尿碘的方法。